Che cos'è LC-MS — analisi?
La LC-MS è una tecnica ibrida in cui i componenti separati mediante cromatografia liquida vengono trasferiti a uno spettrometro di massa tramite un'interfaccia (solitamente ionizzazione elettrospray). La cromatografia fornisce la separazione e la misurazione della massa fornisce l'identificazione tramite la massa molecolare.
Scopo di LC-MS — analisi
Lo scopo è separare e identificare i composti non volatili, polari o termicamente labili che non possono essere analizzati mediante GC. Con questa tecnica vengono studiati peptidi, proteine, metaboliti dei farmaci e residui polari.
A quali prodotti si applica LC-MS — analisi?
- Principi attivi farmaceutici e loro metaboliti
- Livelli di farmaci nei campioni biologici
- Residui di pesticidi polari e farmaci veterinari negli alimenti
- Micotossine
- Caratterizzazione di peptidi e proteine
In quali settori si utilizza LC-MS — analisi?
Norme relative a LC-MS — analisi
- ICH Q2(R2) (convalida delle procedure analitiche)
- Farmacopea Europea 2.2.43 (spettrometria di massa)
- EN 15662 (QuEChERS ekstraksiyonu)
- UE 2021/808 (esecuzione dei metodi relativi ai residui di farmaci veterinari)
Condizioni di LC-MS — analisi
- ionizzazione
- L'ESI è comune; L'APCI è preferito nei composti non polari
- Polarite
- Modalità ioni positivi o negativi, a seconda dell'analita
- Hareketli faz
- Buffer volatile richiesto; Non vengono utilizzati sali che interrompono la ionizzazione
- Matris etkisi
- Dovrebbe essere valutata la soppressione ionica; si consiglia la calibrazione corrispondente alla matrice
Apparecchiatura per LC-MS — analisi
- Sistema HPLC/UPLC
- Sorgente ionica Electrospray o APCI
- Analizzatore di massa (quadrupolo singolo o alta risoluzione)
- Sistema di vuoto e generatore di azoto
- Software di elaborazione dati
Requisiti del campione per LC-MS — analisi
- Il campione deve essere reso solubile in un tampone volatile
- Deve essere privo di sali e detergenti che interrompono la ionizzazione
- La precipitazione proteica o SPE viene applicata ai campioni biologici
- Il campione deve essere inviato nella catena del freddo
Durata di LC-MS — analisi
Una corsa dura generalmente meno di 30 minuti. Se sono necessari lo sviluppo del metodo e la valutazione dell’effetto matrice, la durata totale si estende in modo significativo.
Procedura di LC-MS — analisi
- 1Il campione viene estratto e ripulito dai componenti interferenti.
- 2Viene aggiunto uno standard interno.
- 3La separazione viene eseguita sulla colonna LC.
- 4L'uscita della colonna viene alimentata alla sorgente ionica e i componenti vengono ionizzati.
- 5Lo spettro di massa viene registrato.
- 6L'identificazione viene effettuata concordando la massa e il tempo di ritenzione.
- 7La quantificazione viene calcolata tramite lo standard interno.
Criteri di accettazione di LC-MS — analisi
Un metodo produce un risultato; non pone un limite. Se il risultato è accettabile è determinato dalla normativa o dalle specifiche a cui è soggetto il prodotto.
Valutazione dei risultati
La soppressione ionica è la più importante fonte di errore nella LC-MS; viene quindi utilizzato uno standard interno e, ove possibile, uno standard marcato con isotopi. L'affidabilità del risultato dipende dall'effetto matrice misurato durante la validazione del metodo.
Rapporto di LC-MS — analisi
- Descrizione del campione, data di ricevimento e numero di laboratorio
- Metodo applicato ed eventuale norma di riferimento
- Strumento e condizioni di misura
- Fasi di preparazione del campione
- Risultati e unità di misura
- Incertezza di misura (se richiesta)
- Una dichiarazione secondo cui i risultati si riferiscono solo al campione presentato per il test
Accreditamento
EUROLAB detiene un accreditamento riconosciuto a livello internazionale ottenuto da organismi di accreditamento parte degli accordi di riconoscimento multilaterale IAF e ILAC, secondo ISO / IEC 17025 per prove di laboratorio, ISO / IEC 17020 per ispezione e sorveglianza e ISO / IEC 17021-1 e ISO / IEC 17065 per certificazione di sistema e prodotto. Questa catena garantisce che i rapporti e i certificati emessi siano accettati in tutto il mondo.
Se questo test può essere offerto nell'ambito accreditato dipende dal prodotto e dallo standard applicato; poiché l'accreditamento è basato sul metodo, l'ambito viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Ambito e autorizzazioniRegolamenti correlati
- EU 37/2010 (limiti residui farmaci veterinari)
- UE 2023/915 (contaminanti negli alimenti)
- ICH M10 (convalida del metodo bioanalitico)
Pagine in cui viene utilizzato questo metodo
Metodi analitici — Cosa fa questo gruppo di metodi?
