Allergenanalyse — ELISA / PCR / LC-MS/MS und Allergene in Kosmetika

Was ist Allergen?

Die Allergenanalyse umfasst zwei getrennte Bereiche. Das Vorhandensein und die Menge der in Anhang II der FOOD (EU) 1169/2011 aufgeführten Allergene werden durch ELISA, Echtzeit-PCR oder LC-MS/MS bestimmt; Der R5-ELISA für Gluten ist weit verbreitet. In der Kosmetik werden Parfümallergene, die gemäß Anhang III (EG) 1223/2009 kennzeichnungspflichtig sind, mittels GC-MS gemessen.

Zweck von Allergen

Ziel ist es, die Richtigkeit der Etikettendeklaration und die Wirksamkeit der Kreuzkontaminationskontrolle zu überprüfen. Nicht deklarierte Allergene sind eine der häufigsten Ursachen für Lebensmittelrückrufe.

Bei welchen Produkten wird Allergen angewendet?

Als glutenfrei deklarierte Produkte
Backwaren und Snacks
Produkte, die als milch- und haselnussfrei deklariert sind
Fertiggerichte und Soßen
Parfümierte Kosmetikprodukte

In welchen Branchen wird Allergen eingesetzt?

LebensmittelLandwirtschaftEinzelhandelKosmetika

Normen zu Allergen

TS EN 15634-Reihe (Allergennachweis in Lebensmitteln — allgemeine Annahmen und PCR-Methoden)
AOAC 2012.01 (Bestimmung von Gluten durch R5 ELISA)
TS EN ISO 21571 (Nukleinsäureextraktion)
ISO/TS 20224-Reihe (Tierartenbestimmung, Echtzeit-PCR)
TS EN 16274-Reihe (Bestimmung allergener Geruchsstoffe in Kosmetika mittels GC-MS)

Prüfbedingungen für Allergen

Methodenauswahl: Protein hedefliyse ELISA/LC-MS, DNA hedefliyse PCR
Verarbeitungseffekt: Eine Wärmebehandlung kann das Protein denaturieren und das ELISA-Ergebnis verschlechtern
Gluten: Durch R5 ELISA; Definierter Schwellenwert für die Deklaration „glutenfrei“.
Kozmetik alerjen: In Anhang III aufgeführte Substanzen werden mittels GC-MS untersucht

Prüfgerät für Allergen

ELISA-Plattenlesegerät und Inkubator
Echtzeit-PCR-System
LC-MS/MS
GC-MS (für kosmetische Allergene)
Homogenisator und Mahlwerk

Probenanforderungen für Allergen

Homogenisierte repräsentative Probe
Zur Untersuchung einer Kreuzkontamination können auch Leitungsabstrichproben entnommen werden.
Verarbeitungsparameter müssen deklariert werden
Parfümzusammensetzung und INCI-Liste müssen in Kosmetika angegeben werden

Dauer von Allergen

ELISA-Ergebnisse liegen relativ schnell vor. PCR- und LC-MS/MS-Analysen dauern mehrere Arbeitstage; Das Screening kosmetischer Allergene dauert aufgrund der GC-MS-Messung ähnlich lange.

Ablauf von Allergen

1Das Zielallergen und die geeignete Methode werden bestimmt.
2Die Probe wird homogenisiert und extrahiert.
3Beim ELISA erfolgt eine antikörperbasierte Messung.
4Bei der PCR kommen DNA-Extraktion und artspezifische Amplifikation zum Einsatz.
5Zielpeptide werden in LC-MS/MS gemessen.
6In Kosmetika werden allergene Duftstoffe mittels GC-MS gescreent.

Annahmekriterien für Allergen

In der Lebensmittelverordnung (EU) 1169/2011 müssen Allergene des Anhangs II in der Zutatenliste hervorgehoben angegeben werden. Es legt den in der Verordnung (EU) 828/2014 definierten Schwellenwert für die Angabe „glutenfrei“ fest. Anhang III der Kosmetikverordnung (EG) 1223/2009 verlangt, dass gelistete Parfümallergene gesondert auf dem Etikett angegeben werden, wenn sie in bestimmten Konzentrationen vorhanden sind.

Auswertung der Ergebnisse

Ein negatives Ergebnis ist auf die Nachweisgrenze der Methode beschränkt und garantiert nicht „allergenfrei“. Darüber hinaus kann die Verarbeitung das Zielprotein verändern und so das ELISA-Ergebnis verschlechtern. In diesem Fall ist PCR oder LC-MS/MS zuverlässiger. Das Kreuzkontaminationsmanagement wird durch Produktionstrennung und Reinigungsüberprüfung und nicht durch Analyse erreicht.

