¿Qué es LC-MS/MS — análisis?
LC-MS/MS es un sistema en el que se acopla un espectrómetro de masas de triple cuadrupolo después de la cromatografía líquida. El primer analizador selecciona el ion precursor, la celda de colisión lo fragmenta y el tercer analizador monitorea los iones producto. El par precursor-producto monitoreado se llama transición (MRM).
Objetivo de LC-MS/MS — análisis
El objetivo es medir de forma fiable concentraciones muy bajas en muestras con intensa interferencia en la matriz. Con esta técnica se realizan análisis de trazas de muestras de sangre, plasma, alimentos y ambientales.
¿A qué productos se aplica LC-MS/MS — análisis?
- Niveles de fármacos y metabolitos en muestras biológicas.
- Residuos de micotoxinas y medicamentos veterinarios en los alimentos
- Impurezas de nitrosamina en productos farmacéuticos.
- Contaminantes polares en el agua
- Detección de adulteración en productos complementarios.
¿En qué sectores se utiliza LC-MS/MS — análisis?
Normas relacionadas con LC-MS/MS — análisis
- ICH M10 (validación del método bioanalítico)
- UE 2021/808 (criterios de rendimiento para métodos de residuos)
- EN 15662 (QUECHERS)
- Directrices de nitrosamina ICH M7 / EMA
Condiciones de LC-MS/MS — análisis
- Escucha
- Al menos dos pases de MRM para cada analito.
- Teyit
- Compatibilidad de la relación de iones entre transiciones con la referencia.
- estándar interno
- Si es posible, se utiliza un análogo marcado con isótopos.
- Calibración
- Calibración coincidente con la matriz si el efecto de la matriz está presente
Equipo para LC-MS/MS — análisis
- Sistema UPLC/HPLC
- Espectrómetro de masas de triple cuadrupolo
- Fuente de iones por electropulverización
- SPE y unidades de preparación de muestras automatizadas
- Generador de nitrógeno y sistema de vacío.
Requisitos de muestra para LC-MS/MS — análisis
- Se requiere precipitación de proteínas, extracción líquido-líquido o SPE para muestras biológicas.
- La homogeneización y la extracción tipo QuEChERS se aplican a los alimentos.
- La muestra debe enviarse en cadena de frío y en tubos adecuados.
- La lista de analitos buscados debe definirse desde el principio.
Duración de LC-MS/MS — análisis
El tiempo de ejecución es mayoritariamente inferior a 15 minutos; La preparación de la muestra y la validación del método determinan la duración principal.
Procedimiento de LC-MS/MS — análisis
- 1La muestra se homogeneiza y se añade patrón interno.
- 2Se aplica extracción y limpieza.
- 3El extracto se inyecta en la columna LC.
- 4Las transiciones MRM se monitorean para los analitos objetivo.
- 5Las proporciones de iones se comparan con la referencia.
- 6La cantidad se calcula mediante la curva de calibración.
- 7Se evalúan los resultados de recuperación, blanco y control de calidad.
Criterios de aceptación de LC-MS/MS — análisis
La aceptabilidad del resultado se evalúa en función de los límites establecidos en la normativa pertinente sobre residuos, contaminantes o impurezas. El método no define un límite.
Evaluación de resultados
El resultado es significativo dentro del rango de trabajo validado del método. Los valores por debajo del rango se informan como "por debajo del límite de cuantificación" en lugar de ser forzados a un valor numérico.
Informe de LC-MS/MS — análisis
- Descripción de la muestra, fecha de recepción y número de laboratorio.
- Método aplicado y estándar de referencia, si lo hubiera.
- Condiciones del instrumento y de medición.
- Pasos de preparación de muestras
- Resultados de medición y unidades.
- Incertidumbre de medición (si se solicita)
- Una declaración de que los resultados se relacionan únicamente con la muestra enviada para la prueba.
Acreditación
EUROLAB posee una acreditación reconocida internacionalmente obtenida de organismos de acreditación que forman parte de los acuerdos de reconocimiento multilateral de IAF e ILAC, según ISO/IEC 17025 para pruebas de laboratorio, ISO/IEC 17020 para inspección y vigilancia, e ISO/IEC 17021-1 e ISO/IEC 17065 para certificación de sistemas y productos. Esta cadena garantiza que los informes y certificados emitidos sean aceptados en todo el mundo.
La posibilidad de ofrecer esta prueba dentro del alcance acreditado depende de su producto y del estándar aplicado; Dado que la acreditación se basa en métodos, el alcance se confirma por escrito en la etapa de cotización.
Alcance y autorizacionesRegulaciones Relacionadas
- UE 2023/915 (contaminantes en alimentos)
- UE 37/2010 (residuos de medicamentos veterinarios)
- Evaluaciones de nitrosamina de la EMA/CHMP
Páginas donde se utiliza este método
Métodos analíticos — ¿Qué hace este grupo de métodos?
La siguiente sección describe el campo al que pertenece el ensayo LC-MS/MS — análisis; las condiciones y criterios de aceptación de este ensayo en particular figuran en las secciones anteriores. El alcance específico de su producto se confirma por escrito en la etapa de cotización.
