Ανάλυση LC-MS/MS

Τι είναι η LC-MS/MS — ανάλυση;

Το LC-MS/MS είναι ένα σύστημα στο οποίο ένα τριπλό τετραπολικό φασματόμετρο μάζας συζεύγνυται μετά από υγρή χρωματογραφία. Ο πρώτος αναλυτής επιλέγει το πρόδρομο ιόν, το κύτταρο σύγκρουσης το τεμαχίζει και ο τρίτος αναλυτής παρακολουθεί τα ιόντα του προϊόντος. Το παρακολουθούμενο ζεύγος προδρόμου-προϊόντος ονομάζεται μετάβαση (MRM).

Σκοπός της LC-MS/MS — ανάλυση

Ο σκοπός είναι η αξιόπιστη μέτρηση πολύ χαμηλών συγκεντρώσεων σε δείγματα με έντονη παρεμβολή μήτρας. Με αυτήν την τεχνική γίνεται ανάλυση ιχνών αίματος, πλάσματος, τροφίμων και περιβαλλοντικών δειγμάτων.

Σε ποια προϊόντα εφαρμόζεται η LC-MS/MS — ανάλυση;

Επίπεδα φαρμάκων και μεταβολιτών σε βιολογικά δείγματα
Μυκοτοξίνες και υπολείμματα κτηνιατρικών φαρμάκων στα τρόφιμα
Ακαθαρσίες νιτροζαμίνης σε φαρμακευτικά προϊόντα
Πολικοί ρύποι στο νερό
Έλεγχος νόθευσης σε προϊόντα συμπληρωμάτων

Σε ποιους τομείς χρησιμοποιείται η LC-MS/MS — ανάλυση;

ΧημείαΦαρμακευτικάΤρόφιμαΚαλλυντικάΠεριβάλλονΒιοτεχνολογίαΓεωργίαΔημόσιος τομέας

Πρότυπα σχετικά με τη LC-MS/MS — ανάλυση

ICH M10 (επικύρωση βιοαναλυτικής μεθόδου)
ΕΕ 2021/808 (κριτήρια απόδοσης για μεθόδους υπολειμμάτων)
EN 15662 (QuEChERS)
Οδηγίες για τη νιτροζαμίνη ICH M7 / EMA

Συνθήκες της LC-MS/MS — ανάλυση

Παρακολούθηση: Τουλάχιστον δύο διελεύσεις MRM για κάθε αναλυόμενη ουσία
Teyit: Συμβατότητα της αναλογίας ιόντων μεταξύ μετάπτωσης με την αναφορά
εσωτερικό πρότυπο: Εάν είναι δυνατόν, χρησιμοποιείται ανάλογο με σήμανση με ισότοπο
Βαθμονόμηση: Βαθμονόμηση αντιστοιχισμένης μήτρας εάν υπάρχει φαινόμενο μήτρας

Εξοπλισμός για τη LC-MS/MS — ανάλυση

Σύστημα UPLC/HPLC
Φασματόμετρο μάζας τριπλού τετραπολικού
Πηγή ιόντων ηλεκτροψεκασμού
SPE και αυτοματοποιημένες μονάδες προετοιμασίας δειγμάτων
Γεννήτρια αζώτου και σύστημα κενού

Απαιτήσεις δείγματος για τη LC-MS/MS — ανάλυση

Για βιολογικά δείγματα απαιτείται καθίζηση πρωτεΐνης, εκχύλιση υγρού-υγρού ή SPE
Για τα τρόφιμα εφαρμόζεται ομογενοποίηση και εκχύλιση τύπου QuEChERS
Το δείγμα πρέπει να αποσταλεί στην ψυχρή αλυσίδα και σε κατάλληλους σωλήνες
Ο κατάλογος των αναζητούμενων αναλυτών πρέπει να καθοριστεί εξαρχής

Διάρκεια της LC-MS/MS — ανάλυση

Ο χρόνος εκτέλεσης είναι κυρίως κάτω από 15 λεπτά. Η προετοιμασία του δείγματος και η επικύρωση της μεθόδου καθορίζουν την κύρια διάρκεια.

