E. coli | EUROLAB

Что такое E. coli?

Анализ E. coli отвечает на два отдельных вопроса. COUNT (ISO 16649) дает общее количество E. coli как индикатор загрязнения фекалиями. STEC DETECTION (ISO 13136) исследует наличие патогенных серогрупп, продуцирующих шига-токсин, методом ПЦР; Это анализ безопасности, и его не следует путать с переписью населения.

E. coli: цель

Целью является обнаружение фекального загрязнения и исследование наличия патогенных штаммов кишечной палочки. Поскольку STEC может вызвать серьезное заболевание даже в небольших количествах, его рассматривают как вопрос о наличии/отсутствии, а не как вопрос переписи населения.

К каким изделиям применяется E. coli?

Сырые и недоваренные мясные продукты
Сырое молоко и сыры, произведенные из сырого молока
Свежие фрукты, овощи и ростки
Питьевая и хозяйственно-питьевая вода
готовые блюда

В каких отраслях применяется E. coli?

Пищевая продукцияСельское хозяйствоРозничная торговляОкружающая среда

Стандарты, связанные с E. coli

TS ISO 16649-1/-2/-3 (количество бета-глюкуронидазоположительных E. coli)
TS EN ISO 9308-1 (E. coli и колиформные бактерии в воде — мембранная фильтрация)
TS EN ISO 13136 (обнаружение STEC — ПЦР в реальном времени)
Серия TS EN ISO 6887 (подготовка проб)

E. coli: условия

Перепись: В селективной среде, при температуре и времени, определенных стандартом.
STEC: Скрининг генов stx и eae методом ПЦР после обогащения
Проверка: Культурная изоляция в ПЦР-положительных образцах

Оборудование для E. coli

Стерильный шкаф и инкубаторы
Система ПЦР в реальном времени
Устройство иммуномагнитной сепарации
Membran filtrasyon sistemi
Счетчик колоний

Требования к образцам для E. coli

Образец должен быть отправлен невскрытым и в оригинальной упаковке с соблюдением холодовой цепи. Достоверность результата определяется тем, является ли метод отбора проб репрезентативным для партии; Результата одного подразделения недостаточно для принятия решения о партии.
При анализе STEC количество пробы должно находиться на уровне, определенном стандартом.
Пробы воды должны быть доставлены в стерильной таре и в течение определенного времени.
План отбора проб должен определяться в соответствии с категорией продукции.

E. coli: продолжительность

Подсчет длится столько же, сколько инкубационный период. В анализе STEC есть этапы обогащения и ПЦР; В ПЦР-положительных образцах культуральное подтверждение значительно продлевает время.

E. coli: порядок проведения

1Образец готовят в асептических условиях.
2Для подсчета их высевают на селективные среды и инкубируют.
3Типичные колонии подсчитывают и при необходимости проверяют.
4Для STEC образец обогащается.
5Применяются экстракция ДНК и ПЦР в реальном времени.
6В случае положительных результатов проводят выделение и серотипирование.

E. coli: критерии приёмки

STEC (EC) 2073/2005 определяет критерии безопасности пищевых продуктов в определенных категориях пищевых продуктов, и это критерий присутствия/отсутствия. Количество E. coli рассматривается как критерий гигиены процесса. Критериями приемлемости являются микробиологические критерии, определенные для каждой категории пищевых продуктов в стандарте (ЕС) 2073/2005. Постановление выделяет два типа критериев: критерий безопасности пищевых продуктов (может ли продукт быть размещен на рынке) и критерий гигиены процесса (находится ли производственный процесс под контролем). Какой из них применяется, зависит от категории продукции и подтверждается текстом действующего регламента.

Оценка результатов

Низкое количество E. coli не означает, что STEC отсутствует: патогенные штаммы могут вызывать заболевание в очень небольшом количестве и могут не присутствовать в общем количестве. Эти два анализа отвечают на разные вопросы и не являются взаимозаменяемыми.

E. coli: протокол

Идентификация образцов и информация о партии
Стандарт и применяемый метод
Результат подсчета и неопределенность измерения
Результаты ПЦР и гены-мишени для STEC
Информация об изоляции и серотипе в положительных случаях

Аккредитация

EUROLAB имеет международно признанную аккредитацию, полученную от органов по аккредитации, являющихся участниками многосторонних соглашений о признании IAF и ILAC, в соответствии с ISO/IEC 17025 для лабораторных испытаний, ISO/IEC 17020 для инспекций и надзора, а также ISO/IEC 17021-1 и ISO/IEC 17065 для сертификации систем и продукции. Эта цепочка гарантирует, что выданные отчеты и сертификаты принимаются по всему миру.

Возможность проведения этого теста в рамках аккредитованной области зависит от вашего продукта и применяемого стандарта; поскольку аккредитация основана на методе, объем работ подтверждается в письменной форме на этапе предложения.

Область применения и разрешения

Соответствующие правила

(EC) 2073/2005 Регламент микробиологических критериев
(ЕС) 2020/2184 Директива о питьевой воде

Испытания пищевых продуктов — Что охватывает эта область испытаний?

В разделе ниже описывается область, к которой относится испытание E. coli; условия и критерии приемки именно этого испытания приведены в разделах выше. Объём, специфичный для вашего продукта, подтверждается письменно на этапе коммерческого предложения.