Las páginas de métodos analíticos son páginas sobre una TÉCNICA DE MEDICIÓN más que sobre un ensayo. Esta diferencia importa: «ensayo de niebla salina» es un ensayo y responde a una pregunta; «ICP-MS» es una técnica y se utiliza en decenas de ensayos distintos. A veces el usuario no busca el ensayo sino la técnica, porque el nombre del método es lo que aparece en su especificación.
Esta distinción se vuelve decisiva a la hora de elegir un laboratorio. Cuando un cliente pide un «análisis de metales pesados», la verdadera pregunta es con qué técnica se realizará: la XRF es rápida y no destructiva pero no distingue compuestos; la AAS es económica para un solo elemento; el ICP-OES detecta varios elementos; el ICP-MS ve niveles traza. La misma muestra da resultados con límites de detección e incertidumbres distintos en las cuatro técnicas.
La selección del método se realiza según tres criterios. LÍMITE DE DETECCIÓN: ¿está la concentración buscada dentro del rango que el método puede detectar? COMPATIBILIDAD DE MATRIZ: ¿es la matriz de la muestra (plástico, alimento, suelo, metal) una que el método pueda manejar, y se requiere pretratamiento? VÍNCULO CON LA ESPECIFICACIÓN: ¿exige la norma de producto o la legislación un método particular? El tercero suele prevalecer sobre los dos primeros: la especificación vincula el método.
Las páginas de métodos construyen una CADENA. Una técnica está vinculada a las páginas de prueba donde se utiliza, a las normas en las que se basan esas pruebas, a la legislación a la que están vinculadas esas normas y, en última instancia, a los regímenes de acceso a los mercados. La cadena de ejemplo en el documento fuente funciona así: XRF → análisis de metales → cumplimiento de RoHS → restricción de metales pesados → páginas de recubrimiento. Cualquiera que sea el enlace desde el que ingresa el usuario, llega a los demás.
La preparación de la muestra es la mitad invisible del resultado en esta familia y es una fuente de error mayor que la técnica misma. El método de digestión, el grado de molienda, el disolvente de extracción y la proporción de dilución modifican notablemente el resultado. La misma muestra en el mismo instrumento da un resultado diferente con una preparación diferente; Por lo tanto, la definición del método también incluye la preparación.
La calibración y la verificación son el tercer componente determinante. Se calibra un instrumento con material de referencia certificado, la curva de calibración se verifica periódicamente y se analiza una muestra de control en cada lote. Sin estos pasos, no se puede rastrear una cantidad producida incluso si el instrumento funciona correctamente.
Grupos de métodos en este campo
Análisis elemental
ICP-OES, ICP-MS, AAS y XRF. Se diferencian en el límite de detección, la tolerancia de la matriz y la capacidad de múltiples elementos.
Cromatografía
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS y cromatografía iónica. Separa una mezcla en sus componentes y mide cada uno por separado.
Espectroscopía
FTIR, Raman, UV-Vis y emisión óptica. Para identidad de materiales, identificación de grupos funcionales y composición de aleaciones.
Análisis térmico
DSC, TGA, DMA y dilatometría. Temperaturas de transición, composición, descomposición y comportamiento dimensional.
Microscopía e imagenología
Microscopía óptica, SEM-EDS, radiografía y tomografía. Estructura, defectos y distribución elemental.
Química clásica (húmeda)
Titulación, gravimetría y colorimetría. Se utiliza como método de referencia y para confirmar resultados instrumentales.
Confusiones frecuentes en este campo
- XRF es una herramienta de detección; ve elementos y no distingue compuestos. Una decisión sobre un compuesto restringido requiere confirmación mediante química húmeda.
- La expresión "no detectado" no es prueba de ausencia; se interpreta junto con el límite de detección del método.
- La especificación vincula el método. No se acepta un método técnicamente mejor si la especificación exige otro.
- La preparación de la muestra es parte del resultado; un informe que no indique la preparación no es reproducible.
- Los resultados obtenidos mediante diferentes técnicas no se pueden comparar directamente; sus límites de detección e incertidumbres difieren.
- Una página de método no es una página de prueba; qué método se aplica a qué prueba proviene de la norma del producto.
Qué decisiones respaldan estos resultados
- Correspondencia del método de la especificación con el alcance del laboratorio
- Selección del método según el límite de detección y la compatibilidad de la matriz
- Confirmación de un resultado instrumental con un método de referencia
- Eliminación de desviaciones derivadas de la preparación de la muestra
Pruebas relacionadas
Preguntas frecuentes sobre LC-MS/MS — análisis
¿Por qué es importante un patrón interno marcado con isótopos?
Debido a que muestra el mismo comportamiento químico que el analito, rastrea el efecto de la matriz y la pérdida de extracción uno a uno. Esto mejora significativamente la precisión del resultado.
¿Qué significa un resultado por debajo del límite de cuantificación?
No significa que el analito esté ausente, sino que está por debajo del nivel que el método puede medir de manera confiable. El informe así lo afirma en una declaración aparte.