Che cos'è E. coli?
L'analisi di E. coli risponde a due domande separate. CONTEGGIO (ISO 16649) fornisce il conteggio complessivo di E. coli come indicatore di contaminazione da feci. STEC DETECTION (ISO 13136) indaga la presenza di sierogruppi patogeni che producono la tossina Shiga mediante metodo basato sulla PCR; Questa è un'analisi della sicurezza e non deve essere confusa con un censimento.
Scopo di E. coli
Lo scopo è rilevare la contaminazione fecale e indagare la presenza di ceppi patogeni di E. coli. Poiché lo STEC può causare malattie gravi anche in piccoli numeri, viene trattato come una questione di presenza/assenza, non come un censimento.
A quali prodotti si applica E. coli?
- Prodotti a base di carne cruda e poco cotta
- Latte crudo e formaggi prodotti a latte crudo
- Frutta fresca, verdura e germogli
- Acqua potabile e domestica
- prodotti per piatti pronti
In quali settori si utilizza E. coli?
Norme relative a E. coli
- TS ISO 16649-1/-2/-3 (conta di E. coli beta-glucuronidasi positiva)
- TS EN ISO 9308-1 (E. coli e coliformi nell'acqua — filtrazione su membrana)
- TS EN ISO 13136 (rilevamento STEC — PCR in tempo reale)
- Serie TS EN ISO 6887 (preparazione del campione)
Condizioni di E. coli
- Censimento
- In terreno selettivo, alla temperatura e al tempo definiti nella norma
- STEC
- Screening dei geni stx ed eae mediante PCR dopo arricchimento
- Verifica
- Isolamento culturale in campioni positivi alla PCR
Apparecchiatura per E. coli
- Armadietto sterile e incubatori
- Sistema PCR in tempo reale
- Dispositivo di separazione immunomagnetica
- Membran filtrasyon sistemi
- Contatore di colonie
Requisiti del campione per E. coli
- Il campione deve essere inviato non aperto e nella sua confezione originale, rispettando la catena del freddo. La rappresentatività del metodo di campionamento del lotto determina la validità del risultato; Il risultato di una singola unità non è sufficiente per prendere una decisione sul partito.
- Nell'analisi STEC, la quantità del campione deve essere al livello definito nello standard.
- I campioni di acqua devono essere consegnati in un contenitore sterile ed entro un tempo definito.
- Il piano di campionamento dovrebbe essere determinato in base alla categoria del prodotto
Durata di E. coli
Il conteggio dura quanto il periodo di incubazione. Nell'analisi STEC sono presenti fasi di arricchimento e PCR; Nei campioni positivi alla PCR, la conferma colturale prolunga significativamente il tempo.
Procedura di E. coli
- 1Il campione viene preparato in modo asettico.
- 2Per il conteggio, vengono piantati in terreni selettivi e incubati.
- 3Le colonie tipiche vengono contate e verificate se necessario.
- 4Per STEC, il campione è arricchito.
- 5Vengono applicate l'estrazione del DNA e la PCR in tempo reale.
- 6In caso di risultati positivi, vengono eseguiti l'isolamento e la sierotipizzazione.
Criteri di accettazione di E. coli
Per STEC (CE) 2073/2005 definisce i criteri di sicurezza alimentare in alcune categorie di alimenti e questo è un criterio di presenza/assenza. La conta di E. coli è considerata un criterio di igiene del processo. I criteri di accettazione sono criteri microbiologici definiti in base alla categoria alimentare nel regolamento (UE) 2073/2005. Il regolamento distingue due tipologie di criteri: il criterio di sicurezza alimentare (il prodotto può essere immesso sul mercato) e il criterio di igiene del processo (il processo produttivo è sotto controllo). Quale si applica dipende dalla categoria del prodotto ed è confermato dal testo del regolamento applicabile.
Valutazione dei risultati
Una conta bassa di E. coli non significa che non sia presente STEC: i ceppi patogeni possono causare malattie in numero molto basso e potrebbero non comparire nel conteggio complessivo. Le due analisi rispondono a domande diverse e non sono intercambiabili.
Rapporto di E. coli
- Identificazione dei campioni e informazioni sul lotto
- Standard e metodo applicati
- Risultato del conteggio e incertezza della misura
- Risultati della PCR e geni bersaglio per STEC
- Informazioni sull'isolamento e sul sierotipo nei casi positivi
Accreditamento
EUROLAB detiene un accreditamento riconosciuto a livello internazionale ottenuto da organismi di accreditamento parte degli accordi di riconoscimento multilaterale IAF e ILAC, secondo ISO / IEC 17025 per prove di laboratorio, ISO / IEC 17020 per ispezione e sorveglianza e ISO / IEC 17021-1 e ISO / IEC 17065 per certificazione di sistema e prodotto. Questa catena garantisce che i rapporti e i certificati emessi siano accettati in tutto il mondo.
Se questo test può essere offerto nell'ambito accreditato dipende dal prodotto e dallo standard applicato; poiché l'accreditamento è basato sul metodo, l'ambito viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Ambito e autorizzazioniRegolamenti correlati
- Regolamento (CE) 2073/2005 sui criteri microbiologici
- (UE) 2020/2184 Direttiva sull'acqua potabile
Prove alimentari — Cosa copre questo ambito di prova?
La sezione seguente descrive l'ambito a cui appartiene la prova E. coli; le condizioni e i criteri di accettazione di questa prova specifica sono riportati nelle sezioni precedenti. L'ambito specifico del vostro prodotto viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Le prove alimentari mostrano che un prodotto è sicuro per il consumo e contiene ciò che dichiara l'etichetta. La famiglia lavora su tre assi: sicurezza microbiologica, sicurezza chimica e composizione nutrizionale. Tutti e tre richiedono un'infrastruttura di laboratorio diversa, un corpo di metodi diverso e tempi di risposta diversi.
