Analyse des allergènes — ELISA / PCR / LC-MS/MS et Allergènes en Cosmétique

Qu'est-ce que Allergen ?

L’analyse des allergènes couvre deux domaines distincts. La présence et la quantité des allergènes répertoriés à l'annexe II du FOOD (EU) 1169/2011 sont déterminées par ELISA, PCR en temps réel ou LC-MS/MS ; L’ELISA R5 pour le gluten est largement utilisé. EN COSMÉTIQUE, les allergènes des parfums, qui doivent être étiquetés dans le règlement (CE) 1223/2009 Annexe III, sont mesurés par GC-MS.

Objectif de Allergen

L’objectif est de vérifier l’exactitude de la déclaration sur l’étiquette et l’efficacité du contrôle de la contamination croisée. Les allergènes non déclarés sont l’une des causes les plus courantes de rappels d’aliments.

À quels produits Allergen s'applique-t-il ?

Produits déclarés sans gluten
Produits de boulangerie et collations
Produits déclarés sans produits laitiers et sans noisettes
Plats cuisinés et sauces
Produits cosmétiques parfumés

Dans quels secteurs Allergen est-il utilisé ?

AlimentationAgricultureVente au détailProduits de beauté

Normes relatives à Allergen

Série TS EN 15634 (détection des allergènes dans les aliments — hypothèses générales et méthodes PCR)
AOAC 2012.01 (Détermination du gluten par R5 ELISA)
TS EN ISO 21571 (extraction d'acide nucléique)
Série ISO/TS 20224 (détermination des espèces animales, PCR en temps réel)
Série TS EN 16274 (Détermination des substances odorantes allergènes dans les cosmétiques par GC-MS)

Conditions de Allergen

Sélection de la méthode: Protein hedefliyse ELISA/LC-MS, DNA hedefliyse PCR
Effet de traitement: Le traitement thermique peut dénaturer la protéine et réduire le résultat ELISA
Gluten: Par ELISA R5 ; Seuil défini pour la déclaration « sans gluten »
Kozmetik alerjen: Les substances répertoriées à l'Annexe III sont examinées par GC-MS

Équipement pour Allergen

Lecteur de plaques ELISA et incubateur
Système PCR en temps réel
LC-MS/MS
GC-MS (pour les allergènes cosmétiques)
Homogénéisateur et broyeur

Exigences d'échantillon pour Allergen

Échantillon représentatif homogénéisé
Des échantillons sur écouvillon peuvent également être prélevés si une contamination croisée est étudiée.
Les paramètres de traitement doivent être déclarés
La composition du parfum et la liste INCI doivent être présentées dans les cosmétiques

Durée de Allergen

Les résultats ELISA sont disponibles relativement rapidement. Les analyses PCR et LC-MS/MS prennent plusieurs jours ouvrés ; Le dépistage des allergènes cosmétiques prend un temps similaire en raison de la mesure GC-MS.

Procédure de Allergen

1L'allergène cible et la méthode appropriée sont déterminés.
2L'échantillon est homogénéisé et extrait.
3En ELISA, une mesure basée sur les anticorps est effectuée.
4En PCR, l’extraction de l’ADN et l’amplification spécifique à l’espèce sont appliquées.
5Les peptides cibles sont mesurés en LC-MS/MS.
6En cosmétique, les substances parfumées allergènes sont criblées par GC-MS.

Critères d'acceptation de Allergen

Dans les aliments (UE) 1169/2011, les allergènes de l'annexe II doivent être déclarés en surbrillance dans la liste des ingrédients. Il fixe le seuil défini par le règlement (UE) 828/2014 pour l'allégation « sans gluten ». L'Annexe III du Règlement Cosmétiques (CE) 1223/2009 exige que les allergènes de parfum répertoriés soient indiqués séparément sur l'étiquette s'ils sont présents au-delà de certaines concentrations.

Évaluation des résultats

Un résultat négatif est limité à la limite de détection de la méthode et ne garantit pas « sans allergène ». De plus, le traitement peut modifier la protéine cible, diminuant ainsi le résultat ELISA ; Dans ce cas, la PCR ou la LC-MS/MS sont plus fiables. La gestion de la contamination croisée est obtenue par la séparation de la production et la vérification du nettoyage, et non par l'analyse.

