E. coli | EUROLAB

Τι είναι η E. coli;

Η ανάλυση E. coli απαντά σε δύο ξεχωριστά ερωτήματα. Το COUNT (ISO 16649) δίνει τον συνολικό αριθμό E. coli ως δείκτη μόλυνσης από κόπρανα. Το STEC DETECTION (ISO 13136) διερευνά την παρουσία παθογόνων οροομάδων που παράγουν τοξίνη Shiga με μέθοδο που βασίζεται στην PCR. Αυτή είναι μια ανάλυση ασφάλειας και δεν πρέπει να συγχέεται με μια απογραφή.

Σκοπός της E. coli

Στόχος είναι η ανίχνευση της μόλυνσης των κοπράνων και η διερεύνηση της παρουσίας παθογόνων στελεχών E. coli. Δεδομένου ότι το STEC μπορεί να προκαλέσει σοβαρή ασθένεια ακόμη και σε μικρούς αριθμούς, αντιμετωπίζεται ως ερώτηση παρουσίας/απουσίας και όχι ως απογραφή.

Σε ποια προϊόντα εφαρμόζεται η E. coli;

Προϊόντα κρέατος ωμά και μισοψημένα
Νωπό γάλα και τυριά που παράγονται από νωπό γάλα
Φρέσκα φρούτα, λαχανικά και φύτρα
Πόσιμο και οικιακό νερό
προϊόντα έτοιμα γεύματα

Σε ποιους τομείς χρησιμοποιείται η E. coli;

ΤρόφιμαΓεωργίαΛιανική πώλησηΠεριβάλλον

Πρότυπα σχετικά με τη E. coli

TS ISO 16649-1/-2/-3 (βήτα-γλυκουρονιδάση θετικός αριθμός E. coli)
TS EN ISO 9308-1 (Ε. coli και κολοβακτηρίδιο σε νερό — φιλτράρισμα μεμβράνης)
TS EN ISO 13136 (Ανίχνευση STEC — PCR σε πραγματικό χρόνο)
Σειρά TS EN ISO 6887 (προετοιμασία δείγματος)

Συνθήκες της E. coli

Απογραφή: Σε επιλεκτικό μέσο, στη θερμοκρασία και στο χρόνο που ορίζονται στο πρότυπο
STEC: Έλεγχος γονιδίων stx και eae με PCR μετά από εμπλουτισμό
Επαλήθευση: Καλλιεργητική απομόνωση σε PCR θετικά δείγματα

Εξοπλισμός για τη E. coli

Αποστειρωμένο ντουλάπι και θερμοκοιτίδες
Σύστημα PCR σε πραγματικό χρόνο
Συσκευή ανοσομαγνητικού διαχωρισμού
Membran filtrasyon sistemi
Μετρητής αποικίας

Απαιτήσεις δείγματος για τη E. coli

Το δείγμα πρέπει να αποσταλεί κλειστό και στην αρχική του συσκευασία, διατηρώντας την κρύα αλυσίδα. Το αν η μέθοδος δειγματοληψίας είναι αντιπροσωπευτική της παρτίδας καθορίζει την εγκυρότητα του αποτελέσματος. Το αποτέλεσμα από μια ενιαία μονάδα δεν αρκεί για να ληφθεί απόφαση για το κόμμα.
Στην ανάλυση STEC, η ποσότητα του δείγματος πρέπει να είναι στο επίπεδο που ορίζεται στο πρότυπο.
Τα δείγματα νερού πρέπει να παραδίδονται σε αποστειρωμένο δοχείο και εντός καθορισμένου χρόνου.
Το σχέδιο δειγματοληψίας πρέπει να καθορίζεται ανάλογα με την κατηγορία προϊόντος

Διάρκεια της E. coli

Η καταμέτρηση διαρκεί όσο και η περίοδος επώασης. Υπάρχουν στάδια εμπλουτισμού και PCR στην ανάλυση STEC. Σε δείγματα θετικά στην PCR, η επιβεβαίωση της καλλιέργειας παρατείνει σημαντικά το χρόνο.

Διαδικασία της E. coli

1Το δείγμα παρασκευάζεται ασηπτικά.
2Για την καταμέτρηση, φυτεύονται σε επιλεκτικά μέσα και επωάζονται.
3Οι τυπικές αποικίες καταμετρώνται και επαληθεύονται εάν είναι απαραίτητο.
4Για το STEC, το δείγμα εμπλουτίζεται.
5Εφαρμόζεται εξαγωγή DNA και PCR σε πραγματικό χρόνο.
6Σε περίπτωση θετικών αποτελεσμάτων γίνεται απομόνωση και οροτυποποίηση.

