ما هو LC-MS — تحليل؟
LC-MS عبارة عن تقنية هجينة يتم فيها نقل المكونات المفصولة بواسطة تحليل كروماتوجرافي سائل إلى مطياف الكتلة عبر واجهة (عادةً التأين بالرش الكهربائي). يوفر التحليل اللوني الفصل، كما يوفر قياس الكتلة تحديد الهوية عبر الكتلة الجزيئية.
الغرض من LC-MS — تحليل
والغرض من ذلك هو فصل وتحديد المركبات غير المتطايرة أو القطبية أو الحرارية التي لا يمكن تحليلها بواسطة GC. تتم دراسة الببتيدات والبروتينات ومستقلبات الدواء والمخلفات القطبية باستخدام هذه التقنية.
على أي منتجات يُطبَّق LC-MS — تحليل؟
- المكونات النشطة الصيدلانية ومستقلباتها
- مستويات المخدرات في العينات البيولوجية
- بقايا المبيدات الحشرية والأدوية البيطرية في الأغذية
- السموم الفطرية
- توصيف الببتيد والبروتين
في أي قطاعات يُستخدم LC-MS — تحليل؟
المواصفات المتعلقة بـ LC-MS — تحليل
- ICH Q2(R2) (التحقق من صحة الإجراءات التحليلية)
- دستور الأدوية الأوروبي 2.2.43 (قياس الطيف الكتلي)
- EN 15662 (QuEChERS ekstraksiyonu)
- الاتحاد الأوروبي 808/2021 (أداء طرق بقايا الأدوية البيطرية)
شروط LC-MS — تحليل
- التأين
- ESI شائع. يفضل APCI في المركبات غير القطبية
- Polarite
- وضع الأيونات الموجبة أو السالبة — اعتمادًا على المادة التحليلية
- Hareketli faz
- مطلوب مخزن مؤقت متقلب؛ لا يتم استخدام الأملاح التي تعطل التأين
- Matris etkisi
- وينبغي تقييم قمع الأيونات؛ يوصى بمعايرة المصفوفة المتطابقة
جهاز LC-MS — تحليل
- نظام HPLC/UPLC
- Electrospray أو مصدر أيون APCI
- محلل الكتلة (رباعي واحد أو عالي الدقة)
- نظام فراغ ومولد النيتروجين
- برامج معالجة البيانات
متطلبات العينة لـ LC-MS — تحليل
- يجب أن تكون العينة قابلة للذوبان في مخزن مؤقت متطاير
- يجب أن يكون خالياً من الأملاح والمنظفات التي تعطل التأين
- يتم تطبيق ترسيب البروتين أو SPE على العينات البيولوجية
- يجب إرسال العينة في السلسلة الباردة
مدة LC-MS — تحليل
الجري عادة ما يكون أقل من 30 دقيقة. إذا كان تطوير الطريقة وتقييم تأثير المصفوفة مطلوبًا، فإن المدة الإجمالية تمتد بشكل كبير.
إجراء LC-MS — تحليل
- 1يتم استخراج العينة وتنظيفها من المكونات المسببة للتداخل.
- 2تمت إضافة معيار داخلي.
- 3يتم إجراء الفصل على عمود LC.
- 4يتم تغذية مخرج العمود إلى مصدر الأيونات ويتم تأين المكونات.
- 5يتم تسجيل طيف الكتلة.
- 6يتم تحديد الهوية من خلال الاتفاق على الكتلة ووقت الاحتفاظ.
- 7يتم حساب الكميات عبر المعيار الداخلي.
معايير قبول LC-MS — تحليل
الطريقة تنتج نتيجة. لا يضع حدا. يتم تحديد ما إذا كانت النتيجة مقبولة من خلال اللائحة أو المواصفات التي يخضع لها المنتج.
تقييم النتائج
يعد قمع الأيونات أهم مصدر للخطأ في LC-MS؛ ولذلك يتم استخدام معيار داخلي، ومعيار يحمل علامة النظائر حيثما أمكن ذلك. تعتمد موثوقية النتيجة على تأثير المصفوفة الذي تم قياسه أثناء التحقق من صحة الطريقة.