Διαδικασία της LC-MS/MS — ανάλυση

1Το δείγμα ομογενοποιείται και προστίθεται εσωτερικό πρότυπο.
2Εφαρμόζονται εξαγωγή και καθαρισμός.
3Το εκχύλισμα εγχέεται στη στήλη LC.
4Οι μεταβάσεις MRM παρακολουθούνται για τους αναλυτές στόχους.
5Οι αναλογίες ιόντων συγκρίνονται με την αναφορά.
6Η ποσότητα υπολογίζεται μέσω της καμπύλης βαθμονόμησης.
7Αξιολογούνται τα αποτελέσματα ανάκτησης, τυφλά και ποιοτικού ελέγχου.

Κριτήρια αποδοχής της LC-MS/MS — ανάλυση

Η αποδοχή του αποτελέσματος αξιολογείται με βάση τα όρια του σχετικού κανονισμού υπολειμμάτων, ρύπων ή ακαθαρσιών. Η μέθοδος δεν ορίζει όριο.

Αξιολόγηση Αποτελεσμάτων

Το αποτέλεσμα είναι σημαντικό εντός του επικυρωμένου εύρους εργασίας της μεθόδου. Οι τιμές κάτω από το εύρος αναφέρονται ως «κάτω από το όριο ποσοτικοποίησης» αντί να επιβάλλονται σε μια αριθμητική τιμή.

Έκθεση της LC-MS/MS — ανάλυση

Περιγραφή δείγματος, ημερομηνία παραλαβής και αριθμός εργαστηρίου
Εφαρμοσμένη μέθοδος και πρότυπο αναφοράς, εάν υπάρχει
Όργανο και συνθήκες μέτρησης
Βήματα προετοιμασίας δειγμάτων
Αποτελέσματα μέτρησης και μονάδες
Αβεβαιότητα μέτρησης (εάν ζητηθεί)
Δήλωση ότι τα αποτελέσματα αφορούν μόνο το δείγμα που υποβλήθηκε για δοκιμή

Διαπίστευση

Η EUROLAB κατέχει διεθνώς αναγνωρισμένη διαπίστευση που λαμβάνεται από φορείς διαπίστευσης που συμμετείχαν στις συμφωνίες πολυμερούς αναγνώρισης IAF και ILAC, σύμφωνα με το ISO/IEC 17025 για εργαστηριακές δοκιμές, το ISO/IEC 17020 για την επιθεώρηση και την επιτήρηση και το ISO/IEC 17021-1 και το σύστημα πιστοποίησης προϊόντων ISO/IEC. Αυτή η αλυσίδα διασφαλίζει ότι οι εκθέσεις και τα πιστοποιητικά που εκδίδονται γίνονται αποδεκτά παγκοσμίως.

Το εάν αυτή η δοκιμή μπορεί να προσφερθεί εντός αναγνωρισμένου πεδίου εξαρτάται από το προϊόν σας και το πρότυπο που εφαρμόζεται. Δεδομένου ότι η διαπίστευση βασίζεται στη μέθοδο, το πεδίο εφαρμογής επιβεβαιώνεται γραπτώς στο στάδιο της προσφοράς.

Πεδίο εφαρμογής και εξουσιοδοτήσεις

Σχετικοί Κανονισμοί

ΕΕ 2023/915 (μολυσματικές ουσίες στα τρόφιμα)
ΕΕ 37/2010 (υπολείμματα κτηνιατρικών φαρμάκων)
Αξιολογήσεις νιτροζαμίνης EMA/CHMP

Σελίδες όπου χρησιμοποιείται αυτή η μέθοδος

Αναλυτικές μέθοδοι — Τι κάνει αυτή η ομάδα μεθόδων;

Η παρακάτω ενότητα περιγράφει τον τομέα στον οποίο ανήκει η δοκιμή LC-MS/MS — ανάλυση· οι συνθήκες και τα κριτήρια αποδοχής αυτής της συγκεκριμένης δοκιμής δίνονται στις παραπάνω ενότητες. Το πεδίο εφαρμογής που αφορά το προϊόν σας επιβεβαιώνεται εγγράφως στο στάδιο της προσφοράς.