Rapport de Allergen

Exemple de description et liste d’allergènes cibles
La méthode appliquée et sa justification
Résultat et limite de détection pour chaque allergène
Informations sur les paramètres de traitement
Comparaison des seuils ou des déclarations législatives

Accréditation

EUROLAB détient une accréditation internationalement reconnue obtenue auprès des organismes d'accréditation parties aux accords de reconnaissance multilatérale de l'IAF et de l'ILAC, selon ISO/IEC 17025 pour les tests en laboratoire, ISO/IEC 17020 pour l'inspection et la surveillance, et ISO/IEC 17021-1 et ISO/IEC 17065 pour la certification des systèmes et des produits. Cette chaîne garantit que les rapports et certificats délivrés sont acceptés dans le monde entier.

La possibilité de proposer ce test dans le cadre d'une accréditation dépend de votre produit et de la norme appliquée ; l'accréditation étant méthodologique, le périmètre est confirmé par écrit au stade du devis.

Portée et autorisations

Règlements connexes

Règlement (UE) 1169/2011 relatif à l'information des consommateurs sur les denrées alimentaires, Annexe II
Déclaration sans gluten Règlement (UE) 828/2014
(CE) 1223/2009 Règlement Produits Cosmétiques Annexe III

Essais alimentaires — Que couvre ce domaine d'essai ?

La section ci-dessous décrit le domaine auquel appartient l'essai Allergen ; les conditions et critères d'acceptation de cet essai figurent dans les sections ci-dessus. Le périmètre propre à votre produit est confirmé par écrit au stade du devis.

Les essais alimentaires montrent qu'un produit est sûr à la consommation et contient ce qu'indique son étiquette. La famille travaille selon trois axes : la sécurité microbiologique, la sécurité chimique et la composition nutritionnelle. Les trois nécessitent une infrastructure de laboratoire différente, un corpus de méthodes différent et un délai différent.

La caractéristique la plus marquante du domaine est la PRESSION TEMPORELLE. Un échantillon d'acier peut attendre sur une étagère ; un échantillon de lait cru ou de viande fraîche ne le peut pas. L'heure de prélèvement, la température de transport et le délai d'arrivée au laboratoire déterminent directement la validité du résultat. C'est pourquoi, en microbiologie alimentaire, l'enregistrement de la chaîne du froid fait partie intégrante du rapport d'essai.

Du côté microbiologique, il existe deux questions différentes qui ne doivent pas être confondues. La DÉTECTION d'un pathogène est une question qualitative : la Salmonella est-elle présente dans l'échantillon ou non ? Le DÉNOMBREMENT des organismes indicateurs est une question quantitative et un indicateur de l'hygiène de production. L'absence d'un pathogène dans un produit ne montre pas que l'hygiène est bonne ; si le nombre total de mésophiles aérobies est élevé, il y a un problème dans le procédé.

Du côté chimique, on mesure les résidus de pesticides, les mycotoxines, les métaux lourds, les additifs, les résidus de médicaments vétérinaires et les contaminants de procédé (acrylamide, furane, HAP). Les méthodes multirésidus dans ce domaine (LC-MS/MS et GC-MS/MS basées sur QuEChERS) peuvent cribler des centaines de substances actives en une seule analyse ; les limites sont définies séparément pour chaque couple produit-substance.

Du côté de la composition, on détermine les protéines, les lipides, l'humidité, les cendres, les fibres, le profil en sucres, la composition en acides gras et la teneur en vitamines et minéraux. Ces valeurs fondent la déclaration nutritionnelle de l'étiquette et les plages de tolérance sont fixées par la réglementation — l'écart entre la valeur déclarée et la valeur mesurée doit rester dans cette tolérance.

Il N'Y A PAS de marquage CE pour les denrées alimentaires, ce qui façonne le fonctionnement du domaine. La conformité est démontrée par l'exploitation d'un système de sécurité alimentaire fondé sur l'HACCP, le respect des règles d'étiquetage et le non-dépassement des limites de contaminants, de résidus et microbiologiques. Un résultat d'essai produit une preuve non pas pour un certificat, mais pour un système en fonctionnement.

