Ανάλυση LC-MS

Τι είναι η LC-MS — ανάλυση;

Το LC-MS είναι μια υβριδική τεχνική στην οποία συστατικά που διαχωρίζονται με υγρή χρωματογραφία μεταφέρονται σε φασματόμετρο μάζας μέσω μιας διεπαφής (συνήθως ιονισμός ηλεκτροψεκασμού). Η χρωματογραφία παρέχει διαχωρισμό και η μέτρηση μάζας παρέχει ταυτοποίηση μέσω της μοριακής μάζας.

Σκοπός της LC-MS — ανάλυση

Ο σκοπός είναι τόσο ο διαχωρισμός όσο και ο εντοπισμός μη πτητικών, πολικών ή θερμικά ασταθών ενώσεων που δεν μπορούν να αναλυθούν με GC. Με αυτήν την τεχνική μελετώνται πεπτίδια, πρωτεΐνες, μεταβολίτες φαρμάκων και πολικά υπολείμματα.

Σε ποια προϊόντα εφαρμόζεται η LC-MS — ανάλυση;

Φαρμακευτικά δραστικά συστατικά και οι μεταβολίτες τους
Επίπεδα φαρμάκων σε βιολογικά δείγματα
Πολικά υπολείμματα φυτοφαρμάκων και κτηνιατρικών φαρμάκων στα τρόφιμα
Μυκοτοξίνες
Χαρακτηρισμός πεπτιδίων και πρωτεϊνών

Σε ποιους τομείς χρησιμοποιείται η LC-MS — ανάλυση;

ΧημείαΦαρμακευτικάΤρόφιμαΚαλλυντικάΠεριβάλλονΒιοτεχνολογίαΓεωργία

Πρότυπα σχετικά με τη LC-MS — ανάλυση

ICH Q2(R2) (επικύρωση αναλυτικών διαδικασιών)
European Pharmacopoeia 2.2.43 (φασματομετρία μάζας)
EN 15662 (QuEChERS ekstraksiyonu)
ΕΕ 2021/808 (Επίδοση μεθόδων κτηνιατρικών υπολειμμάτων φαρμάκων)

Συνθήκες της LC-MS — ανάλυση

ιονισμός: Το ESI είναι κοινό. Το APCI προτιμάται σε μη πολικές ενώσεις
Polarite: Λειτουργία θετικού ή αρνητικού ιόντος—ανάλογα με την αναλυόμενη ουσία
Hareketli faz: Απαιτείται πτητικό buffer. Δεν χρησιμοποιούνται άλατα που διαταράσσουν τον ιονισμό
Matris etkisi: Η καταστολή ιόντων θα πρέπει να αξιολογηθεί. Συνιστάται βαθμονόμηση με αντιστοίχιση μήτρας

Εξοπλισμός για τη LC-MS — ανάλυση

Σύστημα HPLC/UPLC
Πηγή ιόντων ηλεκτροψεκασμού ή APCI
Αναλυτής μάζας (μονός τετραπολικός ή υψηλής ανάλυσης)
Σύστημα κενού και γεννήτρια αζώτου
Λογισμικό επεξεργασίας δεδομένων

Απαιτήσεις δείγματος για τη LC-MS — ανάλυση

Το δείγμα πρέπει να καταστεί διαλυτό σε πτητικό ρυθμιστικό διάλυμα
Πρέπει να είναι απαλλαγμένο από άλατα και απορρυπαντικά που διαταράσσουν τον ιονισμό
Η κατακρήμνιση πρωτεΐνης ή SPE εφαρμόζεται για βιολογικά δείγματα
Το δείγμα πρέπει να αποσταλεί στην κρύα αλυσίδα

Διάρκεια της LC-MS — ανάλυση

Ένα τρέξιμο είναι γενικά κάτω από 30 λεπτά. Εάν απαιτείται ανάπτυξη μεθόδου και αξιολόγηση επιδράσεων μήτρας, η συνολική διάρκεια επεκτείνεται σημαντικά.