Οι σελίδες αναλυτικών μεθόδων είναι σελίδες για μια ΤΕΧΝΙΚΗ ΜΕΤΡΗΣΗΣ παρά για μια δοκιμή. Αυτή η διαφορά έχει σημασία: η «δοκιμή αλατονέφωσης» είναι δοκιμή και απαντά σε μία ερώτηση· το «ICP-MS» είναι τεχνική και χρησιμοποιείται σε δεκάδες διαφορετικές δοκιμές. Μερικές φορές ο χρήστης δεν αναζητά τη δοκιμή αλλά την τεχνική — επειδή το όνομα της μεθόδου είναι αυτό που εμφανίζεται στην προδιαγραφή του.

Αυτή η διάκριση γίνεται καθοριστική στην επιλογή εργαστηρίου. Όταν ένας πελάτης ζητά «ανάλυση βαρέων μετάλλων», το πραγματικό ερώτημα είναι με ποια τεχνική θα γίνει: το XRF είναι γρήγορο και μη καταστροφικό αλλά δεν διακρίνει ενώσεις· το AAS είναι οικονομικό για ένα μόνο στοιχείο· το ICP-OES ανιχνεύει πολλαπλά στοιχεία· το ICP-MS βλέπει επίπεδα ιχνών. Το ίδιο δείγμα δίνει αποτελέσματα με διαφορετικά όρια ανίχνευσης και διαφορετικές αβεβαιότητες στις τέσσερις τεχνικές.

Η επιλογή μεθόδου γίνεται με βάση τρία κριτήρια. ΟΡΙΟ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗΣ: βρίσκεται η αναζητούμενη συγκέντρωση εντός του εύρους που μπορεί να δει η μέθοδος; ΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΟΣ: είναι το υπόστρωμα του δείγματος (πλαστικό, τρόφιμο, έδαφος, μέταλλο) κάτι που μπορεί να χειριστεί η μέθοδος, και απαιτείται προεπεξεργασία; ΣΥΝΔΕΣΗ ΜΕ ΠΡΟΔΙΑΓΡΑΦΗ: επιβάλλει το πρότυπο προϊόντος ή η νομοθεσία συγκεκριμένη μέθοδο; Το τρίτο συχνά υπερισχύει των δύο πρώτων — η προδιαγραφή δεσμεύει τη μέθοδο.

Οι σελίδες μεθόδων δημιουργούν μια ΑΛΥΣΙΔΑ. Μια τεχνική συνδέεται με τις δοκιμαστικές σελίδες όπου χρησιμοποιείται, με τα πρότυπα στα οποία βασίζονται αυτές τις δοκιμές, με τη νομοθεσία με τα οποία συνδέονται αυτά τα πρότυπα και, τελικά, με τα καθεστώτα πρόσβασης στην αγορά. Το παράδειγμα αλυσίδας στο έγγραφο προέλευσης λειτουργεί ως εξής: XRF → ανάλυση μετάλλων → Συμμόρφωση με RoHS → περιορισμός βαρέων μετάλλων → σελίδες επικάλυψης. Από όποιο σύνδεσμο και αν εισέλθει ο χρήστης, φτάνει στους άλλους.

Η προετοιμασία του δείγματος είναι το αόρατο μισό του αποτελέσματος σε αυτήν την οικογένεια και είναι μεγαλύτερη πηγή λάθους από την ίδια την τεχνική. Η μέθοδος πέψης, ο βαθμός λείανσης, ο διαλύτης εκχύλισης και η αναλογία αραίωσης αλλάζουν σημαντικά το αποτέλεσμα. Το ίδιο δείγμα στο ίδιο όργανο δίνει διαφορετικό αποτέλεσμα με διαφορετική προετοιμασία. Συνεπώς, ο ορισμός της μεθόδου καλύπτει και την προετοιμασία.

Η βαθμονόμηση και η επαλήθευση είναι το τρίτο καθοριστικό στοιχείο. Ένα όργανο βαθμονομείται με πιστοποιημένο υλικό αναφοράς, η καμπύλη βαθμονόμησης επαληθεύεται περιοδικά και ένα δείγμα ελέγχου εκτελείται σε κάθε παρτίδα. Χωρίς αυτά τα βήματα, ένας αριθμός που παράγεται δεν είναι ανιχνεύσιμος ακόμα κι αν το όργανο λειτουργεί σωστά.

