Анализ аллергенов — ИФА/ПЦР/ЖХ-МС/МС и аллергены в косметике

Что такое Allergen?

Анализ аллергенов охватывает две отдельные области. Наличие и количество аллергенов, перечисленных в Приложении II FOOD (ЕС) 1169/2011, определяют с помощью ИФА, ПЦР в реальном времени или ЖХ-МС/МС; Широко используется ИФА R5 на глютен. В КОСМЕТИКЕ парфюмерные аллергены, которые должны быть указаны в Приложении III (EC) 1223/2009, измеряются методом ГХ-МС.

Allergen: цель

Целью является проверка точности декларации на этикетке и эффективности контроля перекрестного загрязнения. Незаявленный аллерген является одной из наиболее частых причин отзыва продуктов питания.

К каким изделиям применяется Allergen?

Продукты заявлены как безглютеновые
Выпечка и закуски
Продукты, заявленные как безмолочные и без фундука
Готовые блюда и соусы
Парфюмированная косметическая продукция

В каких отраслях применяется Allergen?

Пищевая продукцияСельское хозяйствоРозничная торговляКосметика

Стандарты, связанные с Allergen

Серия TS EN 15634 (обнаружение аллергенов в пищевых продуктах — общие предположения и методы ПЦР)
AOAC 2012.01 (Определение глютена методом R5 ELISA)
TS EN ISO 21571 (экстракция нуклеиновой кислоты)
Серия ISO/TS 20224 (определение вида животных, ПЦР в реальном времени)
Серия TS EN 16274 (Определение аллергенных пахучих веществ в косметике методом ГХ-МС)

Allergen: условия

Выбор метода: Protein hedefliyse ELISA/LC-MS, DNA hedefliyse PCR
Эффект обработки: Термическая обработка может денатурировать белок и снизить результат ИФА.
Gluten: С помощью R5 ELISA; Определен порог для декларации «без глютена».
Kozmetik alerjen: Вещества, перечисленные в Приложении III, проверяются методом ГХ-МС.

Оборудование для Allergen

Устройство для чтения планшетов ИФА и инкубатор
Система ПЦР в реальном времени
ЖХ-МС/МС
ГХ-МС (на косметические аллергены)
Гомогенизатор и измельчитель

Требования к образцам для Allergen

Гомогенизированный репрезентативный образец
Также можно взять пробы мазков с линии, если исследуется перекрестное загрязнение.
Параметры обработки должны быть объявлены
В косметике должна быть представлена парфюмерная композиция и список INCI.

Allergen: продолжительность

Результаты ИФА доступны относительно быстро. Анализы ПЦР и ЖХ-МС/МС занимают несколько рабочих дней; Скрининг косметических аллергенов занимает такое же время из-за измерений методом ГХ-МС.

Allergen: порядок проведения

1Определяют целевой аллерген и соответствующий метод.
2Образец гомогенизируют и экстрагируют.
3В ИФА измерения проводятся на основе антител.
4В ПЦР применяются экстракция ДНК и видоспецифичная амплификация.
5Целевые пептиды измеряют с помощью ЖХ-МС/МС.
6В косметике аллергенные душистые вещества проверяются методом ГХ-МС.

Allergen: критерии приёмки

В пищевом продукте (ЕС) 1169/2011 аллергены Приложения II должны быть указаны выделенными в списке ингредиентов. Он устанавливает пороговый уровень (ЕС) 828/2014 для заявления о «безглютеновом» продукте. Приложение III к косметике (ЕС) 1223/2009 требует, чтобы перечисленные парфюмерные аллергены были указаны на этикетке отдельно, если они присутствуют в концентрациях, превышающих определенные.

Оценка результатов

Отрицательный результат ограничен пределом обнаружения метода и не гарантирует отсутствия аллергенов. Кроме того, обработка может изменить целевой белок, ухудшив результат ELISA; В этом случае ПЦР или ЖХ-МС/МС более надежны. Управление перекрестным загрязнением достигается за счет разделения производства и проверки очистки, а не анализа.

Allergen: протокол

Описание образца и список целевых аллергенов
Применяемый метод и его обоснование
Результат и предел обнаружения для каждого аллергена
Информация о параметрах обработки
Сравнение законодательного порога или заявления

Аккредитация

EUROLAB имеет международно признанную аккредитацию, полученную от органов по аккредитации, являющихся участниками многосторонних соглашений о признании IAF и ILAC, в соответствии с ISO/IEC 17025 для лабораторных испытаний, ISO/IEC 17020 для инспекций и надзора, а также ISO/IEC 17021-1 и ISO/IEC 17065 для сертификации систем и продукции. Эта цепочка гарантирует, что выданные отчеты и сертификаты принимаются по всему миру.

Возможность проведения этого теста в рамках аккредитованной области зависит от вашего продукта и применяемого стандарта; поскольку аккредитация основана на методе, объем работ подтверждается в письменной форме на этапе предложения.

Область применения и разрешения

Соответствующие правила

Регламент (ЕС) 1169/2011 «Информация о пищевых продуктах для потребителей», Приложение II
Декларация о безглютеновой продукции Регламент (ЕС) 828/2014
(EC) 1223/2009 Регламент косметической продукции, Приложение III

Испытания пищевых продуктов — Что охватывает эта область испытаний?

В разделе ниже описывается область, к которой относится испытание Allergen; условия и критерии приемки именно этого испытания приведены в разделах выше. Объём, специфичный для вашего продукта, подтверждается письменно на этапе коммерческого предложения.

Пищевые испытания показывают, что продукт безопасен для потребления и содержит то, что указано на этикетке. Семейство работает по трём осям: микробиологическая безопасность, химическая безопасность и пищевой состав. Все три требуют разной лабораторной инфраструктуры, разного набора методов и разных сроков.