Κριτήρια αποδοχής της E. coli

Για το STEC (EC) 2073/2005 ορίζει κριτήρια ασφάλειας τροφίμων σε ορισμένες κατηγορίες τροφίμων και αυτό αποτελεί κριτήριο παρουσίας/απουσίας. Ο αριθμός E. coli θεωρείται ως κριτήριο υγιεινής της διαδικασίας. Τα κριτήρια αποδοχής είναι μικροβιολογικά κριτήρια που ορίζονται βάσει κατηγορίας τροφίμων στο (ΕΕ) 2073/2005. Ο κανονισμός διακρίνει δύο τύπους κριτηρίων: το κριτήριο ασφάλειας των τροφίμων (μπορεί το προϊόν να διατεθεί στην αγορά) και το κριτήριο υγιεινής της διαδικασίας (είναι η διαδικασία παραγωγής υπό έλεγχο). Ποιο ισχύει εξαρτάται από την κατηγορία του προϊόντος και επιβεβαιώνεται από το κείμενο του ισχύοντος κανονισμού.

Αξιολόγηση Αποτελεσμάτων

Ένας χαμηλός αριθμός E. coli δεν σημαίνει ότι δεν υπάρχει STEC: παθογόνα στελέχη μπορούν να προκαλέσουν νόσο σε πολύ χαμηλούς αριθμούς και μπορεί να μην εμφανιστούν στο συνολικό αριθμό. Οι δύο αναλύσεις απαντούν σε διαφορετικές ερωτήσεις και δεν είναι εναλλάξιμες.

Έκθεση της E. coli

Αναγνώριση δείγματος και πληροφορίες παρτίδας
Πρότυπο και μέθοδος που εφαρμόζεται
Καταμέτρηση αποτελεσμάτων και αβεβαιότητα μέτρησης
Αποτελέσματα PCR και γονίδια-στόχοι για STEC
Πληροφορίες απομόνωσης και ορότυπου σε θετικές περιπτώσεις

Διαπίστευση

Η EUROLAB κατέχει διεθνώς αναγνωρισμένη διαπίστευση που λαμβάνεται από φορείς διαπίστευσης που συμμετείχαν στις συμφωνίες πολυμερούς αναγνώρισης IAF και ILAC, σύμφωνα με το ISO/IEC 17025 για εργαστηριακές δοκιμές, το ISO/IEC 17020 για την επιθεώρηση και την επιτήρηση και το ISO/IEC 17021-1 και το σύστημα πιστοποίησης προϊόντων ISO/IEC. Αυτή η αλυσίδα διασφαλίζει ότι οι εκθέσεις και τα πιστοποιητικά που εκδίδονται γίνονται αποδεκτά παγκοσμίως.

Το εάν αυτή η δοκιμή μπορεί να προσφερθεί εντός αναγνωρισμένου πεδίου εξαρτάται από το προϊόν σας και το πρότυπο που εφαρμόζεται. Δεδομένου ότι η διαπίστευση βασίζεται στη μέθοδο, το πεδίο εφαρμογής επιβεβαιώνεται γραπτώς στο στάδιο της προσφοράς.

Πεδίο εφαρμογής και εξουσιοδοτήσεις

Σχετικοί Κανονισμοί

(ΕΚ) 2073/2005 Κανονισμός Μικροβιολογικών Κριτηρίων
(ΕΕ) 2020/2184 Οδηγία για το πόσιμο νερό

Δοκιμές Τροφίμων — Τι καλύπτει αυτός ο τομέας δοκιμών;

Η παρακάτω ενότητα περιγράφει τον τομέα στον οποίο ανήκει η δοκιμή E. coli· οι συνθήκες και τα κριτήρια αποδοχής αυτής της συγκεκριμένης δοκιμής δίνονται στις παραπάνω ενότητες. Το πεδίο εφαρμογής που αφορά το προϊόν σας επιβεβαιώνεται εγγράφως στο στάδιο της προσφοράς.

Οι δοκιμές τροφίμων δείχνουν ότι ένα προϊόν είναι ασφαλές για κατανάλωση και περιέχει ό,τι αναγράφει η ετικέτα του. Η οικογένεια λειτουργεί σε τρεις άξονες: μικροβιολογική ασφάλεια, χημική ασφάλεια και διατροφική σύνθεση. Και οι τρεις απαιτούν διαφορετική εργαστηριακή υποδομή, διαφορετικό σώμα μεθόδων και διαφορετικό χρόνο απόκρισης.

