E. coli | EUROLAB

Qu'est-ce que E. coli ?

L'analyse d'E. coli répond à deux questions distinctes. COUNT (ISO 16649) donne le nombre global d'E. coli comme indicateur de contamination par les matières fécales. La DÉTECTION STEC (ISO 13136) étudie la présence de sérogroupes pathogènes qui produisent la toxine Shiga par une méthode basée sur la PCR ; Il s’agit d’une analyse de sécurité et ne doit pas être confondue avec un recensement.

Objectif de E. coli

L’objectif est de détecter une contamination fécale et d’investiguer la présence de souches pathogènes d’E. coli. Étant donné que les STEC peuvent provoquer des maladies graves même en petit nombre, elles sont traitées comme une question de présence/absence et non comme un recensement.

À quels produits E. coli s'applique-t-il ?

Produits carnés crus et insuffisamment cuits
Lait cru et fromages au lait cru
Fruits frais, légumes et pousses
Eau potable et eau domestique
produits de plats cuisinés

Dans quels secteurs E. coli est-il utilisé ?

AlimentationAgricultureVente au détailEnvironnement

Normes relatives à E. coli

TS ISO 16649-1/-2/-3 (nombre d'E. coli positif à la bêta-glucuronidase)
TS EN ISO 9308-1 (E. coli et coliformes dans l'eau — filtration sur membrane)
TS EN ISO 13136 (Détection STEC — PCR en temps réel)
Série TS EN ISO 6887 (préparation des échantillons)

Conditions de E. coli

Recensement: En milieu sélectif, à la température et durée définies dans la norme
STEC: Criblage des gènes stx et eae par PCR après enrichissement
Vérification: Isolement culturel dans les échantillons positifs à la PCR

Équipement pour E. coli

Armoire stérile et incubateurs
Système PCR en temps réel
Dispositif de séparation immunomagnétique
Membran filtrasyon sistemi
Compteur de colonies

Exigences d'échantillon pour E. coli

L'échantillon doit être envoyé non ouvert et dans son emballage d'origine, en respectant la chaîne du froid. Le fait que la méthode d'échantillonnage soit représentative du lot détermine la validité du résultat ; Le résultat d’une seule unité ne suffit pas pour prendre une décision concernant le parti.
Dans l'analyse STEC, la quantité d'échantillon doit être au niveau défini dans la norme.
Les échantillons d’eau doivent être livrés dans un récipient stérile et dans un délai défini.
Le plan d'échantillonnage doit être déterminé en fonction de la catégorie de produit

Durée de E. coli

Le comptage dure aussi longtemps que la période d'incubation. Il existe des étapes d’enrichissement et de PCR dans l’analyse STEC ; Dans les échantillons PCR positifs, la confirmation culturelle prolonge considérablement le délai.

Procédure de E. coli

1L'échantillon est préparé de manière aseptique.
2Pour le comptage, ils sont plantés dans des milieux sélectifs et incubés.
3Les colonies typiques sont comptées et vérifiées si nécessaire.
4Pour STEC, l’échantillon est enrichi.
5L'extraction d'ADN et la PCR en temps réel sont appliquées.
6En cas de résultats positifs, un isolement et un sérotypage sont effectués.

Critères d'acceptation de E. coli

Car le STEC (CE) 2073/2005 définit des critères de sécurité alimentaire dans certaines catégories d'aliments et il s'agit d'un critère de présence/absence. Le nombre d’E. coli est considéré comme un critère d’hygiène des procédés. Les critères d'acceptation sont des critères microbiologiques définis par catégorie de denrées alimentaires dans le règlement (UE) 2073/2005. Le règlement distingue deux types de critères : le critère de sécurité alimentaire (le produit peut-il être mis sur le marché) et le critère d'hygiène du processus (le processus de production est-il sous contrôle). Celui qui s'applique dépend de la catégorie de produit et est confirmé par le texte de la réglementation applicable.