La gestion des allergènes revêt une importance particulière. La présence d'un allergène non déclaré dans un produit est l'une des causes les plus fréquentes de rappel de produits alimentaires. L'analyse va ici de pair avec la validation du nettoyage : on démontre que la ligne a été correctement nettoyée après une production contenant un allergène et que le risque de contamination croisée est maîtrisé.

Les référentiels volontaires sont devenus de fait obligatoires dans ce domaine. Les chaînes de distribution exigent de leurs fournisseurs un certificat selon un référentiel reconnu par la GFSI (BRCGS, IFS, FSSC 22000) ; sans lui, l'accès au rayon est pratiquement impossible.

Groupes de méthodes dans ce domaine

Détection de pathogènes
Détection de Salmonella, Listeria monocytogenes, Campylobacter, Cronobacter et E. coli producteurs de shigatoxines ; méthodes basées sur la culture et méthodes moléculaires.
Dénombrements d'indicateurs
Numération aérobie mésophile totale, Enterobacteriaceae, coliformes et E. coli, staphylocoques à coagulase positive, levures et moisissures, bactéries lactiques, Clostridia sulfito-réducteurs.
Résidus de pesticides et vétérinaires
Criblage multirésidus par LC-MS/MS et GC-MS/MS avec extraction QuEChERS.
Mycotoxines et contaminants
Aflatoxines, ochratoxine A, déoxynivalénol, patuline ; métaux lourds (ICP-MS), acrylamide et composés HAP.
Composition nutritionnelle
Protéines Kjeldahl, profil en lipides et acides gras, humidité, cendres, fibres alimentaires, profil en sucres, analyses de vitamines et minéraux.
Allergènes et authenticité
Analyses des allergènes gluten, lait, œuf, fruits à coque et soja ; méthodes moléculaires d'identification des espèces et de détection de falsification.

Confusions fréquentes dans ce domaine

L'échantillonnage représente la moitié du résultat. Un échantillon transporté à une mauvaise température ou retardé donne un résultat invalide même s'il est correctement analysé au laboratoire.
L'absence d'un pathogène ne montre pas que l'hygiène est bonne ; les dénombrements d'indicateurs apportent une information distincte et les deux sont lus ensemble.
Un résultat obtenu à partir d'un échantillon prélevé sur un lot ne peut être généralisé à l'ensemble du lot que si le plan d'échantillonnage a été établi de manière statistique.
Les limites sont définies dans des règlements distincts par groupe de produits et sont mises à jour régulièrement ; une décision de conformité fondée sur un tableau de limites obsolète peut être erronée.
À l'exportation, les limites du pays de destination peuvent différer des limites de l'UE ; le même produit peut être conforme sur un marché et non conforme sur un autre.

Quelles décisions ces résultats étayent

Vérification du plan HACCP et surveillance du procédé
La base de la déclaration nutritionnelle et des informations sur les allergènes sur l'étiquette
Certificats sanitaires avant exportation et conformité aux limites du marché de destination
Contrôle d'acceptation par fournisseur et par lot
Études de durée de conservation et détermination des conditions de stockage
Production de preuves pour les audits selon des référentiels reconnus par la GFSI

Tests associés

Questions fréquentes sur Allergen

Ne devrions-nous pas avoir une analyse au lieu d'un avertissement « peut contenir » ?

L’analyse contribue à démontrer que le risque de contamination croisée est géré, mais elle ne suffit pas à elle seule. La déclaration d'avertissement doit être basée sur une véritable évaluation des risques ; L’analyse soutient, et non remplace, cette évaluation.

Pourquoi l'ELISA contient-elle peu de produits traités thermiquement ?

Le traitement thermique modifie la structure de la protéine et peut perturber les régions reconnues par l'anticorps. Dans ce cas, le résultat peut être inférieur à la vérité ; Une PCR ciblée sur l’ADN ou une LC-MS/MS ciblée sur les peptides seraient plus appropriées.