Το πιο χαρακτηριστικό γνώρισμα του τομέα είναι η ΠΙΕΣΗ ΧΡΟΝΟΥ. Ένα δείγμα χάλυβα μπορεί να περιμένει σε ένα ράφι· ένα δείγμα ωμού γάλακτος ή φρέσκου κρέατος όχι. Η ώρα λήψης του δείγματος, η θερμοκρασία μεταφοράς και ο χρόνος άφιξης στο εργαστήριο καθορίζουν άμεσα την εγκυρότητα του αποτελέσματος. Γι' αυτό, στη μικροβιολογία τροφίμων, η καταγραφή της αλυσίδας ψύξης είναι αναπόσπαστο μέρος της έκθεσης δοκιμής.

Στη μικροβιολογική πλευρά υπάρχουν δύο διαφορετικά ερωτήματα που δεν πρέπει να συγχέονται. Η ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ενός παθογόνου είναι ποιοτικό ερώτημα: υπάρχει Σαλμονέλα στο δείγμα ή όχι; Η ΚΑΤΑΜΕΤΡΗΣΗ δεικτών μικροοργανισμών είναι ποσοτικό ερώτημα και δείκτης υγιεινής παραγωγής. Η απουσία παθογόνου σε ένα προϊόν δεν αποδεικνύει καλή υγιεινή· αν ο συνολικός αριθμός μεσόφιλων αερόβιων είναι υψηλός, υπάρχει πρόβλημα στη διεργασία.

Στη χημική πλευρά μετρώνται υπολείμματα φυτοφαρμάκων, μυκοτοξίνες, βαρέα μέταλλα, πρόσθετα, υπολείμματα κτηνιατρικών φαρμάκων και ρύποι διεργασίας (ακρυλαμίδιο, φουράνιο, PAH). Οι μέθοδοι πολλαπλών υπολειμμάτων σε αυτόν τον τομέα (LC-MS/MS και GC-MS/MS με βάση QuEChERS) μπορούν να ανιχνεύσουν εκατοντάδες δραστικές ουσίες σε μία ανάλυση· τα όρια ορίζονται ξεχωριστά για κάθε ζεύγος προϊόντος-ουσίας.

Στην πλευρά της σύστασης προσδιορίζονται πρωτεΐνη, λίπος, υγρασία, τέφρα, ίνες, προφίλ σακχάρων, σύσταση λιπαρών οξέων και περιεκτικότητα σε βιταμίνες και μέταλλα. Αυτές οι τιμές αποτελούν τη βάση της διατροφικής δήλωσης στην ετικέτα και τα εύρη ανοχής ορίζονται από τη νομοθεσία — η διαφορά μεταξύ δηλωμένης και μετρημένης τιμής πρέπει να παραμένει εντός αυτής της ανοχής.

ΔΕΝ υπάρχει σήμανση CE στα τρόφιμα, και αυτό διαμορφώνει τον τρόπο λειτουργίας του τομέα. Η συμμόρφωση αποδεικνύεται μέσω της λειτουργίας ενός συστήματος ασφάλειας τροφίμων βάσει HACCP, της τήρησης των κανόνων επισήμανσης και της μη υπέρβασης ορίων ρύπων, υπολειμμάτων και μικροβιολογικών παραμέτρων. Ένα αποτέλεσμα δοκιμής παράγει απόδειξη όχι για πιστοποιητικό αλλά για ένα λειτουργικό σύστημα.

Η διαχείριση αλλεργιογόνων έχει ιδιαίτερη βαρύτητα. Η παρουσία μη δηλωμένου αλλεργιογόνου σε ένα προϊόν είναι μία από τις πιο συχνές αιτίες ανάκλησης τροφίμων. Η ανάλυση εδώ συνοδεύεται από επικύρωση καθαρισμού: αποδεικνύεται ότι η γραμμή έχει καθαριστεί επαρκώς μετά από παραγωγή που περιείχε αλλεργιογόνο και ότι ο κίνδυνος διασταυρούμενης επιμόλυνσης είναι υπό έλεγχο.

Τα εθελοντικά σχήματα έχουν καταστεί ουσιαστικά υποχρεωτικά σε αυτόν τον τομέα. Οι αλυσίδες λιανικής απαιτούν από τους προμηθευτές τους πιστοποιητικό βάσει σχήματος αναγνωρισμένου από τη GFSI (BRCGS, IFS, FSSC 22000)· χωρίς αυτό, η είσοδος στο ράφι είναι πρακτικά αδύνατη.