Évaluation des résultats

Un faible nombre d'E. coli ne signifie pas que les STEC ne sont pas présents : les souches pathogènes peuvent provoquer des maladies en très faible nombre et peuvent ne pas apparaître dans le décompte global. Les deux analyses répondent à des questions différentes et ne sont pas interchangeables.

Rapport de E. coli

Identification des échantillons et informations sur les lots
Norme et méthode appliquée
Résultat de comptage et incertitude de mesure
Résultats de la PCR et gènes cibles pour STEC
Informations sur l'isolement et le sérotype dans les cas positifs

Accréditation

EUROLAB détient une accréditation internationalement reconnue obtenue auprès des organismes d'accréditation parties aux accords de reconnaissance multilatérale de l'IAF et de l'ILAC, selon ISO/IEC 17025 pour les tests en laboratoire, ISO/IEC 17020 pour l'inspection et la surveillance, et ISO/IEC 17021-1 et ISO/IEC 17065 pour la certification des systèmes et des produits. Cette chaîne garantit que les rapports et certificats délivrés sont acceptés dans le monde entier.

La possibilité de proposer ce test dans le cadre d'une accréditation dépend de votre produit et de la norme appliquée ; l'accréditation étant méthodologique, le périmètre est confirmé par écrit au stade du devis.

Portée et autorisations

Règlements connexes

(CE) 2073/2005 Règlement sur les critères microbiologiques
(UE) 2020/2184 Directive sur l’eau potable

Essais alimentaires — Que couvre ce domaine d'essai ?

La section ci-dessous décrit le domaine auquel appartient l'essai E. coli ; les conditions et critères d'acceptation de cet essai figurent dans les sections ci-dessus. Le périmètre propre à votre produit est confirmé par écrit au stade du devis.

Les essais alimentaires montrent qu'un produit est sûr à la consommation et contient ce qu'indique son étiquette. La famille travaille selon trois axes : la sécurité microbiologique, la sécurité chimique et la composition nutritionnelle. Les trois nécessitent une infrastructure de laboratoire différente, un corpus de méthodes différent et un délai différent.

La caractéristique la plus marquante du domaine est la PRESSION TEMPORELLE. Un échantillon d'acier peut attendre sur une étagère ; un échantillon de lait cru ou de viande fraîche ne le peut pas. L'heure de prélèvement, la température de transport et le délai d'arrivée au laboratoire déterminent directement la validité du résultat. C'est pourquoi, en microbiologie alimentaire, l'enregistrement de la chaîne du froid fait partie intégrante du rapport d'essai.

Du côté microbiologique, il existe deux questions différentes qui ne doivent pas être confondues. La DÉTECTION d'un pathogène est une question qualitative : la Salmonella est-elle présente dans l'échantillon ou non ? Le DÉNOMBREMENT des organismes indicateurs est une question quantitative et un indicateur de l'hygiène de production. L'absence d'un pathogène dans un produit ne montre pas que l'hygiène est bonne ; si le nombre total de mésophiles aérobies est élevé, il y a un problème dans le procédé.

Du côté chimique, on mesure les résidus de pesticides, les mycotoxines, les métaux lourds, les additifs, les résidus de médicaments vétérinaires et les contaminants de procédé (acrylamide, furane, HAP). Les méthodes multirésidus dans ce domaine (LC-MS/MS et GC-MS/MS basées sur QuEChERS) peuvent cribler des centaines de substances actives en une seule analyse ; les limites sont définies séparément pour chaque couple produit-substance.

Du côté de la composition, on détermine les protéines, les lipides, l'humidité, les cendres, les fibres, le profil en sucres, la composition en acides gras et la teneur en vitamines et minéraux. Ces valeurs fondent la déclaration nutritionnelle de l'étiquette et les plages de tolérance sont fixées par la réglementation — l'écart entre la valeur déclarée et la valeur mesurée doit rester dans cette tolérance.

