ما هو LC-MS/MS — تحليل؟
LC-MS/MS هو نظام يتم فيه اقتران مطياف الكتلة الرباعي الرباعي بعد التحليل اللوني السائل. يقوم المحلل الأول باختيار الأيون الأولي، وتقوم خلية الاصطدام بتجزئته، ويقوم المحلل الثالث بمراقبة أيونات المنتج. يُطلق على زوج السلائف والمنتج المُراقب اسم الانتقال (MRM).
الغرض من LC-MS/MS — تحليل
والغرض من ذلك هو قياس التركيزات المنخفضة جدًا بشكل موثوق في العينات ذات التداخل المكثف للمصفوفة. يتم إجراء تحليل تتبع عينات الدم والبلازما والغذاء والعينات البيئية باستخدام هذه التقنية.
على أي منتجات يُطبَّق LC-MS/MS — تحليل؟
- مستويات المخدرات والأيض في العينات البيولوجية
- السموم الفطرية وبقايا الأدوية البيطرية في الأغذية
- شوائب النتروزامين في المنتجات الصيدلانية
- الملوثات القطبية في الماء
- فحص الغش في المنتجات التكميلية
في أي قطاعات يُستخدم LC-MS/MS — تحليل؟
المواصفات المتعلقة بـ LC-MS/MS — تحليل
- ICH M10 (التحقق من صحة طريقة التحليل الحيوي)
- EU 2021/808 (معايير الأداء لطرق البقايا)
- EN 15662 (كويتشيرز)
- ICH M7 / EMA إرشادات النتروزامين
شروط LC-MS/MS — تحليل
- يراقب
- يمر على الأقل MRM مرتين لكل تحليل
- Teyit
- توافق نسبة الأيونات الانتقالية مع المرجع
- المعيار الداخلي
- إذا كان ذلك ممكنا، يتم استخدام النظائر المسمى التناظرية
- المعايرة
- معايرة المصفوفة المطابقة في حالة وجود تأثير المصفوفة
جهاز LC-MS/MS — تحليل
- نظام UPLC/HPLC
- مطياف الكتلة الثلاثي الرباعي
- مصدر أيون الرذاذ الكهربائي
- SPE ووحدات إعداد العينات الآلية
- مولد النيتروجين ونظام الفراغ
متطلبات العينة لـ LC-MS/MS — تحليل
- مطلوب هطول البروتين، واستخراج السائل السائل أو SPE للعينات البيولوجية
- يتم تطبيق التجانس واستخراج نوع QuEChERS للأغذية
- يجب إرسال العينة في سلسلة التبريد وفي الأنابيب المناسبة
- يجب تحديد قائمة التحاليل المطلوبة في البداية
مدة LC-MS/MS — تحليل
وقت التشغيل في الغالب أقل من 15 دقيقة؛ يحدد إعداد العينة والتحقق من صحة الطريقة المدة الرئيسية.
إجراء LC-MS/MS — تحليل
- 1يتم تجانس العينة وإضافة المعيار الداخلي.
- 2يتم تطبيق الاستخراج والتنظيف.
- 3يتم حقن المستخلص على عمود LC.
- 4تتم مراقبة انتقالات MRM للتحليلات المستهدفة.
- 5تتم مقارنة نسب الأيونات مع المرجع.
- 6يتم حساب الكمية عبر منحنى المعايرة.
- 7يتم تقييم نتائج الاسترداد والفارغة ومراقبة الجودة.
معايير قبول LC-MS/MS — تحليل
ويتم تقييم مدى قبول النتيجة مقابل الحدود الواردة في تنظيم المخلفات أو الملوثات أو الشوائب ذات الصلة. الطريقة لا تحدد الحد.
تقييم النتائج
والنتيجة ذات معنى ضمن نطاق العمل الذي تم التحقق من صحته في الطريقة. يتم الإبلاغ عن القيم الموجودة أسفل النطاق على أنها "أقل من حد القياس الكمي" بدلاً من فرضها على قيمة عددية.
