ЖХ-МС/МС анализ

Что такое LC-MS/MS — анализ?

ЖХ-МС/МС — это система, в которой после жидкостной хроматографии подключается тройной квадрупольный масс-спектрометр. Первый анализатор выбирает ион-предшественник, ячейка столкновений фрагментирует его, а третий анализатор отслеживает ионы-продукты. Контролируемая пара предшественник-продукт называется переходом (MRM).

LC-MS/MS — анализ: цель

Цель состоит в том, чтобы надежно измерить очень низкие концентрации в образцах с интенсивным взаимодействием матрицы. С помощью этого метода выполняется следовой анализ проб крови, плазмы, продуктов питания и окружающей среды.

К каким изделиям применяется LC-MS/MS — анализ?

Уровни лекарств и метаболитов в биологических образцах
Остатки микотоксинов и ветеринарных препаратов в пищевых продуктах
Примеси нитрозаминов в фармацевтических продуктах
Полярные загрязнители в воде
Проверка фальсификации пищевых добавок

В каких отраслях применяется LC-MS/MS — анализ?

ХимияФармацевтикаПищевая продукцияКосметикаОкружающая средаБиотехнологияСельское хозяйствоГосударственный сектор

Стандарты, связанные с LC-MS/MS — анализ

ICH M10 (валидация биоаналитического метода)
ЕС 2021/808 (критерии эффективности для методов определения остатков)
EN 15662 (QuEChERS)
Рекомендации ICH M7 / EMA по нитрозаминам

LC-MS/MS — анализ: условия

Мониторинг: Не менее двух проходов MRM для каждого аналита
Teyit: Совместимость соотношения межпереходных ионов с эталонным
внутренний стандарт: Если возможно, используется меченный изотопом аналог.
Калибровка: Калибровка, соответствующая матрице, если присутствует эффект матрицы

Оборудование для LC-MS/MS — анализ

Система СЭЖХ/ВЭЖХ
Тройной квадрупольный масс-спектрометр
Электрораспылительный источник ионов
ТФЭ и автоматизированные установки пробоподготовки
Генератор азота и вакуумная система

Требования к образцам для LC-MS/MS — анализ

Для биологических образцов требуется осаждение белка, жидкостно-жидкостная экстракция или ТФЭ.
Гомогенизация и экстракция типа QuEChERS применяются для пищевых продуктов.
Образец должен быть отправлен в холодовую цепь и в подходящих пробирках.
Список искомых аналитов должен быть определен с самого начала.

LC-MS/MS — анализ: продолжительность

Время работы в основном составляет менее 15 минут; Подготовка проб и валидация метода определяют основную продолжительность.

LC-MS/MS — анализ: порядок проведения

1Пробу гомогенизируют и добавляют внутренний стандарт.
2Применяются экстракция и очистка.
3Экстракт вводят в колонку ЖХ.
4Переходы MRM отслеживаются для целевых аналитов.
5Соотношения ионов сравниваются с эталоном.
6Количество рассчитывается по калибровочной кривой.
7Оцениваются результаты восстановления, холостого анализа и контроля качества.

LC-MS/MS — анализ: критерии приёмки

Приемлемость результата оценивается с учетом ограничений, установленных в соответствующих правилах по остаткам, загрязняющим веществам или примесям. Метод не определяет предел.

Оценка результатов

Результат имеет смысл в пределах проверенного рабочего диапазона метода. Значения ниже диапазона сообщаются как «ниже предела количественного определения», а не принудительно выражаются в числовом значении.

LC-MS/MS — анализ: протокол

Описание образца, дата получения и номер лаборатории
Примененный метод и эталонный стандарт, если таковой имеется.
Прибор и условия измерения
Этапы подготовки проб
Результаты измерений и единицы измерения
Неопределенность измерения (по запросу)
Заявление о том, что результаты относятся только к образцу, представленному на тестирование.

Аккредитация

EUROLAB имеет международно признанную аккредитацию, полученную от органов по аккредитации, являющихся участниками многосторонних соглашений о признании IAF и ILAC, в соответствии с ISO/IEC 17025 для лабораторных испытаний, ISO/IEC 17020 для инспекций и надзора, а также ISO/IEC 17021-1 и ISO/IEC 17065 для сертификации систем и продукции. Эта цепочка гарантирует, что выданные отчеты и сертификаты принимаются по всему миру.

Возможность проведения этого теста в рамках аккредитованной области зависит от вашего продукта и применяемого стандарта; поскольку аккредитация основана на методе, объем работ подтверждается в письменной форме на этапе предложения.

Область применения и разрешения

Соответствующие правила

ЕС 2023/915 (загрязнения в пищевых продуктах)
ЕС 37/2010 (остатки ветеринарных препаратов)
Оценка нитрозаминов EMA/CHMP

Страницы, на которых используется этот метод

Аналитические методы — Что делает эта группа методов?

В разделе ниже описывается область, к которой относится испытание LC-MS/MS — анализ; условия и критерии приемки именно этого испытания приведены в разделах выше. Объём, специфичный для вашего продукта, подтверждается письменно на этапе коммерческого предложения.