Prüfbericht zu Allergen

Probenbeschreibung und Zielallergenliste
Die angewandte Methode und ihre Begründung
Ergebnis und Nachweisgrenze für jedes Allergen
Informationen zu Verarbeitungsparametern
Vergleich der gesetzlichen Schwellenwerte oder Erklärungen

Akkreditierung

EUROLAB verfügt über eine international anerkannte Akkreditierung, die von Akkreditierungsstellen erhalten wurde, die Vertragspartei der multilateralen Anerkennungsvereinbarungen IAF und ILAC sind, gemäß ISO/IEC 17025 für Labortests, ISO/IEC 17020 für Inspektion und Überwachung sowie ISO/IEC 17021-1 und ISO/IEC 17065 für System- und Produktzertifizierung. Diese Kette stellt sicher, dass die ausgestellten Berichte und Zertifikate weltweit akzeptiert werden.

Ob dieser Test im akkreditierten Rahmen angeboten werden kann, hängt von Ihrem Produkt und der angewandten Norm ab; Da die Akkreditierung methodenbasiert erfolgt, wird der Umfang bereits im Angebotsstadium schriftlich bestätigt.

Geltungsbereich und Berechtigungen

Lebensmittelprüfung — Was umfasst dieser Prüfbereich?

Der folgende Abschnitt beschreibt das Gebiet, zu dem der Test Allergen gehört; die Bedingungen und Abnahmekriterien dieses konkreten Tests stehen in den obigen Abschnitten. Der für Ihr Produkt spezifische Umfang wird schriftlich im Angebotsstadium festgelegt.

Lebensmittelprüfungen zeigen, dass ein Produkt für den Verzehr sicher ist und das enthält, was auf dem Etikett steht. Die Familie arbeitet entlang dreier Achsen: mikrobiologische Sicherheit, chemische Sicherheit und Nährstoffzusammensetzung. Alle drei erfordern eine unterschiedliche Laborinfrastruktur, einen anderen Methodenkörper und eine unterschiedliche Bearbeitungszeit.

Das auffälligste Merkmal dieses Bereichs ist der ZEITDRUCK. Eine Stahlprobe kann im Regal warten; eine Rohmilch- oder Frischfleischprobe nicht. Der Zeitpunkt der Probenahme, die Transporttemperatur und die Zeit bis zum Erreichen des Labors bestimmen unmittelbar die Gültigkeit des Ergebnisses. Deshalb ist die Kühlkettenaufzeichnung in der Lebensmittelmikrobiologie ein untrennbarer Teil des Prüfberichts.

Auf der mikrobiologischen Seite gibt es zwei unterschiedliche Fragen, die nicht verwechselt werden dürfen. Der NACHWEIS eines Erregers ist eine qualitative Frage: Ist Salmonella in der Probe vorhanden oder nicht? Die KEIMZAHLBESTIMMUNG von Indikatororganismen ist eine quantitative Frage und ein Indikator für die Produktionshygiene. Das Fehlen eines Erregers in einem Produkt zeigt nicht, dass die Hygiene gut ist; ist die Gesamtzahl mesophiler aerober Keime hoch, liegt ein Problem im Prozess vor.

Auf der chemischen Seite werden Pestizidrückstände, Mykotoxine, Schwermetalle, Zusatzstoffe, Tierarzneimittelrückstände und Prozesskontaminanten (Acrylamid, Furan, PAK) gemessen. Multirückstandsmethoden in diesem Bereich (QuEChERS-basiertes LC-MS/MS und GC-MS/MS) können Hunderte Wirkstoffe in einer einzigen Analyse erfassen; Grenzwerte sind für jedes Produkt-Wirkstoff-Paar separat festgelegt.

Auf der Zusammensetzungsseite werden Protein, Fett, Feuchtigkeit, Asche, Ballaststoffe, Zuckerprofil, Fettsäurezusammensetzung sowie Vitamin- und Mineralstoffgehalt bestimmt. Diese Werte sind die Grundlage der Nährwertangabe auf dem Etikett, und die Toleranzbereiche sind gesetzlich festgelegt — die Abweichung zwischen deklariertem und gemessenem Wert muss innerhalb dieser Toleranz bleiben.

Es gibt KEINE CE-Kennzeichnung für Lebensmittel, und das prägt die Arbeitsweise dieses Bereichs. Die Konformität wird durch den Betrieb eines HACCP-basierten Lebensmittelsicherheitssystems, die Einhaltung der Kennzeichnungsvorschriften und die Nichtüberschreitung von Kontaminanten-, Rückstands- und mikrobiologischen Grenzwerten nachgewiesen. Ein Prüfergebnis liefert Belege nicht für ein Zertifikat, sondern für ein funktionierendes System.