تقرير LC-MS — تحليل
- وصف العينة وتاريخ استلامها ورقم المختبر
- الطريقة المطبقة والمعيار المرجعي، إن وجد
- شروط الصك والقياس
- خطوات تحضير العينة
- نتائج القياس والوحدات
- عدم اليقين في القياس (إذا طلب ذلك)
- إقرار بأن النتائج تتعلق فقط بالعينة المقدمة للاختبار
الاعتماد
حصلت EUROLAB على اعتماد معترف به دوليًا تم الحصول عليه من هيئات الاعتماد الأطراف في ترتيبات الاعتراف المتعددة الأطراف IAF وILAC، بموجب ISO/IEC 17025 للاختبارات المعملية، وISO/IEC 17020 للتفتيش والمراقبة، وISO/IEC 17021-1 وISO/IEC 17065 لشهادة النظام والمنتجات. تضمن هذه السلسلة قبول التقارير والشهادات الصادرة في جميع أنحاء العالم.
تعتمد إمكانية تقديم هذا الاختبار ضمن النطاق المعتمد على منتجك والمعيار المطبق؛ وبما أن الاعتماد يعتمد على الطريقة، يتم تأكيد النطاق كتابيًا في مرحلة عرض الأسعار.
النطاق والتفويضاتاللوائح ذات الصلة
- الاتحاد الأوروبي 37/2010 (حدود بقايا الأدوية البيطرية)
- الاتحاد الأوروبي 915/2023 (الملوثات في الغذاء)
- ICH M10 (التحقق من صحة طريقة التحليل الحيوي)
الصفحات التي يتم فيها استخدام هذه الطريقة
طرق التحليل — ماذا تفعل مجموعة الطرق هذه؟
يصف القسم أدناه المجال الذي ينتمي إليه اختبار LC-MS — تحليل؛ أما شروط ومعايير قبول هذا الاختبار تحديدًا فترد في الأقسام أعلاه. يتم تأكيد النطاق الخاص بمنتجكم كتابيًا في مرحلة العرض السعري.
صفحات طرق التحليل هي صفحات عن تقنية قياس وليست عن اختبار. ويهم هذا الفرق: فـ«اختبار رذاذ الملح» اختبار يجيب عن سؤال واحد؛ أما «ICP-MS» فهي تقنية تُستخدم في عشرات الاختبارات المختلفة. وأحيانًا لا يبحث المستخدم عن الاختبار بل عن التقنية — لأن اسم الطريقة هو ما يظهر في مواصفته.
يصبح هذا التمييز حاسمًا عند اختيار المختبر. فعندما يطلب عميل «تحليل المعادن الثقيلة»، يكون السؤال الحقيقي هو بأي تقنية سيُجرى: فتقنية XRF سريعة وغير إتلافية لكنها لا تميز بين المركبات؛ وتقنية AAS اقتصادية لعنصر واحد؛ وتقنية ICP-OES تفحص عناصر متعددة؛ وتقنية ICP-MS ترى مستويات نزرة. وتُعطي العينة نفسها نتائج بحدود كشف ومستويات عدم يقين مختلفة عبر التقنيات الأربع.
يُختار الأسلوب وفقًا لثلاثة معايير. حد الكشف: هل يقع التركيز المطلوب ضمن النطاق الذي يستطيع الأسلوب رصده؟ توافق المصفوفة: هل مصفوفة العينة (بلاستيك، غذاء، تربة، معدن) من النوع الذي يستطيع الأسلوب التعامل معه، وهل تلزم معالجة مسبقة؟ الارتباط بالمواصفة: هل يفرض معيار المنتج أو التشريع أسلوبًا معينًا؟ وغالبًا ما يتغلب المعيار الثالث على الأولين — إذ تُلزم المواصفة بالأسلوب.
صفحات الطريقة تبني سلسلة. وترتبط التقنية بصفحات الاختبار التي تستخدم فيها، وبالمعايير التي تستند إليها تلك الاختبارات، وبالتشريعات التي ترتبط بها تلك المعايير، وفي نهاية المطاف بأنظمة الوصول إلى الأسواق. تعمل سلسلة الأمثلة في المستند المصدر على النحو التالي: XRF ← تحليل المعادن ← الامتثال لـ RoHS ← تقييد المعادن الثقيلة ← صفحات الطلاء. وأيًا كان الرابط الذي يدخل منه المستخدم، فإنه يصل إلى الآخرين.