Наиболее характерная черта этой области — ДАВЛЕНИЕ ВРЕМЕНИ. Стальной образец может подождать на полке; проба сырого молока или свежего мяса — нет. Время отбора пробы, температура транспортировки и время доставки в лабораторию напрямую определяют достоверность результата. Поэтому в пищевой микробиологии запись холодовой цепи — неотъемлемая часть протокола испытания.

На микробиологической стороне есть два разных вопроса, которые нельзя путать. ОБНАРУЖЕНИЕ патогена — это качественный вопрос: присутствует ли сальмонелла в пробе или нет? ПОДСЧЁТ индикаторных микроорганизмов — количественный вопрос и показатель гигиены производства. Отсутствие патогена в продукте не означает хорошую гигиену; если общее количество мезофильных аэробных микроорганизмов высокое, значит в процессе есть проблема.

На химической стороне измеряются остатки пестицидов, микотоксины, тяжёлые металлы, добавки, остатки ветеринарных препаратов и технологические загрязнители (акриламид, фуран, ПАУ). Мультиостаточные методы в этой области (LC-MS/MS и GC-MS/MS на основе QuEChERS) способны обнаруживать сотни активных веществ за один анализ; пределы определены отдельно для каждой пары продукт-вещество.

На стороне состава определяются белок, жир, влажность, зола, клетчатка, сахарный профиль, состав жирных кислот, содержание витаминов и минералов. Эти значения — основа пищевой декларации на этикетке, а диапазоны допуска определены законодательством — разница между заявленным и измеренным значением должна оставаться в пределах этого допуска.

На пищевые продукты НЕТ маркировки CE, и это определяет специфику работы в этой области. Соответствие демонстрируется через функционирование системы безопасности пищевых продуктов на основе HACCP, соблюдение правил маркировки и непревышение пределов по загрязнителям, остаткам и микробиологическим показателям. Результат испытания даёт доказательство не для сертификата, а для работающей системы.

Управление аллергенами имеет особое значение. Наличие незаявленного аллергена в продукте — одна из самых частых причин отзыва пищевой продукции. Анализ здесь идёт вместе с валидацией очистки: демонстрируется, что линия была должным образом очищена после производственного цикла с аллергеном, и что риск перекрёстного загрязнения находится под контролем.

Добровольные схемы в этой области фактически стали обязательными. Розничные сети требуют от поставщиков сертификат по схеме, признанной GFSI (BRCGS, IFS, FSSC 22000); без него попасть на полку практически невозможно.

Группы методов в этой области

Обнаружение патогенов
Обнаружение сальмонеллы, Listeria monocytogenes, кампилобактера, Cronobacter и шигатоксин-продуцирующей E. coli; культуральные и молекулярные методы.
Подсчёт индикаторных микроорганизмов
Общее количество мезофильных аэробных микроорганизмов, Enterobacteriaceae, колиформы и E. coli, коагулазоположительные стафилококки, дрожжи и плесени, молочнокислые бактерии, сульфитредуцирующие клостридии.
Остатки пестицидов и ветеринарных препаратов
Мультиостаточный скрининг методами LC-MS/MS и GC-MS/MS с экстракцией QuEChERS.
Микотоксины и загрязнители
Афлатоксины, охратоксин А, дезоксиниваленол, патулин; тяжёлые металлы (ИСП-МС), акриламид и соединения ПАУ.
Пищевой состав
Белок по Кьельдалю, профиль жиров и жирных кислот, влажность, зола, пищевые волокна, сахарный профиль, анализ витаминов и минералов.
Аллергены и подлинность
Анализ аллергенов глютена, молока, яйца, орехов и сои; молекулярные методы для идентификации видов и обнаружения фальсификации.

Часто путаемое в этой области

Отбор пробы — половина результата. Проба, транспортированная при неправильной температуре или с задержкой, даёт недействительный результат, даже если она правильно проанализирована в лаборатории.
Отсутствие патогена не означает хорошую гигиену; подсчёт индикаторных микроорганизмов даёт отдельную информацию, и оба показателя читаются вместе.
Результат, полученный из пробы, взятой из партии, можно распространить на всю партию только если план отбора проб был установлен статистически.
Пределы определены в отдельных нормативных актах по группам продукции и регулярно обновляются; решение о соответствии, основанное на устаревшей таблице пределов, может быть ошибочным.
При экспорте пределы страны назначения могут отличаться от пределов ЕС; один и тот же продукт может соответствовать требованиям на одном рынке и не соответствовать на другом.

Какие решения подкрепляют эти результаты

Верификация плана HACCP и мониторинг процесса
Основа для пищевой декларации и информации об аллергенах на этикетке
Санитарные сертификаты перед экспортом и соответствие пределам целевого рынка
Приёмочный контроль по поставщику и партии
Исследования сроков годности и определение условий хранения
Подготовка доказательств для аудитов по схемам, признанным GFSI

Связанные тесты

Allergen: частые вопросы

Разве нам не следует провести анализ вместо предупреждения «может содержать»?

Анализ является частью демонстрации того, что риск перекрестного загрязнения контролируется, но одного этого недостаточно. Предупреждающее заявление должно быть основано на реальной оценке риска; Анализ поддерживает, а не заменяет эту оценку.

Почему уровень ИФА в термообработанных продуктах низкий?

Термическая обработка меняет структуру белка и может разрушить участки, распознаваемые антителом. В этом случае результат может быть ниже истины; ПЦР, нацеленная на ДНК, или ЖХ-МС/МС, нацеленная на пептиды, будут более подходящими.