Das Allergenmanagement hat besonderes Gewicht. Das Vorhandensein eines nicht deklarierten Allergens in einem Produkt ist eine der häufigsten Ursachen für Lebensmittelrückrufe. Die Analyse läuft hier zusammen mit der Reinigungsvalidierung: Es wird gezeigt, dass die Linie nach einem allergenhaltigen Produktionslauf ausreichend gereinigt wurde und das Risiko einer Kreuzkontamination unter Kontrolle ist.

Freiwillige Systeme sind in diesem Bereich faktisch verpflichtend geworden. Einzelhandelsketten verlangen von ihren Lieferanten ein Zertifikat nach einem GFSI-anerkannten Schema (BRCGS, IFS, FSSC 22000); ohne dieses ist der Weg ins Regal praktisch unmöglich.

Methodengruppen in diesem Bereich

Erregernachweis
Nachweis von Salmonella, Listeria monocytogenes, Campylobacter, Cronobacter und Shigatoxin-bildenden E. coli; kultur- und molekularbasierte Methoden.
Indikatorkeimzahlen
Gesamtzahl mesophiler aerober Keime, Enterobacteriaceae, Koliforme und E. coli, koagulase-positive Staphylokokken, Hefen und Schimmelpilze, Milchsäurebakterien, sulfitreduzierende Clostridien.
Pestizid- und Tierarzneimittelrückstände
Multirückstands-Screening mittels LC-MS/MS und GC-MS/MS mit QuEChERS-Extraktion.
Mykotoxine und Kontaminanten
Aflatoxine, Ochratoxin A, Deoxynivalenol, Patulin; Schwermetalle (ICP-MS), Acrylamid und PAK-Verbindungen.
Nährwertzusammensetzung
Kjeldahl-Protein, Fett- und Fettsäureprofil, Feuchtigkeit, Asche, Ballaststoffe, Zuckerprofil, Vitamin- und Mineralstoffanalysen.
Allergene und Authentizität
Gluten-, Milch-, Ei-, Nuss- und Soja-Allergenanalysen; molekulare Methoden zur Artbestimmung und Verfälschungserkennung.

Häufig verwechselt in diesem Bereich

Die Probenahme ist die halbe Miete des Ergebnisses. Eine bei falscher Temperatur transportierte oder verspätete Probe liefert ein ungültiges Ergebnis, selbst wenn sie im Labor korrekt analysiert wird.
Das Fehlen eines Erregers zeigt nicht, dass die Hygiene gut ist; Indikatorkeimzahlen liefern eine separate Information, und beide werden gemeinsam gelesen.
Ein Ergebnis aus einer aus einer Charge entnommenen Probe kann nur dann auf die gesamte Charge verallgemeinert werden, wenn der Probenahmeplan statistisch aufgestellt wurde.
Grenzwerte werden in separaten Verordnungen je Produktgruppe festgelegt und regelmäßig aktualisiert; eine Konformitätsentscheidung auf Basis einer veralteten Grenzwerttabelle kann falsch sein.
Bei Exporten können die Grenzwerte des Ziellandes von den EU-Grenzwerten abweichen; dasselbe Produkt kann in einem Markt konform und in einem anderen nicht konform sein.

Welche Entscheidungen diese Ergebnisse unterstützen

Verifizierung des HACCP-Plans und Prozessüberwachung
Die Grundlage für die Nährwertangabe und die Allergeninformation auf dem Etikett
Gesundheitszeugnisse vor dem Export und Einhaltung der Grenzwerte des Zielmarkts
Lieferanten- und chargenbasierte Abnahmekontrolle
Haltbarkeitsstudien und Festlegung der Lagerbedingungen
Erstellung von Nachweisen für Audits nach GFSI-anerkannten Systemen

Häufige Fragen zu Allergen

Sollten wir nicht eine Analyse anstelle einer „Kann enthalten“-Warnung haben?

Die Analyse ist Teil des Nachweises, dass das Risiko einer Kreuzkontamination beherrscht wird, sie allein reicht jedoch nicht aus. Der Warnhinweis muss auf einer echten Risikobewertung beruhen; Die Analyse unterstützt diese Einschätzung, ersetzt sie jedoch nicht.

Warum ist ELISA bei wärmebehandelten Produkten niedrig?

Eine Wärmebehandlung verändert die Struktur des Proteins und kann die vom Antikörper erkannten Regionen zerstören. In diesem Fall kann das Ergebnis niedriger sein als die Wahrheit; Geeigneter wäre eine DNA-gezielte PCR oder eine peptidgezielte LC-MS/MS.

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