Il N'Y A PAS de marquage CE pour les denrées alimentaires, ce qui façonne le fonctionnement du domaine. La conformité est démontrée par l'exploitation d'un système de sécurité alimentaire fondé sur l'HACCP, le respect des règles d'étiquetage et le non-dépassement des limites de contaminants, de résidus et microbiologiques. Un résultat d'essai produit une preuve non pas pour un certificat, mais pour un système en fonctionnement.

La gestion des allergènes revêt une importance particulière. La présence d'un allergène non déclaré dans un produit est l'une des causes les plus fréquentes de rappel de produits alimentaires. L'analyse va ici de pair avec la validation du nettoyage : on démontre que la ligne a été correctement nettoyée après une production contenant un allergène et que le risque de contamination croisée est maîtrisé.

Les référentiels volontaires sont devenus de fait obligatoires dans ce domaine. Les chaînes de distribution exigent de leurs fournisseurs un certificat selon un référentiel reconnu par la GFSI (BRCGS, IFS, FSSC 22000) ; sans lui, l'accès au rayon est pratiquement impossible.

Groupes de méthodes dans ce domaine

Détection de pathogènes
Détection de Salmonella, Listeria monocytogenes, Campylobacter, Cronobacter et E. coli producteurs de shigatoxines ; méthodes basées sur la culture et méthodes moléculaires.
Dénombrements d'indicateurs
Numération aérobie mésophile totale, Enterobacteriaceae, coliformes et E. coli, staphylocoques à coagulase positive, levures et moisissures, bactéries lactiques, Clostridia sulfito-réducteurs.
Résidus de pesticides et vétérinaires
Criblage multirésidus par LC-MS/MS et GC-MS/MS avec extraction QuEChERS.
Mycotoxines et contaminants
Aflatoxines, ochratoxine A, déoxynivalénol, patuline ; métaux lourds (ICP-MS), acrylamide et composés HAP.
Composition nutritionnelle
Protéines Kjeldahl, profil en lipides et acides gras, humidité, cendres, fibres alimentaires, profil en sucres, analyses de vitamines et minéraux.
Allergènes et authenticité
Analyses des allergènes gluten, lait, œuf, fruits à coque et soja ; méthodes moléculaires d'identification des espèces et de détection de falsification.

Confusions fréquentes dans ce domaine

L'échantillonnage représente la moitié du résultat. Un échantillon transporté à une mauvaise température ou retardé donne un résultat invalide même s'il est correctement analysé au laboratoire.
L'absence d'un pathogène ne montre pas que l'hygiène est bonne ; les dénombrements d'indicateurs apportent une information distincte et les deux sont lus ensemble.
Un résultat obtenu à partir d'un échantillon prélevé sur un lot ne peut être généralisé à l'ensemble du lot que si le plan d'échantillonnage a été établi de manière statistique.
Les limites sont définies dans des règlements distincts par groupe de produits et sont mises à jour régulièrement ; une décision de conformité fondée sur un tableau de limites obsolète peut être erronée.
À l'exportation, les limites du pays de destination peuvent différer des limites de l'UE ; le même produit peut être conforme sur un marché et non conforme sur un autre.

Quelles décisions ces résultats étayent

Vérification du plan HACCP et surveillance du procédé
La base de la déclaration nutritionnelle et des informations sur les allergènes sur l'étiquette
Certificats sanitaires avant exportation et conformité aux limites du marché de destination
Contrôle d'acceptation par fournisseur et par lot
Études de durée de conservation et détermination des conditions de stockage
Production de preuves pour les audits selon des référentiels reconnus par la GFSI

Tests associés

Questions fréquentes sur E. coli

La PCR est revenue positive, le produit est-il définitivement contaminé ?

La PCR indique la présence du gène cible ; Cela ne prouve pas à lui seul qu’il existe des bactéries vivantes. Par conséquent, la norme exige une vérification par isolement culturel des résultats positifs. Le résultat de la vérification sert de base à la décision finale.