Пищевые испытания показывают, что продукт безопасен для потребления и содержит то, что указано на этикетке. Семейство работает по трём осям: микробиологическая безопасность, химическая безопасность и пищевой состав. Все три требуют разной лабораторной инфраструктуры, разного набора методов и разных сроков.

Наиболее характерная черта этой области — ДАВЛЕНИЕ ВРЕМЕНИ. Стальной образец может подождать на полке; проба сырого молока или свежего мяса — нет. Время отбора пробы, температура транспортировки и время доставки в лабораторию напрямую определяют достоверность результата. Поэтому в пищевой микробиологии запись холодовой цепи — неотъемлемая часть протокола испытания.

На микробиологической стороне есть два разных вопроса, которые нельзя путать. ОБНАРУЖЕНИЕ патогена — это качественный вопрос: присутствует ли сальмонелла в пробе или нет? ПОДСЧЁТ индикаторных микроорганизмов — количественный вопрос и показатель гигиены производства. Отсутствие патогена в продукте не означает хорошую гигиену; если общее количество мезофильных аэробных микроорганизмов высокое, значит в процессе есть проблема.

На химической стороне измеряются остатки пестицидов, микотоксины, тяжёлые металлы, добавки, остатки ветеринарных препаратов и технологические загрязнители (акриламид, фуран, ПАУ). Мультиостаточные методы в этой области (LC-MS/MS и GC-MS/MS на основе QuEChERS) способны обнаруживать сотни активных веществ за один анализ; пределы определены отдельно для каждой пары продукт-вещество.

На стороне состава определяются белок, жир, влажность, зола, клетчатка, сахарный профиль, состав жирных кислот, содержание витаминов и минералов. Эти значения — основа пищевой декларации на этикетке, а диапазоны допуска определены законодательством — разница между заявленным и измеренным значением должна оставаться в пределах этого допуска.

На пищевые продукты НЕТ маркировки CE, и это определяет специфику работы в этой области. Соответствие демонстрируется через функционирование системы безопасности пищевых продуктов на основе HACCP, соблюдение правил маркировки и непревышение пределов по загрязнителям, остаткам и микробиологическим показателям. Результат испытания даёт доказательство не для сертификата, а для работающей системы.

Управление аллергенами имеет особое значение. Наличие незаявленного аллергена в продукте — одна из самых частых причин отзыва пищевой продукции. Анализ здесь идёт вместе с валидацией очистки: демонстрируется, что линия была должным образом очищена после производственного цикла с аллергеном, и что риск перекрёстного загрязнения находится под контролем.

Добровольные схемы в этой области фактически стали обязательными. Розничные сети требуют от поставщиков сертификат по схеме, признанной GFSI (BRCGS, IFS, FSSC 22000); без него попасть на полку практически невозможно.

Группы методов в этой области

Обнаружение патогенов
Обнаружение сальмонеллы, Listeria monocytogenes, кампилобактера, Cronobacter и шигатоксин-продуцирующей E. coli; культуральные и молекулярные методы.
Подсчёт индикаторных микроорганизмов
Общее количество мезофильных аэробных микроорганизмов, Enterobacteriaceae, колиформы и E. coli, коагулазоположительные стафилококки, дрожжи и плесени, молочнокислые бактерии, сульфитредуцирующие клостридии.
Остатки пестицидов и ветеринарных препаратов
Мультиостаточный скрининг методами LC-MS/MS и GC-MS/MS с экстракцией QuEChERS.
Микотоксины и загрязнители
Афлатоксины, охратоксин А, дезоксиниваленол, патулин; тяжёлые металлы (ИСП-МС), акриламид и соединения ПАУ.
Пищевой состав
Белок по Кьельдалю, профиль жиров и жирных кислот, влажность, зола, пищевые волокна, сахарный профиль, анализ витаминов и минералов.
Аллергены и подлинность
Анализ аллергенов глютена, молока, яйца, орехов и сои; молекулярные методы для идентификации видов и обнаружения фальсификации.

Часто путаемое в этой области

Отбор пробы — половина результата. Проба, транспортированная при неправильной температуре или с задержкой, даёт недействительный результат, даже если она правильно проанализирована в лаборатории.
Отсутствие патогена не означает хорошую гигиену; подсчёт индикаторных микроорганизмов даёт отдельную информацию, и оба показателя читаются вместе.
Результат, полученный из пробы, взятой из партии, можно распространить на всю партию только если план отбора проб был установлен статистически.
Пределы определены в отдельных нормативных актах по группам продукции и регулярно обновляются; решение о соответствии, основанное на устаревшей таблице пределов, может быть ошибочным.
При экспорте пределы страны назначения могут отличаться от пределов ЕС; один и тот же продукт может соответствовать требованиям на одном рынке и не соответствовать на другом.

Какие решения подкрепляют эти результаты

Верификация плана HACCP и мониторинг процесса
Основа для пищевой декларации и информации об аллергенах на этикетке
Санитарные сертификаты перед экспортом и соответствие пределам целевого рынка
Приёмочный контроль по поставщику и партии
Исследования сроков годности и определение условий хранения
Подготовка доказательств для аудитов по схемам, признанным GFSI

Связанные тесты

E. coli: частые вопросы

ПЦР дал положительный результат, действительно ли продукт заражен?

ПЦР указывает на наличие целевого гена; Это не само по себе доказывает существование живых бактерий. Поэтому стандарт требует проверки путем культурной изоляции положительных результатов. Результат проверки принимается за основу для принятия окончательного решения.