Che cos'è Method Validation?
La validazione del metodo analitico è la dimostrazione sperimentale che un metodo è idoneo all'uso previsto. ICH Q2(R2) definisce le caratteristiche prestazionali da valutare: specificità, linearità e intervallo, accuratezza, precisione (ripetibilità e precisione intermedia), limiti di rilevamento e quantificazione e robustezza.
Scopo di Method Validation
Lo scopo è dimostrare che i dati analitici prodotti sono affidabili. Un risultato prodotto con un metodo non convalidato non è accettato nel dossier di autorizzazione all'immissione in commercio o nelle GMP.
A quali prodotti si applica Method Validation?
- Metodi di dosaggio e impurezze
- Metodi di prova di dissoluzione
- Metodi di verifica della pulizia
- Metodi microbiologici
- Metodi bioanalitici
In quali settori si utilizza Method Validation?
Norme relative a Method Validation
- ICH Q2(R2) (convalida delle procedure analitiche)
- ICH Q14 (sviluppo di procedure analitiche)
- Ph.Eur. 5.21 (metodi chemiometrici) e relativi capitoli generali
- USP <1225> (convalida delle procedure compendiali)
- USP <1226> (verifica delle procedure compendiali)
Condizioni di Method Validation
- Tipo di metodo
- Identità, analisi, test limite per le impurità o test quantitativi sulle impurità; i parametri richiesti variano di conseguenza
- Criteri di accettazione
- Predefinito nel protocollo di validazione
- Degrado forzato
- Necessario per i metodi che indicano la stabilità come prova di specificità
Apparecchiatura per Method Validation
- Sistemi HPLC/UPLC/GC
- Spettrofotometri
- Standard di riferimento e standard di impurità
- Software di valutazione statistica
Requisiti del campione per Method Validation
- Campioni di principio attivo, prodotto e placebo
- Standard di impurità noti
- Campioni di degradazione forzata
- È necessario fornire la bozza del metodo e la descrizione dell'uso previsto
Durata di Method Validation
Uno studio di validazione completo richiede settimane a causa del numero di parametri e di requisiti replicati. La verifica di un metodo compendiale è più breve.
Procedura di Method Validation
- 1L'uso previsto e il tipo del metodo sono definiti.
- 2Viene predisposto il protocollo di validazione ed i criteri di accettazione.
- 3Viene eseguito uno studio di specificità; se necessario viene applicata la degradazione forzata.
- 4Viene effettuato lo studio della linearità e della portata.
- 5Vengono eseguiti studi sull'accuratezza (recupero) e sulla precisione.
- 6Vengono valutati i limiti di rilevazione/quantificazione e la robustezza; la relazione è preparata.
Criteri di accettazione di Method Validation
I criteri di accettazione sono definiti nel protocollo di validazione PRIMA dello studio e sono stabiliti in base alla destinazione d'uso del metodo. ICH Q2(R2) definisce quali parametri devono essere valutati; l'organizzazione fissa le soglie numeriche di accettazione con la propria giustificazione.
Valutazione dei risultati
La validazione mostra che il metodo è adatto all’uso definito, non che funzionerà in ogni condizione. È necessaria una nuova valutazione se il metodo deve essere utilizzato in una matrice diversa o in un intervallo di concentrazione diverso. Per i metodi farmacopea può essere sufficiente la verifica invece della validazione completa.
Rapporto di Method Validation
- Descrizione del metodo e uso previsto
- Protocollo di validazione e criteri di accettazione
- Dati grezzi e valutazione statistica per ciascun parametro
- Confronto dei risultati con i criteri
- Conclusione e ambito di validità del metodo
Accreditamento
EUROLAB detiene un accreditamento riconosciuto a livello internazionale ottenuto da organismi di accreditamento parte degli accordi di riconoscimento multilaterale IAF e ILAC, secondo ISO / IEC 17025 per prove di laboratorio, ISO / IEC 17020 per ispezione e sorveglianza e ISO / IEC 17021-1 e ISO / IEC 17065 per certificazione di sistema e prodotto. Questa catena garantisce che i rapporti e i certificati emessi siano accettati in tutto il mondo.
Se questo test può essere offerto nell'ambito accreditato dipende dal prodotto e dallo standard applicato; poiché l'accreditamento è basato sul metodo, l'ambito viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Ambito e autorizzazioniRegolamenti correlati
- Direttiva 2001/83/CE sui medicinali per uso umano
- Guida alle GMP (EudraLex Volume 4)
Analisi farmaceutica — Cosa copre questo ambito di prova?
La sezione seguente descrive l'ambito a cui appartiene la prova Method Validation; le condizioni e i criteri di accettazione di questa prova specifica sono riportati nelle sezioni precedenti. L'ambito specifico del vostro prodotto viene confermato per iscritto in fase di offerta.
L'analisi farmaceutica determina l'identità, la purezza, la quantità e il comportamento del principio attivo del medicinale e del prodotto finito. Ciò che contraddistingue questa disciplina dalle altre è il fatto che i metodi sono in gran parte definiti nelle FARMACOPEE: la Farmacopea Europea (Ph. Eur.) e la Farmacopea degli Stati Uniti (USP) forniscono sia il metodo che il quadro di riferimento per l'accettazione.