Διαδικασία της LC-MS — ανάλυση

1Το δείγμα εξάγεται και καθαρίζεται από τα παρεμβαλλόμενα συστατικά.
2Προστίθεται ένα εσωτερικό πρότυπο.
3Ο διαχωρισμός πραγματοποιείται στη στήλη LC.
4Η έξοδος της στήλης τροφοδοτείται στην πηγή ιόντων και τα συστατικά ιονίζονται.
5Το φάσμα μάζας καταγράφεται.
6Η αναγνώριση γίνεται μέσω συμφωνίας μάζας και χρόνου συγκράτησης.
7Η ποσοτικοποίηση υπολογίζεται μέσω του εσωτερικού προτύπου.

Κριτήρια αποδοχής της LC-MS — ανάλυση

Μια μέθοδος παράγει ένα αποτέλεσμα. δεν βάζει όριο. Το εάν το αποτέλεσμα είναι αποδεκτό καθορίζεται από τον κανονισμό ή τις προδιαγραφές στις οποίες υπόκειται το προϊόν.

Αξιολόγηση Αποτελεσμάτων

Η καταστολή ιόντων είναι η πιο σημαντική πηγή σφάλματος στο LC-MS. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται ένα εσωτερικό πρότυπο και ένα πρότυπο με σήμανση ισοτόπων όπου είναι δυνατόν. Η αξιοπιστία του αποτελέσματος εξαρτάται από το αποτέλεσμα του πίνακα που έχει μετρηθεί κατά την επικύρωση της μεθόδου.

Έκθεση της LC-MS — ανάλυση

Περιγραφή δείγματος, ημερομηνία παραλαβής και αριθμός εργαστηρίου
Εφαρμοσμένη μέθοδος και πρότυπο αναφοράς, εάν υπάρχει
Όργανο και συνθήκες μέτρησης
Βήματα προετοιμασίας δειγμάτων
Αποτελέσματα μέτρησης και μονάδες
Αβεβαιότητα μέτρησης (εάν ζητηθεί)
Δήλωση ότι τα αποτελέσματα αφορούν μόνο το δείγμα που υποβλήθηκε για δοκιμή

Διαπίστευση

Η EUROLAB κατέχει διεθνώς αναγνωρισμένη διαπίστευση που λαμβάνεται από φορείς διαπίστευσης που συμμετείχαν στις συμφωνίες πολυμερούς αναγνώρισης IAF και ILAC, σύμφωνα με το ISO/IEC 17025 για εργαστηριακές δοκιμές, το ISO/IEC 17020 για την επιθεώρηση και την επιτήρηση και το ISO/IEC 17021-1 και το σύστημα πιστοποίησης προϊόντων ISO/IEC. Αυτή η αλυσίδα διασφαλίζει ότι οι εκθέσεις και τα πιστοποιητικά που εκδίδονται γίνονται αποδεκτά παγκοσμίως.

Το εάν αυτή η δοκιμή μπορεί να προσφερθεί εντός αναγνωρισμένου πεδίου εξαρτάται από το προϊόν σας και το πρότυπο που εφαρμόζεται. Δεδομένου ότι η διαπίστευση βασίζεται στη μέθοδο, το πεδίο εφαρμογής επιβεβαιώνεται γραπτώς στο στάδιο της προσφοράς.

Πεδίο εφαρμογής και εξουσιοδοτήσεις

Σχετικοί Κανονισμοί

ΕΕ 37/2010 (όρια υπολειμμάτων κτηνιατρικών φαρμάκων)
ΕΕ 2023/915 (μολυσματικές ουσίες στα τρόφιμα)
ICH M10 (επικύρωση βιοαναλυτικής μεθόδου)

Σελίδες όπου χρησιμοποιείται αυτή η μέθοδος

Αναλυτικές μέθοδοι — Τι κάνει αυτή η ομάδα μεθόδων;

Η παρακάτω ενότητα περιγράφει τον τομέα στον οποίο ανήκει η δοκιμή LC-MS — ανάλυση· οι συνθήκες και τα κριτήρια αποδοχής αυτής της συγκεκριμένης δοκιμής δίνονται στις παραπάνω ενότητες. Το πεδίο εφαρμογής που αφορά το προϊόν σας επιβεβαιώνεται εγγράφως στο στάδιο της προσφοράς.

