LC-MS/MS — تحلیل چیست؟
LC-MS/MS سیستمی است که در آن یک طیف سنج جرمی چهار قطبی سه گانه پس از کروماتوگرافی مایع جفت می شود. تحلیلگر اول یون پیش ساز را انتخاب می کند، سلول برخورد آن را تکه تکه می کند و تحلیلگر سوم یون های محصول را نظارت می کند. جفت پیش ماده-محصول نظارت شده یک انتقال (MRM) نامیده می شود.
هدف LC-MS/MS — تحلیل
هدف اندازه گیری قابل اعتماد غلظت های بسیار پایین در نمونه هایی با تداخل ماتریسی شدید است. آنالیز ردیابی نمونه های خون، پلاسما، مواد غذایی و محیطی با این تکنیک انجام می شود.
LC-MS/MS — تحلیل بر چه محصولاتی اعمال می‌شود؟
- سطح دارو و متابولیت در نمونه های بیولوژیکی
- مایکوتوکسین و باقیمانده داروهای دامپزشکی در غذا
- ناخالصی های نیتروزامین در محصولات دارویی
- آلاینده های قطبی در آب
- غربالگری تقلب در محصولات مکمل
LC-MS/MS — تحلیل در چه صنایعی کاربرد دارد؟
استانداردهای مرتبط با LC-MS/MS — تحلیل
- ICH M10 (تأیید روش تحلیلی زیستی)
- EU 2021/808 (معیارهای عملکرد برای روش‌های باقیمانده)
- EN 15662 (QuEChERS)
- دستورالعمل های ICH M7 / EMA نیتروزامین
شرایط LC-MS/MS — تحلیل
- نظارت
- حداقل دو پاس MRM برای هر آنالیت
- Teyit
- سازگاری نسبت یون بین انتقالی با مرجع
- استاندارد داخلی
- در صورت امکان، از آنالوگ با برچسب ایزوتوپی استفاده می شود
- کالیبراسیون
- در صورت وجود اثر ماتریس، کالیبراسیون مطابق با ماتریس
تجهیزات LC-MS/MS — تحلیل
- سیستم UPLC/HPLC
- طیف سنج جرمی چهار قطبی سه گانه
- منبع یون الکترواسپری
- SPE و واحدهای آماده سازی نمونه خودکار
- مولد نیتروژن و سیستم خلاء
الزامات نمونه برای LC-MS/MS — تحلیل
- رسوب پروتئین، استخراج مایع-مایع یا SPE برای نمونه های بیولوژیکی مورد نیاز است
- هموژنیزاسیون و استخراج از نوع QuEChERS برای غذا اعمال می شود
- نمونه باید در زنجیره سرد و در لوله های مناسب ارسال شود
- فهرست آنالیت های مورد جستجو باید در ابتدا مشخص شود
مدت LC-MS/MS — تحلیل
زمان اجرا بیشتر زیر 15 دقیقه است. آماده سازی نمونه و اعتبارسنجی روش، مدت زمان اصلی را تعیین می کند.
روش اجرای LC-MS/MS — تحلیل
- 1نمونه همگن شده و استاندارد داخلی اضافه می شود.
- 2استخراج و پاکسازی اعمال می شود.
- 3عصاره بر روی ستون LC تزریق می شود.
- 4انتقال MRM برای آنالیت های مورد نظر نظارت می شود.
- 5نسبت های یونی با مرجع مقایسه می شوند.
- 6مقدار از طریق منحنی کالیبراسیون محاسبه می شود.
- 7نتایج بازیابی، خالی و کنترل کیفیت ارزیابی می‌شوند.
معیارهای پذیرش LC-MS/MS — تحلیل
مقبولیت نتیجه بر اساس محدودیت های موجود در مقررات مربوطه باقیمانده، آلاینده یا ناخالصی ارزیابی می شود. این روش محدودیتی تعریف نمی کند.
ارزیابی نتایج
نتیجه در محدوده کاری معتبر روش معنادار است. مقادیر زیر محدوده به جای اینکه به مقدار عددی اجباری شوند، به عنوان "زیر حد کمیت" گزارش می شوند.