Il carattere vincolante del metodo della farmacopea determina le modalità operative del settore. Mentre in altri settori il laboratorio può scegliere un metodo adeguato, in questo caso è fondamentale attenersi al metodo indicato nella monografia; se si intende utilizzare un metodo alternativo, è necessario dimostrarne l'equivalenza. Ciò garantisce che i risultati siano comparabili a livello mondiale.
Le analisi vengono condotte in diversi gruppi. L'identificazione e la determinazione quantitativa (HPLC, UV, titolazione) indicano la natura del prodotto e la quantità di principio attivo in esso contenuta. Il profilo di impurità e i residui di solventi individuano i composti indesiderati derivanti dal processo di produzione. Le impurità elementari riguardano i metalli provenienti dai catalizzatori e dalle attrezzature. Il comportamento di dissoluzione e dispersione costituisce il principale indicatore in vitro relativo al comportamento di rilascio del farmaco nell'organismo.
L'ESPERIMENTO DI DISCIOLUZIONE è una delle misurazioni più critiche in questo campo. Non è sufficiente che una compressa contenga la giusta quantità di principio attivo; tale sostanza deve disciogliersi alla velocità adeguata. Il profilo di dissoluzione viene utilizzato per valutare l'effetto delle modifiche alla formulazione sulla biodisponibilità e riveste un ruolo centrale nell'autorizzazione all'immissione in commercio dei farmaci generici.
La CONVALIDA DEL METODO è una fase obbligatoria in questa famiglia. Se si utilizza un metodo della Farmacopea, si verifica che il metodo funzioni correttamente nelle condizioni specifiche di quel laboratorio. Se è stato sviluppato un metodo proprio, questo viene convalidato in base a parametri quali linearità, precisione, accuratezza, selettività, limiti di rilevabilità e di determinazione, nonché robustezza. I risultati ottenuti con un metodo non convalidato non possono essere utilizzati nel fascicolo di autorizzazione.
I test di stabilità determinano la durata di conservazione e rappresentano l'attività più lunga in questo settore. Il prodotto viene lasciato a riposo in condizioni di temperatura e umidità specificate, viene analizzato a intervalli regolari e i risultati costituiscono la base per la dichiarazione relativa alla durata di conservazione e alle condizioni di conservazione. Le condizioni accelerate forniscono informazioni preliminari, ma i dati in tempo reale sono fondamentali.
L'aspetto microbiologico costituisce un ambito a sé stante: conteggio della carica microbica, ricerca di microrganismi specifici, prova di sterilità sui prodotti sterili e prova delle endotossine batteriche. Per i prodotti sterili entrano in gioco anche la verifica dell'integrità della confezione e la convalida della sterilizzazione.
L'integrità dei dati si è spostata al centro delle ispezioni negli ultimi anni. Non basta che il risultato sia corretto; i dati grezzi devono essere tracciabili, inalterabili e verificabili. La convalida dei sistemi di registrazione elettronica è quindi diventata una parte inseparabile dell'analisi.
Gruppi di metodi in questo ambito
Identità e dosaggio
HPLC, UPLC, spettrofotometria UV-Vis, titolazione, conferma dell'identità mediante FTIR.
Impurezze e residui
Impurezze correlate, prodotti di degradazione, solventi residui (GC-headspace), screening delle nitrosammine.
Impurezze elementari
Determinazione delle impurezze elementari mediante ICP-MS e ICP-OES e relativa valutazione del rischio.
Fisico-chimico
Dissoluzione e disgregazione, durezza, friabilità, uniformità delle unità di dosaggio, contenuto d'acqua (Karl Fischer), dimensione delle particelle.
Microbiologico
Conta microbica, microrganismi specificati, sterilità, endotossina batterica, efficacia del conservante.
Stabilità
Studi di stabilità in tempo reale e accelerata; fotostabilità e stabilità in uso.
Confusioni frequenti in questo ambito
- Il metodo farmacopeico è vincolante; un metodo alternativo può essere usato solo dimostrandone l'equivalenza.
- Un risultato prodotto senza convalida del metodo non può essere utilizzato in un dossier di registrazione.
- La stabilità accelerata non sostituisce i dati in tempo reale; la shelf-life è supportata da risultati in tempo reale.
- Il profilo di dissoluzione è sensibile al tipo di apparecchio, alla velocità di agitazione e al mezzo; le condizioni devono essere complete nel rapporto.
- Una carenza nell'integrità dei dati produce una non conformità in un'ispezione anche se il risultato è corretto.
- Una modifica della formulazione o del fornitore richiede un confronto analitico e, se necessario, un nuovo studio di stabilità.
Quali decisioni supportano questi risultati
- Il dossier di registrazione e il rilascio dei lotti
- Determinazione della shelf-life e delle condizioni di conservazione
- Trasferimento del metodo e convalida del metodo
- Controllo di accettazione delle materie prime in ingresso dai fornitori
- Valutazione dell'effetto di una modifica della formulazione sulla bioequivalenza
Test correlati
Domande frequenti su Method Validation
È necessaria la validazione di un metodo farmacopea?
Di solito non è richiesta una validazione completa, ma la verifica lo è: deve essere dimostrato che il metodo funziona con il campione in laboratorio. USP <1226> definisce questo approccio.
Se cambiamo il metodo, la riconvalida è obbligatoria?
Dipende dalla portata del cambiamento. Per modifiche minori può essere sufficiente rivalutare i parametri interessati; un cambiamento che altera il principio di separazione richiede piena convalida.