Οι σελίδες αναλυτικών μεθόδων είναι σελίδες για μια ΤΕΧΝΙΚΗ ΜΕΤΡΗΣΗΣ παρά για μια δοκιμή. Αυτή η διαφορά έχει σημασία: η «δοκιμή αλατονέφωσης» είναι δοκιμή και απαντά σε μία ερώτηση· το «ICP-MS» είναι τεχνική και χρησιμοποιείται σε δεκάδες διαφορετικές δοκιμές. Μερικές φορές ο χρήστης δεν αναζητά τη δοκιμή αλλά την τεχνική — επειδή το όνομα της μεθόδου είναι αυτό που εμφανίζεται στην προδιαγραφή του.

Αυτή η διάκριση γίνεται καθοριστική στην επιλογή εργαστηρίου. Όταν ένας πελάτης ζητά «ανάλυση βαρέων μετάλλων», το πραγματικό ερώτημα είναι με ποια τεχνική θα γίνει: το XRF είναι γρήγορο και μη καταστροφικό αλλά δεν διακρίνει ενώσεις· το AAS είναι οικονομικό για ένα μόνο στοιχείο· το ICP-OES ανιχνεύει πολλαπλά στοιχεία· το ICP-MS βλέπει επίπεδα ιχνών. Το ίδιο δείγμα δίνει αποτελέσματα με διαφορετικά όρια ανίχνευσης και διαφορετικές αβεβαιότητες στις τέσσερις τεχνικές.

Η επιλογή μεθόδου γίνεται με βάση τρία κριτήρια. ΟΡΙΟ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗΣ: βρίσκεται η αναζητούμενη συγκέντρωση εντός του εύρους που μπορεί να δει η μέθοδος; ΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΟΣ: είναι το υπόστρωμα του δείγματος (πλαστικό, τρόφιμο, έδαφος, μέταλλο) κάτι που μπορεί να χειριστεί η μέθοδος, και απαιτείται προεπεξεργασία; ΣΥΝΔΕΣΗ ΜΕ ΠΡΟΔΙΑΓΡΑΦΗ: επιβάλλει το πρότυπο προϊόντος ή η νομοθεσία συγκεκριμένη μέθοδο; Το τρίτο συχνά υπερισχύει των δύο πρώτων — η προδιαγραφή δεσμεύει τη μέθοδο.

Οι σελίδες μεθόδων δημιουργούν μια ΑΛΥΣΙΔΑ. Μια τεχνική συνδέεται με τις δοκιμαστικές σελίδες όπου χρησιμοποιείται, με τα πρότυπα στα οποία βασίζονται αυτές τις δοκιμές, με τη νομοθεσία με τα οποία συνδέονται αυτά τα πρότυπα και, τελικά, με τα καθεστώτα πρόσβασης στην αγορά. Το παράδειγμα αλυσίδας στο έγγραφο προέλευσης λειτουργεί ως εξής: XRF → ανάλυση μετάλλων → Συμμόρφωση με RoHS → περιορισμός βαρέων μετάλλων → σελίδες επικάλυψης. Από όποιο σύνδεσμο και αν εισέλθει ο χρήστης, φτάνει στους άλλους.

Η προετοιμασία του δείγματος είναι το αόρατο μισό του αποτελέσματος σε αυτήν την οικογένεια και είναι μεγαλύτερη πηγή λάθους από την ίδια την τεχνική. Η μέθοδος πέψης, ο βαθμός λείανσης, ο διαλύτης εκχύλισης και η αναλογία αραίωσης αλλάζουν σημαντικά το αποτέλεσμα. Το ίδιο δείγμα στο ίδιο όργανο δίνει διαφορετικό αποτέλεσμα με διαφορετική προετοιμασία. Συνεπώς, ο ορισμός της μεθόδου καλύπτει και την προετοιμασία.

Η βαθμονόμηση και η επαλήθευση είναι το τρίτο καθοριστικό στοιχείο. Ένα όργανο βαθμονομείται με πιστοποιημένο υλικό αναφοράς, η καμπύλη βαθμονόμησης επαληθεύεται περιοδικά και ένα δείγμα ελέγχου εκτελείται σε κάθε παρτίδα. Χωρίς αυτά τα βήματα, ένας αριθμός που παράγεται δεν είναι ανιχνεύσιμος ακόμα κι αν το όργανο λειτουργεί σωστά.