تقرير LC-MS/MS — تحليل
- وصف العينة وتاريخ استلامها ورقم المختبر
- الطريقة المطبقة والمعيار المرجعي، إن وجد
- شروط الصك والقياس
- خطوات تحضير العينة
- نتائج القياس والوحدات
- عدم اليقين في القياس (إذا طلب ذلك)
- إقرار بأن النتائج تتعلق فقط بالعينة المقدمة للاختبار
الاعتماد
حصلت EUROLAB على اعتماد معترف به دوليًا تم الحصول عليه من هيئات الاعتماد الأطراف في ترتيبات الاعتراف المتعددة الأطراف IAF وILAC، بموجب ISO/IEC 17025 للاختبارات المعملية، وISO/IEC 17020 للتفتيش والمراقبة، وISO/IEC 17021-1 وISO/IEC 17065 لشهادة النظام والمنتجات. تضمن هذه السلسلة قبول التقارير والشهادات الصادرة في جميع أنحاء العالم.
تعتمد إمكانية تقديم هذا الاختبار ضمن النطاق المعتمد على منتجك والمعيار المطبق؛ وبما أن الاعتماد يعتمد على الطريقة، يتم تأكيد النطاق كتابيًا في مرحلة عرض الأسعار.
النطاق والتفويضاتاللوائح ذات الصلة
- الاتحاد الأوروبي 915/2023 (الملوثات في الغذاء)
- الاتحاد الأوروبي 37/2010 (مخلفات الأدوية البيطرية)
- تقييمات النتروزامين EMA/CHMP
الصفحات التي يتم فيها استخدام هذه الطريقة
طرق التحليل — ماذا تفعل مجموعة الطرق هذه؟
يصف القسم أدناه المجال الذي ينتمي إليه اختبار LC-MS/MS — تحليل؛ أما شروط ومعايير قبول هذا الاختبار تحديدًا فترد في الأقسام أعلاه. يتم تأكيد النطاق الخاص بمنتجكم كتابيًا في مرحلة العرض السعري.
صفحات طرق التحليل هي صفحات عن تقنية قياس وليست عن اختبار. ويهم هذا الفرق: فـ«اختبار رذاذ الملح» اختبار يجيب عن سؤال واحد؛ أما «ICP-MS» فهي تقنية تُستخدم في عشرات الاختبارات المختلفة. وأحيانًا لا يبحث المستخدم عن الاختبار بل عن التقنية — لأن اسم الطريقة هو ما يظهر في مواصفته.
يصبح هذا التمييز حاسمًا عند اختيار المختبر. فعندما يطلب عميل «تحليل المعادن الثقيلة»، يكون السؤال الحقيقي هو بأي تقنية سيُجرى: فتقنية XRF سريعة وغير إتلافية لكنها لا تميز بين المركبات؛ وتقنية AAS اقتصادية لعنصر واحد؛ وتقنية ICP-OES تفحص عناصر متعددة؛ وتقنية ICP-MS ترى مستويات نزرة. وتُعطي العينة نفسها نتائج بحدود كشف ومستويات عدم يقين مختلفة عبر التقنيات الأربع.
يُختار الأسلوب وفقًا لثلاثة معايير. حد الكشف: هل يقع التركيز المطلوب ضمن النطاق الذي يستطيع الأسلوب رصده؟ توافق المصفوفة: هل مصفوفة العينة (بلاستيك، غذاء، تربة، معدن) من النوع الذي يستطيع الأسلوب التعامل معه، وهل تلزم معالجة مسبقة؟ الارتباط بالمواصفة: هل يفرض معيار المنتج أو التشريع أسلوبًا معينًا؟ وغالبًا ما يتغلب المعيار الثالث على الأولين — إذ تُلزم المواصفة بالأسلوب.
صفحات الطريقة تبني سلسلة. وترتبط التقنية بصفحات الاختبار التي تستخدم فيها، وبالمعايير التي تستند إليها تلك الاختبارات، وبالتشريعات التي ترتبط بها تلك المعايير، وفي نهاية المطاف بأنظمة الوصول إلى الأسواق. تعمل سلسلة الأمثلة في المستند المصدر على النحو التالي: XRF ← تحليل المعادن ← الامتثال لـ RoHS ← تقييد المعادن الثقيلة ← صفحات الطلاء. وأيًا كان الرابط الذي يدخل منه المستخدم، فإنه يصل إلى الآخرين.