گزارش LC-MS/MS — تحلیل
- توضیحات نمونه، تاریخ دریافت و شماره آزمایشگاه
- روش اعمال شده و استاندارد مرجع، در صورت وجود
- شرایط ابزار و اندازه گیری
- مراحل آماده سازی نمونه
- نتایج و واحدهای اندازه گیری
- عدم قطعیت اندازه گیری (در صورت درخواست)
- بیانیه ای مبنی بر اینکه نتایج فقط به نمونه ارسال شده برای آزمایش مربوط می شود
اعتباربخشی
EUROLAB دارای اعتبار شناخته شده بین المللی است که از نهادهای اعتباربخشی طرف قراردادهای شناسایی چندجانبه IAF و ILAC، تحت ISO/IEC 17025 برای تست های آزمایشگاهی، ISO/IEC 17020 برای بازرسی و نظارت، و ISO/IEC 17021-1 و سیستم گواهی محصول ISO/IEC. این زنجیره تضمین می کند که گزارش ها و گواهی های صادر شده در سراسر جهان پذیرفته می شوند.
اینکه آیا این آزمون می تواند در محدوده معتبر ارائه شود به محصول شما و استاندارد اعمال شده بستگی دارد. از آنجایی که اعتبارسنجی مبتنی بر روش است، دامنه به صورت کتبی در مرحله نقل قول تأیید می شود.
محدوده و مجوزهامقررات مرتبط
- اتحادیه اروپا 2023/915 (آلودگی در مواد غذایی)
- اتحادیه اروپا 37/2010 (بقایای داروهای دامپزشکی)
- ارزیابی های نیتروزامین EMA/CHMP
صفحاتی که از این روش استفاده می شود
روش‌های تحلیلی — این گروه روش‌ها چه می‌کند؟
بخش زیر حوزه‌ای را توصیف می‌کند که آزمون LC-MS/MS — تحلیل به آن تعلق دارد؛ شرایط و معیارهای پذیرش این آزمون خاص در بخش‌های بالا آمده است. دامنه ویژه محصول شما در مرحله پیشنهاد قیمت به‌صورت مکتوب مشخص می‌شود.
صفحات روش تحلیلی صفحاتی درباره یک فن اندازه‌گیری هستند نه یک آزمون. این تفاوت مهم است: «آزمون مه نمکی» یک آزمون است و به یک پرسش پاسخ می‌دهد؛ «ICP-MS» یک فن است و در ده‌ها آزمون مختلف استفاده می‌شود. گاهی کاربر به‌دنبال آزمون نیست بلکه به‌دنبال فن است — زیرا نام روش چیزی است که در مشخصات او درج شده.
این تمایز در انتخاب آزمایشگاه تعیین‌کننده می‌شود. زمانی که مشتری درخواست «تحلیل فلزات سنگین» می‌کند، پرسش واقعی این است که با کدام فن انجام خواهد شد: XRF سریع و غیرمخرب است اما ترکیبات را تشخیص نمی‌دهد؛ AAS برای یک عنصر واحد مقرون‌به‌صرفه است؛ ICP-OES چند عنصر را غربالگری می‌کند؛ ICP-MS سطوح ناچیز را می‌بیند. همان نمونه در چهار فن نتایجی با حدود تشخیص و عدم قطعیت‌های متفاوت می‌دهد.
انتخاب روش بر اساس سه معیار انجام می‌شود. حد تشخیص: آیا غلظت موردنظر در محدوده‌ای است که روش می‌تواند ببیند؟ سازگاری ماتریس: آیا ماتریس نمونه (پلاستیک، غذا، خاک، فلز) از نوعی است که روش می‌تواند مدیریت کند، و آیا پیش‌تیمار لازم است؟ پیوند با مشخصات: آیا استاندارد محصول یا قانون روش خاصی را الزامی می‌کند؟ معیار سوم اغلب بر دو معیار اول غلبه می‌کند — مشخصات فنی روش را مقید می‌کند.
صفحات روش یک زنجیره می سازند. یک تکنیک به صفحات آزمایشی که در آن استفاده می‌شود، به استانداردهایی که آن تست‌ها بر آنها استوار است، به قوانین مرتبط با آن استانداردها و در نهایت به رژیم‌های دسترسی به بازار مرتبط است. زنجیره مثال در سند منبع به این صورت عمل می کند: XRF → تجزیه و تحلیل فلزات → انطباق با RoHS → محدودیت فلزات سنگین → صفحات پوشش. کاربر از هر لینکی که وارد شود، به دیگران می رسد.