Ομάδες μεθόδων σε αυτόν τον τομέα

Στοιχειακή ανάλυση
ICP-OES, ICP-MS, AAS και XRF. Διαφέρουν ως προς το όριο ανίχνευσης, την ανοχή μήτρας και την χωρητικότητα πολλαπλών στοιχείων.
Χρωματογραφία
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS και χρωματογραφία ιόντων. Διαχωρίζει ένα μείγμα στα συστατικά του και μετρά το καθένα ξεχωριστά.
Φασματοσκοπία
FTIR, Raman, UV-Vis και οπτική εκπομπή. Για ταυτότητα υλικού, αναγνώριση λειτουργικής ομάδας και σύνθεση κράματος.
Θερμική ανάλυση
DSC, TGA, DMA και διαλατομετρία. Θερμοκρασίες μετάβασης, σύνθεση, αποσύνθεση και διαστατική συμπεριφορά.
Μικροσκοπία και απεικόνιση
Οπτική μικροσκοπία, SEM-EDS, ακτινογραφία και τομογραφία. Δομή, ελαττώματα και στοιχειακή κατανομή.
Κλασική (υγρή) χημεία
Τιτλοδότηση, βαρυμετρία και χρωματομετρία. Χρησιμοποιείται ως μέθοδος αναφοράς και για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων οργάνων.

Συχνές συγχύσεις σε αυτόν τον τομέα

Το XRF είναι ένα εργαλείο διαλογής. βλέπει στοιχεία και δεν διακρίνει ενώσεις. Μια απόφαση για μια περιορισμένη ένωση απαιτεί επιβεβαίωση με υγρή χημεία.
Η φράση «δεν ανιχνεύθηκε» δεν αποτελεί απόδειξη απουσίας· διαβάζεται μαζί με το όριο ανίχνευσης της μεθόδου.
Η προδιαγραφή δεσμεύει τη μέθοδο. Μια τεχνικά καλύτερη μέθοδος δεν γίνεται αποδεκτή εάν η προδιαγραφή απαιτεί άλλη.
Η προετοιμασία του δείγματος είναι μέρος του αποτελέσματος. μια αναφορά που δεν αναφέρει την προετοιμασία δεν μπορεί να αναπαραχθεί.
Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με διαφορετικές τεχνικές δεν μπορούν να συγκριθούν άμεσα. Τα όρια ανίχνευσης και οι αβεβαιότητες διαφέρουν.
Μια σελίδα μεθόδου δεν είναι δοκιμαστική σελίδα. ποια μέθοδος εφαρμόζεται σε ποια δοκιμή προέρχεται από το πρότυπο προϊόντος.

Ποιες αποφάσεις υποστηρίζουν αυτά τα αποτελέσματα

Αντιστοίχιση της μεθόδου της προδιαγραφής με το πεδίο του εργαστηρίου
Επιλογή μεθόδου βάσει ορίου ανίχνευσης και συμβατότητας μήτρας
Επιβεβαίωση οργανικού αποτελέσματος με μέθοδο αναφοράς
Εξάλειψη αποκλίσεων που προκύπτουν από την προετοιμασία δείγματος

Σχετικά τεστ

Συχνές ερωτήσεις για τη LC-MS — ανάλυση

Ποια είναι η διαφορά μεταξύ LC-MS και LC-MS/MS;

Το LC-MS εκτελεί μία μέτρηση μάζας. Το LC-MS/MS επιλέγει και τεμαχίζει το πρόδρομο ιόν και παρακολουθεί τα ιόντα του προϊόντος. είναι πολύ πιο επιλεκτικό και έχει χαμηλότερο όριο ποσοτικοποίησης σε μιγαδικούς πίνακες.

Γιατί χρειάζεται ένα πτητικό buffer;

Τα μη πτητικά άλατα συσσωρεύονται στην πηγή ιόντων, καταστέλλοντας το σήμα και μολύνοντας το όργανο. Ως εκ τούτου χρησιμοποιούνται πτητικά ρυθμιστικά διαλύματα όπως μυρμηκικό οξύ ή οξικό αμμώνιο.