La caratteristica più distintiva del settore è la PRESSIONE TEMPORALE. Un provino d'acciaio può aspettare su uno scaffale; un campione di latte crudo o carne fresca no. L'ora del prelievo, la temperatura di trasporto e il tempo di arrivo in laboratorio determinano direttamente la validità del risultato. Per questo, nella microbiologia alimentare, la registrazione della catena del freddo è parte inseparabile del rapporto di prova.
Sul lato microbiologico ci sono due domande distinte che non vanno confuse. Il RILEVAMENTO di un patogeno è una domanda qualitativa: la Salmonella è presente nel campione oppure no? Il CONTEGGIO di organismi indicatori è una domanda quantitativa ed è un indicatore dell'igiene di produzione. L'assenza di un patogeno in un prodotto non dimostra che l'igiene sia buona; se la carica aerobica mesofila totale è alta, c'è un problema nel processo.
Sul lato chimico si misurano residui di pesticidi, micotossine, metalli pesanti, additivi, residui di farmaci veterinari e contaminanti di processo (acrilammide, furano, IPA). I metodi multiresiduo in quest'area (LC-MS/MS e GC-MS/MS basati su QuEChERS) possono analizzare centinaia di sostanze attive in un'unica analisi; i limiti sono definiti separatamente per ogni coppia prodotto-sostanza.
Sul lato della composizione si determinano proteine, grassi, umidità, ceneri, fibre, profilo degli zuccheri, composizione degli acidi grassi e contenuto di vitamine e minerali. Questi valori sono la base della dichiarazione nutrizionale in etichetta e gli intervalli di tolleranza sono definiti dalla normativa — la differenza tra il valore dichiarato e quello misurato deve restare entro tale tolleranza.
NON esiste la marcatura CE per gli alimenti, e questo determina il funzionamento del settore. La conformità si dimostra gestendo un sistema di sicurezza alimentare basato sull'HACCP, rispettando le regole di etichettatura e non superando i limiti di contaminanti, residui e microbiologici. Un risultato di prova produce evidenza non per un certificato, ma per un sistema funzionante.
La gestione degli allergeni ha un peso particolare. La presenza di un allergene non dichiarato in un prodotto è una delle cause più frequenti di richiamo alimentare. L'analisi qui procede insieme alla convalida della pulizia: si dimostra che la linea è stata pulita adeguatamente dopo una produzione contenente un allergene e che il rischio di contaminazione crociata è sotto controllo.
Gli schemi volontari sono diventati di fatto obbligatori in questo settore. Le catene di vendita al dettaglio richiedono ai propri fornitori un certificato secondo uno schema riconosciuto dal GFSI (BRCGS, IFS, FSSC 22000); senza di esso, arrivare sullo scaffale è praticamente impossibile.
Gruppi di metodi in questo ambito
Rilevamento di patogeni
Rilevamento di Salmonella, Listeria monocytogenes, Campylobacter, Cronobacter ed E. coli produttori di tossina Shiga; metodi colturali e molecolari.
Conte di indicatori
Conta aerobica mesofila totale, Enterobacteriaceae, coliformi ed E. coli, stafilococchi coagulasi positivi, lieviti e muffe, batteri lattici, Clostridia solfito-riduttori.
Residui di pesticidi e veterinari
Screening multiresiduo mediante LC-MS/MS e GC-MS/MS con estrazione QuEChERS.
Micotossine e contaminanti
Aflatossine, ocratossina A, deossinivalenolo, patulina; metalli pesanti (ICP-MS), acrilammide e composti IPA.
Composizione nutrizionale
Proteine Kjeldahl, profilo di grassi e acidi grassi, umidità, ceneri, fibra alimentare, profilo degli zuccheri, analisi di vitamine e minerali.
Allergeni e autenticità
Analisi degli allergeni glutine, latte, uovo, frutta a guscio e soia; metodi molecolari per l'identificazione della specie e il rilevamento dell'adulterazione.
Confusioni frequenti in questo ambito
- Il campionamento è metà del risultato. Un campione trasportato a temperatura errata o in ritardo dà un risultato non valido anche se analizzato correttamente in laboratorio.
- L'assenza di un patogeno non dimostra che l'igiene sia buona; le conte di indicatori forniscono informazioni distinte e le due si leggono insieme.
- Un risultato ottenuto da un campione prelevato da un lotto può essere generalizzato all'intero lotto solo se il piano di campionamento è stato impostato statisticamente.
- I limiti sono definiti in regolamenti separati per gruppo di prodotto e vengono aggiornati regolarmente; una decisione di conformità basata su una tabella di limiti obsoleta può essere errata.
- Nelle esportazioni, i limiti del paese di destinazione possono differire da quelli UE; lo stesso prodotto può essere conforme in un mercato e non conforme in un altro.
Quali decisioni supportano questi risultati
- Verifica del piano HACCP e monitoraggio del processo
- La base della dichiarazione nutrizionale e delle informazioni sugli allergeni in etichetta
- Certificati sanitari prima dell'esportazione e conformità ai limiti del mercato di destinazione
- Controllo di accettazione per fornitore e per lotto
- Studi di shelf-life e determinazione delle condizioni di conservazione
- Produzione di evidenze per audit secondo schemi riconosciuti dal GFSI
Test correlati
Domande frequenti su E. coli
La PCR è risultata positiva, il prodotto è sicuramente contaminato?
La PCR indica la presenza del gene bersaglio; Non dimostra da solo che esistano batteri vivi. Pertanto, lo standard richiede la verifica mediante isolamento culturale dei risultati positivi. Il risultato della verifica viene preso come base per la decisione finale.