Che cos'è LC-MS/MS — analisi?
LC-MS/MS è un sistema in cui uno spettrometro di massa a triplo quadrupolo è accoppiato dopo la cromatografia liquida. Il primo analizzatore seleziona lo ione precursore, la cella di collisione lo frammenta e il terzo analizzatore monitora gli ioni prodotto. La coppia precursore-prodotto monitorata è chiamata transizione (MRM).
Scopo di LC-MS/MS — analisi
Lo scopo è misurare in modo affidabile concentrazioni molto basse in campioni con intensa interferenza della matrice. Con questa tecnica viene eseguita l'analisi di tracce di sangue, plasma, alimenti e campioni ambientali.
A quali prodotti si applica LC-MS/MS — analisi?
- Livelli di farmaci e metaboliti in campioni biologici
- Residui di micotossine e farmaci veterinari negli alimenti
- Impurezze nitrosammine nei prodotti farmaceutici
- Inquinanti polari nell'acqua
- Screening dell'adulterazione nei prodotti integratori
In quali settori si utilizza LC-MS/MS — analisi?
Norme relative a LC-MS/MS — analisi
- ICH M10 (convalida del metodo bioanalitico)
- UE 2021/808 (criteri di prestazione per i metodi sui residui)
- EN 15662 (QuEChERS)
- Linee guida ICH M7/EMA sulle nitrosammine
Condizioni di LC-MS/MS — analisi
- Monitoraggio
- Almeno due passaggi MRM per ciascun analita
- Teyit
- Compatibilità del rapporto ionico inter-transizione con il riferimento
- norma interna
- Se possibile, viene utilizzato un analogo marcato con isotopi
- Taratura
- Calibrazione corrispondente alla matrice se è presente l'effetto matrice
Apparecchiatura per LC-MS/MS — analisi
- Sistema UPLC/HPLC
- Spettrometro di massa a triplo quadrupolo
- Sorgente ionica elettrospray
- SPE e unità automatizzate di preparazione dei campioni
- Generatore di azoto e sistema di vuoto
Requisiti del campione per LC-MS/MS — analisi
- Per i campioni biologici sono necessarie la precipitazione delle proteine, l'estrazione liquido-liquido o la SPE
- L'omogeneizzazione e l'estrazione di tipo QuEChERS vengono applicate agli alimenti
- Il campione deve essere inviato nella catena del freddo e in provette adeguate
- L'elenco degli analiti ricercati deve essere definito fin dall'inizio
Durata di LC-MS/MS — analisi
Il tempo di esecuzione è per lo più inferiore a 15 minuti; la preparazione del campione e la validazione del metodo determinano la durata principale.
Procedura di LC-MS/MS — analisi
- 1Il campione viene omogeneizzato e viene aggiunto lo standard interno.
- 2Vengono applicate l'estrazione e la pulizia.
- 3L'estratto viene iniettato nella colonna LC.
- 4Le transizioni MRM vengono monitorate per gli analiti target.
- 5I rapporti ionici vengono confrontati con il riferimento.
- 6La quantità viene calcolata tramite la curva di calibrazione.
- 7Vengono valutati i risultati del recupero, del bianco e del controllo di qualità.
Criteri di accettazione di LC-MS/MS — analisi
L'accettabilità del risultato viene valutata rispetto ai limiti previsti dalla normativa relativa ai residui, ai contaminanti o alle impurità. Il metodo non definisce un limite.
Valutazione dei risultati
Il risultato è significativo all'interno dell'intervallo di lavoro convalidato del metodo. I valori al di sotto dell'intervallo vengono riportati come "al di sotto del limite di quantificazione" anziché essere forzati in un valore numerico.
Rapporto di LC-MS/MS — analisi
- Descrizione del campione, data di ricevimento e numero di laboratorio
- Metodo applicato ed eventuale norma di riferimento
- Strumento e condizioni di misura
- Fasi di preparazione del campione
- Risultati e unità di misura
- Incertezza di misura (se richiesta)
- Una dichiarazione secondo cui i risultati si riferiscono solo al campione presentato per il test
Accreditamento
EUROLAB detiene un accreditamento riconosciuto a livello internazionale ottenuto da organismi di accreditamento parte degli accordi di riconoscimento multilaterale IAF e ILAC, secondo ISO / IEC 17025 per prove di laboratorio, ISO / IEC 17020 per ispezione e sorveglianza e ISO / IEC 17021-1 e ISO / IEC 17065 per certificazione di sistema e prodotto. Questa catena garantisce che i rapporti e i certificati emessi siano accettati in tutto il mondo.
Se questo test può essere offerto nell'ambito accreditato dipende dal prodotto e dallo standard applicato; poiché l'accreditamento è basato sul metodo, l'ambito viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Ambito e autorizzazioniRegolamenti correlati
- UE 2023/915 (contaminanti negli alimenti)
- UE 37/2010 (residui di farmaci veterinari)
- Valutazioni delle nitrosammine da parte dell'EMA/CHMP
Pagine in cui viene utilizzato questo metodo
Metodi analitici — Cosa fa questo gruppo di metodi?