آماده سازی نمونه نیمی از نتیجه نامرئی در این خانواده است و منبع خطای بیشتری نسبت به خود تکنیک است. روش هضم، درجه آسیاب، حلال استخراج و نسبت رقت به طور قابل توجهی نتیجه را تغییر می دهد. نمونه مشابه روی یک ابزار با آماده سازی متفاوت نتیجه متفاوتی می دهد. بنابراین تعریف روش آماده سازی را نیز پوشش می دهد.
کالیبراسیون و تأیید سومین مؤلفه تعیین کننده است. یک ابزار با مواد مرجع تایید شده کالیبره می شود، منحنی کالیبراسیون به صورت دوره ای تایید می شود و یک نمونه کنترل در هر دسته اجرا می شود. بدون این مراحل، عدد تولید شده قابل ردیابی نیست، حتی اگر ابزار به درستی کار کند.
گروه‌های روش در این حوزه
تحلیل عنصری
ICP-OES، ICP-MS، AAS و XRF. آنها در حد تشخیص، تحمل ماتریس و ظرفیت چند عنصری متفاوت هستند.
کروماتوگرافی
GC، GC-MS، HPLC، LC-MS/MS و کروماتوگرافی یونی. مخلوطی را به اجزای آن جدا می کند و هر کدام را جداگانه اندازه می گیرد.
طیف‌سنجی
FTIR، Raman، UV-Vis و انتشار نوری. برای هویت مواد، شناسایی گروه عملکردی و ترکیب آلیاژ.
تحلیل حرارتی
DSC، TGA، DMA و دیلاتومتری. دماهای انتقال، ترکیب، تجزیه و رفتار ابعادی.
میکروسکوپی و تصویربرداری
میکروسکوپ نوری، SEM-EDS، رادیوگرافی و توموگرافی. ساختار، عیوب و توزیع عنصری.
شیمی کلاسیک (تر)
تیتراسیون، وزن سنجی و رنگ سنجی. به عنوان یک روش مرجع و در تأیید نتایج ابزاری استفاده می شود.
موارد رایج اشتباه‌گرفته‌شده در این حوزه
- XRF یک ابزار غربالگری است. عناصر را می بیند و ترکیبات را تشخیص نمی دهد. تصمیم گیری در مورد یک ترکیب محدود نیاز به تأیید با شیمی مرطوب دارد.
- عبارت «تشخیص داده نشد» اثبات عدم وجود نیست؛ همراه با حد تشخیص روش خوانده می‌شود.
- مشخصات روش را مقید می کند. در صورتی که مشخصات به روش دیگری نیاز داشته باشد، روش فنی بهتر پذیرفته نمی شود.
- آماده سازی نمونه بخشی از نتیجه است. گزارشی که آماده سازی را بیان نمی کند قابل تکرار نیست.
- نتایج به دست آمده توسط تکنیک های مختلف را نمی توان به طور مستقیم با هم مقایسه کرد. حدود تشخیص و عدم قطعیت آنها متفاوت است.
- صفحه روش یک صفحه آزمایشی نیست. کدام روش برای کدام آزمایش از استاندارد محصول استفاده می شود.
این نتایج از کدام تصمیم پشتیبانی می‌کنند
- تطبیق روش نوشته‌شده در مشخصات با دامنه آزمایشگاه
- انتخاب روش بر اساس حد تشخیص و سازگاری ماتریس
- تأیید نتیجه ابزاری با روش مرجع
- رفع انحرافات ناشی از آماده‌سازی نمونه
تست های مرتبط
پرسش‌های متداول درباره LC-MS/MS — تحلیل
چرا استاندارد داخلی با برچسب ایزوتوپی مهم است؟
از آنجایی که همان رفتار شیمیایی آنالیت را نشان می دهد، اثر ماتریس و افت استخراج را یک به یک دنبال می کند. این به طور قابل توجهی دقت نتیجه را بهبود می بخشد.
نتیجه زیر حد کمیت به چه معناست؟
این بدان معنا نیست که آنالیت وجود ندارد، بلکه به این معنی نیست که سطح آن زیر سطحی است که روش می تواند به طور قابل اعتماد اندازه گیری کند. این گزارش با بیانیه ای جداگانه به این موضوع اشاره می کند.