يعد تحضير العينة هو النصف غير المرئي من النتيجة في هذه العائلة وهو مصدر خطأ أكبر من التقنية نفسها. طريقة الهضم ودرجة الطحن ومذيب الاستخلاص ونسبة التخفيف تغير النتيجة بشكل ملحوظ. نفس العينة على نفس الأداة تعطي نتيجة مختلفة مع إعداد مختلف؛ وبالتالي فإن تعريف الطريقة يشمل التحضير أيضًا.
المعايرة والتحقق هي العنصر المحدد الثالث. تتم معايرة الجهاز بمواد مرجعية معتمدة، ويتم التحقق من منحنى المعايرة بشكل دوري ويتم تشغيل عينة التحكم في كل دفعة. بدون هذه الخطوات، لا يمكن تتبع الرقم الناتج حتى لو كان الجهاز يعمل بشكل صحيح.
مجموعات الطرق في هذا المجال
التحليل العنصري
ICP-OES، ICP-MS، AAS وXRF. وهي تختلف في حد الكشف وتسامح المصفوفة وقدرة العناصر المتعددة.
الكروماتوغرافيا
GC، GC-MS، HPLC، LC-MS/MS واللوني الأيوني. فهو يفصل الخليط إلى مكوناته ويقيس كل منها على حدة.
التحليل الطيفي
FTIR، رامان، الأشعة فوق البنفسجية والبصرية. للهوية المادية وتحديد المجموعة الوظيفية وتكوين السبائك.
التحليل الحراري
DSC، وTGA، وDMA، وقياس التوسع. درجات الحرارة الانتقالية والتركيب والتحلل وسلوك الأبعاد.
المجهرية والتصوير
الفحص المجهري البصري، SEM-EDS، التصوير الشعاعي والتصوير المقطعي. الهيكل والعيوب والتوزيع العنصري.
الكيمياء الكلاسيكية (الرطبة)
المعايرة والجاذبية وقياس الألوان. تستخدم كوسيلة مرجعية وفي تأكيد النتائج المفيدة.
أمور يشيع الخلط بينها في هذا المجال
- XRF هي أداة فحص؛ فهو يرى العناصر ولا يميز المركبات. يتطلب اتخاذ قرار بشأن مركب مقيد تأكيدًا بواسطة الكيمياء الرطبة.
- عبارة «غير مكتشف» ليست دليلاً على الغياب؛ تُقرأ مع حد الكشف الخاص بالطريقة.
- المواصفات تربط الطريقة. لا يتم قبول الطريقة الأفضل من الناحية الفنية إذا كانت المواصفات تتطلب طريقة أخرى.
- إعداد العينة هو جزء من النتيجة؛ التقرير الذي لا يذكر التحضير غير قابل للتكرار.
- لا يمكن مقارنة النتائج التي تم الحصول عليها بتقنيات مختلفة مباشرة؛ تختلف حدود الكشف والشكوك.
- صفحة الطريقة ليست صفحة اختبار؛ ما هي الطريقة التي تنطبق على أي اختبار يأتي من معيار المنتج.
ما القرارات التي تدعمها هذه النتائج
- مطابقة الطريقة المذكورة في المواصفة مع نطاق المختبر
- اختيار الطريقة وفق حد الكشف وتوافق المصفوفة
- تأكيد النتيجة الآلية بطريقة مرجعية
- إزالة الانحرافات الناتجة عن تحضير العينة
الاختبارات ذات الصلة
الأسئلة الشائعة حول LC-MS/MS — تحليل
ما أهمية المعيار الداخلي المسمى بالنظائر؟
ولأنه يُظهر نفس السلوك الكيميائي للمادة التحليلية، فإنه يتتبع تأثير المصفوفة وخسارة الاستخراج واحدًا لواحد. وهذا يحسن بشكل كبير دقة النتيجة.
ماذا تعني نتيجة أقل من حد القياس الكمي؟
وهذا لا يعني غياب المادة التحليلية، ولكنه يعني أنها أقل من المستوى الذي يمكن للطريقة قياسه بشكل موثوق. ويذكر التقرير ذلك ببيان منفصل.