La sezione seguente descrive l'ambito a cui appartiene la prova LC-MS/MS — analisi; le condizioni e i criteri di accettazione di questa prova specifica sono riportati nelle sezioni precedenti. L'ambito specifico del vostro prodotto viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Le pagine sui metodi analitici sono pagine su una TECNICA DI MISURA piuttosto che su una prova. Questa differenza è importante: «prova alla nebbia salina» è una prova e risponde a una domanda; «ICP-MS» è una tecnica e viene utilizzata in decine di prove diverse. A volte l'utente non cerca la prova ma la tecnica, perché il nome del metodo è ciò che compare nella sua specifica.
Questa distinzione diventa decisiva nella scelta di un laboratorio. Quando un cliente chiede un'«analisi dei metalli pesanti», la vera domanda è con quale tecnica verrà eseguita: la XRF è rapida e non distruttiva ma non distingue i composti; l'AAS è economica per un singolo elemento; l'ICP-OES rileva più elementi; l'ICP-MS vede livelli in tracce. Lo stesso campione fornisce risultati con limiti di rilevazione e incertezze diverse tra le quattro tecniche.
La scelta del metodo avviene secondo tre criteri. LIMITE DI RILEVAZIONE: la concentrazione ricercata rientra nell'intervallo che il metodo può rilevare? COMPATIBILITÀ DI MATRICE: la matrice del campione (plastica, alimento, suolo, metallo) è una che il metodo può gestire, ed è richiesto un pretrattamento? LEGAME CON LA SPECIFICA: la norma di prodotto o la normativa impone un metodo particolare? Il terzo spesso prevale sui primi due — la specifica vincola il metodo.
Le pagine dei metodi creano una CATENA. Una tecnica è legata alle pagine di test in cui viene utilizzata, agli standard su cui si basano, alla legislazione a cui quegli standard sono legati e, in ultima analisi, ai regimi di accesso al mercato. La catena di esempio nel documento sorgente funziona in questo modo: XRF → analisi dei metalli → conformità RoHS → restrizione sui metalli pesanti → pagine di rivestimento. Qualunque sia il collegamento da cui accede l'utente, raggiunge gli altri.
In questa famiglia, la preparazione del campione rappresenta la metà invisibile del risultato ed è una fonte di errore maggiore della tecnica stessa. Il metodo di digestione, il grado di macinazione, il solvente di estrazione e il rapporto di diluizione modificano notevolmente il risultato. Lo stesso campione sullo stesso strumento dà un risultato diverso con una preparazione diversa; la definizione del metodo copre quindi anche la preparazione.
La calibrazione e la verifica sono il terzo componente determinante. Uno strumento viene calibrato con materiale di riferimento certificato, la curva di calibrazione viene verificata periodicamente e in ciascun lotto viene analizzato un campione di controllo. Senza questi passaggi un numero prodotto non è tracciabile anche se lo strumento funziona correttamente.
Gruppi di metodi in questo ambito
Analisi elementare
ICP-OES, ICP-MS, AAS e XRF. Differiscono nel limite di rilevamento, nella tolleranza della matrice e nella capacità multielemento.
Cromatografia
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS e cromatografia ionica. Separa una miscela nei suoi componenti e li misura separatamente.
Spettroscopia
FTIR, Raman, UV-Vis ed emissione ottica. Per l'identità del materiale, l'identificazione del gruppo funzionale e la composizione della lega.
Analisi termica
DSC, TGA, DMA e dilatometria. Temperature di transizione, composizione, decomposizione e comportamento dimensionale.
Microscopia e imaging
Microscopia ottica, SEM-EDS, radiografia e tomografia. Struttura, difetti e distribuzione degli elementi.
Chimica classica (per via umida)
Titolazione, gravimetria e colorimetria. Utilizzato come metodo di riferimento e per confermare i risultati strumentali.
Confusioni frequenti in questo ambito
- XRF è uno strumento di screening; vede gli elementi e non distingue i composti. Una decisione su un composto limitato richiede la conferma mediante chimica umida.
- L'espressione «non rilevato» non è prova di assenza; va letta insieme al limite di rilevazione del metodo.
- La specifica vincola il metodo. Un metodo tecnicamente migliore non viene accettato se la specifica ne richiede un altro.
- La preparazione del campione è parte del risultato; un verbale che non ne dichiari la preparazione non è riproducibile.
- I risultati ottenuti con tecniche diverse non possono essere confrontati direttamente; i loro limiti di rilevamento e le incertezze differiscono.
- Una pagina di metodo non è una pagina di test; quale metodo si applica a quale test deriva dalla norma di prodotto.
Quali decisioni supportano questi risultati
- Corrispondenza del metodo della specifica con l'ambito del laboratorio
- Scelta del metodo in base al limite di rilevamento e alla compatibilità della matrice
- Conferma di un risultato strumentale con un metodo di riferimento
- Eliminazione delle deviazioni dovute alla preparazione del campione
Test correlati
Domande frequenti su LC-MS/MS — analisi
Perché è importante uno standard interno marcato con isotopi?
Poiché mostra lo stesso comportamento chimico dell'analita, tiene traccia dell'effetto matrice e della perdita di estrazione uno a uno. Ciò migliora significativamente la precisione del risultato.
Cosa significa un risultato inferiore al limite di quantificazione?
Ciò non significa che l'analita sia assente, ma che è al di sotto del livello che il metodo può misurare in modo affidabile. Lo afferma il rapporto con un comunicato separato.