يعد تحضير العينة هو النصف غير المرئي من النتيجة في هذه العائلة وهو مصدر خطأ أكبر من التقنية نفسها. طريقة الهضم ودرجة الطحن ومذيب الاستخلاص ونسبة التخفيف تغير النتيجة بشكل ملحوظ. نفس العينة على نفس الأداة تعطي نتيجة مختلفة مع إعداد مختلف؛ وبالتالي فإن تعريف الطريقة يشمل التحضير أيضًا.
المعايرة والتحقق هي العنصر المحدد الثالث. تتم معايرة الجهاز بمواد مرجعية معتمدة، ويتم التحقق من منحنى المعايرة بشكل دوري ويتم تشغيل عينة التحكم في كل دفعة. بدون هذه الخطوات، لا يمكن تتبع الرقم الناتج حتى لو كان الجهاز يعمل بشكل صحيح.
مجموعات الطرق في هذا المجال
التحليل العنصري
ICP-OES، ICP-MS، AAS وXRF. وهي تختلف في حد الكشف وتسامح المصفوفة وقدرة العناصر المتعددة.
الكروماتوغرافيا
GC، GC-MS، HPLC، LC-MS/MS واللوني الأيوني. فهو يفصل الخليط إلى مكوناته ويقيس كل منها على حدة.
التحليل الطيفي
FTIR، رامان، الأشعة فوق البنفسجية والبصرية. للهوية المادية وتحديد المجموعة الوظيفية وتكوين السبائك.
التحليل الحراري
DSC، وTGA، وDMA، وقياس التوسع. درجات الحرارة الانتقالية والتركيب والتحلل وسلوك الأبعاد.
المجهرية والتصوير
الفحص المجهري البصري، SEM-EDS، التصوير الشعاعي والتصوير المقطعي. الهيكل والعيوب والتوزيع العنصري.
الكيمياء الكلاسيكية (الرطبة)
المعايرة والجاذبية وقياس الألوان. تستخدم كوسيلة مرجعية وفي تأكيد النتائج المفيدة.
أمور يشيع الخلط بينها في هذا المجال
- XRF هي أداة فحص؛ فهو يرى العناصر ولا يميز المركبات. يتطلب اتخاذ قرار بشأن مركب مقيد تأكيدًا بواسطة الكيمياء الرطبة.
- عبارة «غير مكتشف» ليست دليلاً على الغياب؛ تُقرأ مع حد الكشف الخاص بالطريقة.
- المواصفات تربط الطريقة. لا يتم قبول الطريقة الأفضل من الناحية الفنية إذا كانت المواصفات تتطلب طريقة أخرى.
- إعداد العينة هو جزء من النتيجة؛ التقرير الذي لا يذكر التحضير غير قابل للتكرار.
- لا يمكن مقارنة النتائج التي تم الحصول عليها بتقنيات مختلفة مباشرة؛ تختلف حدود الكشف والشكوك.
- صفحة الطريقة ليست صفحة اختبار؛ ما هي الطريقة التي تنطبق على أي اختبار يأتي من معيار المنتج.
ما القرارات التي تدعمها هذه النتائج
- مطابقة الطريقة المذكورة في المواصفة مع نطاق المختبر
- اختيار الطريقة وفق حد الكشف وتوافق المصفوفة
- تأكيد النتيجة الآلية بطريقة مرجعية
- إزالة الانحرافات الناتجة عن تحضير العينة
الاختبارات ذات الصلة
الأسئلة الشائعة حول LC-MS — تحليل
ما هو الفرق بين LC-MS وLC-MS/MS؟
يقوم LC-MS بقياس كتلة واحدة. يقوم LC-MS/MS باختيار وتجزئة أيون السلائف ومراقبة أيونات المنتج؛ فهو أكثر انتقائية بكثير وله حد أدنى للقياس الكمي في المصفوفات المعقدة.
لماذا هناك حاجة إلى مخزن مؤقت متقلب؟
تتراكم الأملاح غير المتطايرة في مصدر الأيونات، مما يؤدي إلى قمع الإشارة وتلويث الجهاز. ولذلك يتم استخدام المخازن المؤقتة المتطايرة مثل حمض الفورميك أو خلات الأمونيوم.