Ομάδες μεθόδων σε αυτόν τον τομέα

Ανίχνευση παθογόνων
Ανίχνευση Σαλμονέλας, Listeria monocytogenes, Campylobacter, Cronobacter και E. coli παραγωγού τοξίνης Shiga· μέθοδοι καλλιέργειας και μοριακές μέθοδοι.
Καταμετρήσεις δεικτών
Συνολική μεσόφιλη αερόβια καταμέτρηση, Enterobacteriaceae, κολοβακτηριοειδή και E. coli, θετικοί σε κοαγκουλάση σταφυλόκοκκοι, ζύμες και μύκητες, γαλακτικά βακτήρια, θειοαναγωγικά Clostridia.
Υπολείμματα φυτοφαρμάκων και κτηνιατρικών
Ανίχνευση πολλαπλών υπολειμμάτων με LC-MS/MS και GC-MS/MS με εκχύλιση QuEChERS.
Μυκοτοξίνες και ρύποι
Αφλατοξίνες, ωχρατοξίνη Α, δεοξυνιβαλενόλη, πατουλίνη· βαρέα μέταλλα (ICP-MS), ακρυλαμίδιο και ενώσεις PAH.
Διατροφική σύνθεση
Πρωτεΐνη Kjeldahl, προφίλ λίπους και λιπαρών οξέων, υγρασία, τέφρα, διαιτητικές ίνες, προφίλ σακχάρων, αναλύσεις βιταμινών και μετάλλων.
Αλλεργιογόνα και αυθεντικότητα
Αναλύσεις αλλεργιογόνων γλουτένης, γάλακτος, αυγού, ξηρών καρπών και σόγιας· μοριακές μέθοδοι για ταυτοποίηση είδους και ανίχνευση νοθείας.

Συχνές συγχύσεις σε αυτόν τον τομέα

Η δειγματοληψία είναι το μισό του αποτελέσματος. Ένα δείγμα που μεταφέρθηκε σε λάθος θερμοκρασία ή καθυστέρησε δίνει άκυρο αποτέλεσμα ακόμη κι αν αναλυθεί σωστά στο εργαστήριο.
Η απουσία παθογόνου δεν αποδεικνύει καλή υγιεινή· οι καταμετρήσεις δεικτών δίνουν ξεχωριστή πληροφορία και οι δύο διαβάζονται μαζί.
Ένα αποτέλεσμα από δείγμα που λήφθηκε από παρτίδα μπορεί να γενικευτεί σε ολόκληρη την παρτίδα μόνο αν το σχέδιο δειγματοληψίας έχει καταρτιστεί στατιστικά.
Τα όρια ορίζονται σε ξεχωριστούς κανονισμούς ανά ομάδα προϊόντων και ενημερώνονται τακτικά· μια απόφαση συμμόρφωσης βασισμένη σε παρωχημένο πίνακα ορίων ενδέχεται να είναι λανθασμένη.
Στις εξαγωγές, τα όρια της χώρας προορισμού ενδέχεται να διαφέρουν από τα όρια της ΕΕ· το ίδιο προϊόν μπορεί να είναι συμμορφούμενο σε μία αγορά και μη συμμορφούμενο σε άλλη.

Ποιες αποφάσεις υποστηρίζουν αυτά τα αποτελέσματα

Επαλήθευση του σχεδίου HACCP και παρακολούθηση διεργασίας
Η βάση της διατροφικής δήλωσης και των πληροφοριών αλλεργιογόνων στην ετικέτα
Πιστοποιητικά υγείας πριν την εξαγωγή και συμμόρφωση με τα όρια της αγοράς προορισμού
Έλεγχος αποδοχής βάσει προμηθευτή και παρτίδας
Μελέτες διάρκειας ζωής και καθορισμός συνθηκών αποθήκευσης
Παραγωγή αποδεικτικών στοιχείων για ελέγχους βάσει σχημάτων αναγνωρισμένων από τη GFSI

Σχετικά τεστ

Συχνές ερωτήσεις για τη E. coli

Η PCR επέστρεψε θετική, είναι σίγουρα το προϊόν μολυσμένο;

Η PCR υποδεικνύει την παρουσία του γονιδίου στόχου. Δεν αποδεικνύει μόνο ότι υπάρχουν ζωντανά βακτήρια. Επομένως, το πρότυπο απαιτεί επαλήθευση με πολιτισμική απομόνωση των θετικών αποτελεσμάτων. Το αποτέλεσμα της επαλήθευσης λαμβάνεται ως βάση για την τελική απόφαση.