La sezione seguente descrive l'ambito a cui appartiene la prova LC-MS — analisi; le condizioni e i criteri di accettazione di questa prova specifica sono riportati nelle sezioni precedenti. L'ambito specifico del vostro prodotto viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Le pagine sui metodi analitici sono pagine su una TECNICA DI MISURA piuttosto che su una prova. Questa differenza è importante: «prova alla nebbia salina» è una prova e risponde a una domanda; «ICP-MS» è una tecnica e viene utilizzata in decine di prove diverse. A volte l'utente non cerca la prova ma la tecnica, perché il nome del metodo è ciò che compare nella sua specifica.
Questa distinzione diventa decisiva nella scelta di un laboratorio. Quando un cliente chiede un'«analisi dei metalli pesanti», la vera domanda è con quale tecnica verrà eseguita: la XRF è rapida e non distruttiva ma non distingue i composti; l'AAS è economica per un singolo elemento; l'ICP-OES rileva più elementi; l'ICP-MS vede livelli in tracce. Lo stesso campione fornisce risultati con limiti di rilevazione e incertezze diverse tra le quattro tecniche.
La scelta del metodo avviene secondo tre criteri. LIMITE DI RILEVAZIONE: la concentrazione ricercata rientra nell'intervallo che il metodo può rilevare? COMPATIBILITÀ DI MATRICE: la matrice del campione (plastica, alimento, suolo, metallo) è una che il metodo può gestire, ed è richiesto un pretrattamento? LEGAME CON LA SPECIFICA: la norma di prodotto o la normativa impone un metodo particolare? Il terzo spesso prevale sui primi due — la specifica vincola il metodo.
Le pagine dei metodi creano una CATENA. Una tecnica è legata alle pagine di test in cui viene utilizzata, agli standard su cui si basano, alla legislazione a cui quegli standard sono legati e, in ultima analisi, ai regimi di accesso al mercato. La catena di esempio nel documento sorgente funziona in questo modo: XRF → analisi dei metalli → conformità RoHS → restrizione sui metalli pesanti → pagine di rivestimento. Qualunque sia il collegamento da cui accede l'utente, raggiunge gli altri.
In questa famiglia, la preparazione del campione rappresenta la metà invisibile del risultato ed è una fonte di errore maggiore della tecnica stessa. Il metodo di digestione, il grado di macinazione, il solvente di estrazione e il rapporto di diluizione modificano notevolmente il risultato. Lo stesso campione sullo stesso strumento dà un risultato diverso con una preparazione diversa; la definizione del metodo copre quindi anche la preparazione.
La calibrazione e la verifica sono il terzo componente determinante. Uno strumento viene calibrato con materiale di riferimento certificato, la curva di calibrazione viene verificata periodicamente e in ciascun lotto viene analizzato un campione di controllo. Senza questi passaggi un numero prodotto non è tracciabile anche se lo strumento funziona correttamente.
Gruppi di metodi in questo ambito
Analisi elementare
ICP-OES, ICP-MS, AAS e XRF. Differiscono nel limite di rilevamento, nella tolleranza della matrice e nella capacità multielemento.
Cromatografia
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS e cromatografia ionica. Separa una miscela nei suoi componenti e li misura separatamente.
Spettroscopia
FTIR, Raman, UV-Vis ed emissione ottica. Per l'identità del materiale, l'identificazione del gruppo funzionale e la composizione della lega.
Analisi termica
DSC, TGA, DMA e dilatometria. Temperature di transizione, composizione, decomposizione e comportamento dimensionale.
Microscopia e imaging
Microscopia ottica, SEM-EDS, radiografia e tomografia. Struttura, difetti e distribuzione degli elementi.
Chimica classica (per via umida)
Titolazione, gravimetria e colorimetria. Utilizzato come metodo di riferimento e per confermare i risultati strumentali.
Confusioni frequenti in questo ambito
- XRF è uno strumento di screening; vede gli elementi e non distingue i composti. Una decisione su un composto limitato richiede la conferma mediante chimica umida.
- L'espressione «non rilevato» non è prova di assenza; va letta insieme al limite di rilevazione del metodo.
- La specifica vincola il metodo. Un metodo tecnicamente migliore non viene accettato se la specifica ne richiede un altro.
- La preparazione del campione è parte del risultato; un verbale che non ne dichiari la preparazione non è riproducibile.
- I risultati ottenuti con tecniche diverse non possono essere confrontati direttamente; i loro limiti di rilevamento e le incertezze differiscono.
- Una pagina di metodo non è una pagina di test; quale metodo si applica a quale test deriva dalla norma di prodotto.
Quali decisioni supportano questi risultati
- Corrispondenza del metodo della specifica con l'ambito del laboratorio
- Scelta del metodo in base al limite di rilevamento e alla compatibilità della matrice
- Conferma di un risultato strumentale con un metodo di riferimento
- Eliminazione delle deviazioni dovute alla preparazione del campione
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Domande frequenti su LC-MS — analisi
Qual è la differenza tra LC-MS e LC-MS/MS?
LC-MS esegue una singola misurazione di massa. LC-MS/MS seleziona e frammenta lo ione precursore e monitora gli ioni prodotto; è molto più selettivo e ha un limite di quantificazione inferiore in matrici complesse.
Perché è necessario un buffer volatile?
I sali non volatili si accumulano nella sorgente ionica, sopprimendo il segnale e contaminando lo strumento. Vengono quindi utilizzati tamponi volatili come acido formico o acetato di ammonio.