Страницы об аналитических методах — это страницы о МЕТОДЕ ИЗМЕРЕНИЯ, а не об испытании. Это различие важно: «испытание соляным туманом» — это испытание, отвечающее на один вопрос; «ИСП-МС» — это метод, используемый в десятках различных испытаний. Иногда пользователь ищет не испытание, а метод — потому что именно название метода фигурирует в его спецификации.

Это различие становится решающим при выборе лаборатории. Когда клиент просит «анализ тяжёлых металлов», настоящий вопрос заключается в том, каким методом он будет выполнен: РФА быстр и неразрушающий, но не различает соединения; ААС экономичен для одного элемента; ИСП-АЭС определяет несколько элементов; ИСП-МС видит следовые уровни. Один и тот же образец даёт результаты с разными пределами обнаружения и разной неопределённостью в четырёх методах.

Выбор метода производится по трём критериям. ПРЕДЕЛ ОБНАРУЖЕНИЯ: находится ли искомая концентрация в диапазоне, который может определить метод? СОВМЕСТИМОСТЬ С МАТРИЦЕЙ: способен ли метод работать с матрицей образца (пластик, продукт питания, почва, металл), и требуется ли предварительная обработка? СВЯЗЬ СО СПЕЦИФИКАЦИЕЙ: требует ли стандарт на продукцию или законодательство определённого метода? Третий критерий часто перевешивает первые два — спецификация связывает метод.

Страницы методов создают ЦЕПОЧКУ. Методика связана с тестовыми страницами, на которых она используется, со стандартами, на которых основаны эти тесты, с законодательством, с которым связаны эти стандарты, и, в конечном итоге, с режимами доступа к рынку. Цепочка примеров в исходном документе работает следующим образом: РФА → анализ металлов → соответствие RoHS → ограничение содержания тяжелых металлов → страницы с покрытием. По какой бы ссылке пользователь ни перешел, он попадает и на другие.

Подготовка проб – это невидимая половина результата в этом семействе, и она является более серьезным источником ошибок, чем сама методика. Метод разложения, степень измельчения, растворитель для экстракции и степень разбавления заметно меняют результат. Один и тот же образец на одном и том же приборе дает разные результаты при разной подготовке; следовательно, определение метода охватывает и подготовку.

Калибровка и проверка являются третьим определяющим компонентом. Прибор калибруется с использованием сертифицированного эталонного материала, калибровочная кривая периодически проверяется, и в каждой партии отбирается контрольный образец. Без этих действий полученное число невозможно отследить, даже если прибор работает правильно.

Группы методов в этой области

Элементный анализ
ИСП-ОЭС, ИСП-МС, ААС и РФА. Они различаются пределом обнаружения, допуском матрицы и многоэлементной емкостью.
Хроматография
ГХ, ГХ-МС, ВЭЖХ, ЖХ-МС/МС и ионная хроматография. Он разделяет смесь на компоненты и измеряет каждый отдельно.
Спектроскопия
FTIR, комбинационное рассеяние, УФ-Вид и оптическое излучение. Для идентификации материала, идентификации функциональных групп и состава сплава.
Термический анализ
ДСК, ТГА, ДМА и дилатометрия. Температуры перехода, состав, разложение и размерное поведение.
Микроскопия и визуализация
Оптическая микроскопия, SEM-EDS, рентгенография и томография. Структура, дефекты и распределение элементов.
Классическая («мокрая») химия
Титрование, гравиметрия и колориметрия. Используется в качестве эталонного метода и при подтверждении инструментальных результатов.

Часто путаемое в этой области

XRF — инструмент проверки; он видит элементы и не различает соединения. Решение об ограниченном соединении требует подтверждения методом влажной химии.
Формулировка «не обнаружено» не является доказательством отсутствия; она читается вместе с пределом обнаружения метода.
Спецификация связывает метод. Технически лучший метод не принимается, если спецификация требует другого.
Подготовка проб является частью результата; отчет, в котором не указано, что препарат не воспроизводим.
Результаты, полученные разными методами, нельзя сравнивать напрямую; их пределы обнаружения и неопределенности различаются.
Страница метода не является тестовой страницей; какой метод применяется к какому испытанию взят из стандарта на продукцию.

Какие решения подкрепляют эти результаты

Сопоставление метода из спецификации с областью аккредитации лаборатории
Выбор метода по пределу обнаружения и совместимости с матрицей
Подтверждение инструментального результата эталонным методом
Устранение отклонений, связанных с пробоподготовкой

Связанные тесты

LC-MS/MS — анализ: частые вопросы

Почему важен внутренний стандарт, меченный изотопами?

Поскольку он демонстрирует то же химическое поведение, что и аналит, он отслеживает эффект матрицы и потери при экстракции один к одному. Это существенно повышает точность результата.

Что означает результат ниже предела количественного определения?

Это не означает, что аналит отсутствует, но это означает, что его уровень ниже уровня, который можно надежно измерить методом. Об этом в докладе говорится отдельным заявлением.