Ομάδες μεθόδων σε αυτόν τον τομέα

Στοιχειακή ανάλυση
ICP-OES, ICP-MS, AAS και XRF. Διαφέρουν ως προς το όριο ανίχνευσης, την ανοχή μήτρας και την χωρητικότητα πολλαπλών στοιχείων.
Χρωματογραφία
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS και χρωματογραφία ιόντων. Διαχωρίζει ένα μείγμα στα συστατικά του και μετρά το καθένα ξεχωριστά.
Φασματοσκοπία
FTIR, Raman, UV-Vis και οπτική εκπομπή. Για ταυτότητα υλικού, αναγνώριση λειτουργικής ομάδας και σύνθεση κράματος.
Θερμική ανάλυση
DSC, TGA, DMA και διαλατομετρία. Θερμοκρασίες μετάβασης, σύνθεση, αποσύνθεση και διαστατική συμπεριφορά.
Μικροσκοπία και απεικόνιση
Οπτική μικροσκοπία, SEM-EDS, ακτινογραφία και τομογραφία. Δομή, ελαττώματα και στοιχειακή κατανομή.
Κλασική (υγρή) χημεία
Τιτλοδότηση, βαρυμετρία και χρωματομετρία. Χρησιμοποιείται ως μέθοδος αναφοράς και για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων οργάνων.

Συχνές συγχύσεις σε αυτόν τον τομέα

Το XRF είναι ένα εργαλείο διαλογής. βλέπει στοιχεία και δεν διακρίνει ενώσεις. Μια απόφαση για μια περιορισμένη ένωση απαιτεί επιβεβαίωση με υγρή χημεία.
Η φράση «δεν ανιχνεύθηκε» δεν αποτελεί απόδειξη απουσίας· διαβάζεται μαζί με το όριο ανίχνευσης της μεθόδου.
Η προδιαγραφή δεσμεύει τη μέθοδο. Μια τεχνικά καλύτερη μέθοδος δεν γίνεται αποδεκτή εάν η προδιαγραφή απαιτεί άλλη.
Η προετοιμασία του δείγματος είναι μέρος του αποτελέσματος. μια αναφορά που δεν αναφέρει την προετοιμασία δεν μπορεί να αναπαραχθεί.
Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με διαφορετικές τεχνικές δεν μπορούν να συγκριθούν άμεσα. Τα όρια ανίχνευσης και οι αβεβαιότητες διαφέρουν.
Μια σελίδα μεθόδου δεν είναι δοκιμαστική σελίδα. ποια μέθοδος εφαρμόζεται σε ποια δοκιμή προέρχεται από το πρότυπο προϊόντος.

Ποιες αποφάσεις υποστηρίζουν αυτά τα αποτελέσματα

Αντιστοίχιση της μεθόδου της προδιαγραφής με το πεδίο του εργαστηρίου
Επιλογή μεθόδου βάσει ορίου ανίχνευσης και συμβατότητας μήτρας
Επιβεβαίωση οργανικού αποτελέσματος με μέθοδο αναφοράς
Εξάλειψη αποκλίσεων που προκύπτουν από την προετοιμασία δείγματος

Σχετικά τεστ

Συχνές ερωτήσεις για τη LC-MS/MS — ανάλυση

Γιατί είναι σημαντικό ένα εσωτερικό πρότυπο με σήμανση ισοτόπων;

Επειδή δείχνει την ίδια χημική συμπεριφορά με την αναλυόμενη ουσία, παρακολουθεί το φαινόμενο της μήτρας και την απώλεια εκχύλισης ένα προς ένα. Αυτό βελτιώνει σημαντικά την ακρίβεια του αποτελέσματος.

Τι σημαίνει αποτέλεσμα κάτω από το όριο ποσοτικοποίησης;

Δεν σημαίνει ότι η αναλυόμενη ουσία απουσιάζει, αλλά ότι είναι κάτω από το επίπεδο που μπορεί να μετρήσει αξιόπιστα η μέθοδος. Αυτό αναφέρει η έκθεση με ξεχωριστή δήλωση.