Endotoxin چیست؟
آزمایش اندوتوکسین مقدار لیپوپلی ساکارید (اندوتوکسین) منشاء گرفته از دیواره سلولی باکتری های گرم منفی را اندازه گیری می کند. اندوتوکسین در برابر حرارت مقاوم است: عقیم سازی باکتری را می کشد اما اندوتوکسین را از بین نمی برد. بنابراین یک محصول استریل همچنان می تواند تب زا باشد و باید جداگانه آزمایش شود.
هدف Endotoxin
هدف این است که نشان دهیم سطح اندوتوکسین در دستگاه‌هایی که از طریق جریان خون، مایع مغزی نخاعی یا کاشت با بدن تماس دارند، کمتر از حد مجاز است.
Endotoxin بر چه محصولاتی اعمال می‌شود؟
- کاتترها و ست های انفوزیون داخل وریدی
- ایمپلنت ها
- ست های دیالیز
- ابزار و مجموعه های جراحی
- دستگاه های در تماس با مایع مغزی نخاعی
Endotoxin در چه صنایعی کاربرد دارد؟
استانداردهای مرتبط با Endotoxin
- EP 2.6.14
- USP <85>
- ANSI/AAMI ST72
- ISO 11737-3
شرایط Endotoxin
- روش
- روش های ژل لخته، کدورت سنجی یا LAL کروموژنیک
- استخراج
- سطوح تماس این محصول با بدن با آب عاری از اندوتوکسین استخراج می شود
- کنترل تداخل
- باید تأیید شود که محصول آزمایش را مهار یا تقویت نمی کند
تجهیزات Endotoxin
- کیت ها و معرف های تست LAL
- ظروف شیشه ای بدون اندوتوکسین
- میکروپلیت خوان (برای روش های جنبشی)
- اجاق با حرارت خشک (برای دفع هوا)
- دستگاه جوجه کشی با کنترل دما
الزامات نمونه برای Endotoxin
- محصول نهایی و استریل شده
- سطح تماس با بدن باید مشخص باشد
- تعداد نمونه ها با توجه به فارمکوپه و اطلاعات دسته ای تعیین می شود
- نمونه باید در ظروف عاری از اندوتوکسین تهیه و حمل شود
مدت Endotoxin
آزمایش اولیه، از جمله مطالعه تداخل (مهار/افزایش)، چند روز طول می کشد. تست های معمول کوتاه تر هستند.
روش اجرای Endotoxin
- 1حد اندوتوکسین برای محصول محاسبه می شود.
- 2یک مطالعه تداخل انجام می شود یا به یک مطالعه موجود اشاره می شود.
- 3این محصول با آب عاری از اندوتوکسین استخراج می شود.
- 4عصاره با معرف LAL مخلوط می شود.
- 5در دمای تعریف شده انکوبه می شود.
- 6تشکیل لخته، کدورت یا توسعه رنگ بسته به روش اندازه گیری می شود.
- 7مقدار اندوتوکسین از منحنی استاندارد محاسبه می شود.
معیارهای پذیرش Endotoxin
معیار پذیرش حد اندوتوکسین محاسبه شده برای محصول است. این حد با استفاده از فرمول تعریف شده در فارماکوپه، بر اساس مسیر تماس دستگاه و وزن بیمار محاسبه می شود. این محدودیت برای دستگاه هایی که با مایع مغزی نخاعی در تماس هستند به طور قابل توجهی کمتر است.
ارزیابی نتایج
نتیجه با حد محاسبه شده مقایسه می شود. اگر مطالعه تداخل معتبر نباشد، نتیجه قابل تفسیر نیست. در جایی که محصول واکنش LAL را سرکوب می کند، ضریب رقت باید تعیین شود.
گزارش Endotoxin
- فارماکوپه و روش کاربردی
- شرح نمونه، دسته و مساحت سطح
- حد اندوتوکسین محاسبه شده
- نتیجه مطالعه تداخل و فاکتور رقت
- مقدار اندوتوکسین اندازه گیری شده (EU/دستگاه یا EU/mL)
- مقایسه با حد
اعتباربخشی
EUROLAB دارای اعتبار شناخته شده بین المللی است که از نهادهای اعتباربخشی طرف قراردادهای شناسایی چندجانبه IAF و ILAC، تحت ISO/IEC 17025 برای تست های آزمایشگاهی، ISO/IEC 17020 برای بازرسی و نظارت، و ISO/IEC 17021-1 و سیستم گواهی محصول ISO/IEC. این زنجیره تضمین می کند که گزارش ها و گواهی های صادر شده در سراسر جهان پذیرفته می شوند.
اینکه آیا این آزمون می تواند در محدوده معتبر ارائه شود به محصول شما و استاندارد اعمال شده بستگی دارد. از آنجایی که اعتبارسنجی مبتنی بر روش است، دامنه به صورت کتبی در مرحله نقل قول تأیید می شود.
محدوده و مجوزهامقررات مرتبط
- MDR (EU) 2017/745
- الزامات فارماکوپه
آنالیز دارویی — این حوزه آزمون چه چیزی را پوشش می‌دهد؟
بخش زیر حوزه‌ای را توصیف می‌کند که آزمون Endotoxin به آن تعلق دارد؛ شرایط و معیارهای پذیرش این آزمون خاص در بخش‌های بالا آمده است. دامنه ویژه محصول شما در مرحله پیشنهاد قیمت به‌صورت مکتوب مشخص می‌شود.
تحلیل دارویی هویت، خلوص، مقدار و رفتار ماده مؤثره دارو و محصول نهایی را تعیین می‌کند. آنچه این حوزه را از سایرین متمایز می‌کند این است که روش‌ها عمدتاً در داروخانه‌ها تعریف شده‌اند: هم فارماکوپه اروپا (Ph. Eur.) و هم فارماکوپه ایالات متحده (USP) هم روش و هم چارچوب پذیرش را ارائه می‌دهند.
ماهیت الزام‌آور روش فارماکوپه شیوه کار این حوزه را تعیین می‌کند. در حالی که در بخش‌های دیگر آزمایشگاه می‌تواند روش مناسبی را انتخاب کند، در اینجا روش ذکرشده در مونوگراف ملاک است؛ اگر قرار باشد روش جایگزینی استفاده شود، باید معادل‌بودن آن اثبات شود. این امر تضمین می‌کند که نتایج در سراسر جهان قابل مقایسه باشند.
تحلیل‌ها در چند گروه انجام می‌شود. شناسایی و تعیین مقدار (HPLC، UV، تیتراسیون) نشان می‌دهد محصول چیست و چه مقدار ماده مؤثره دارد. پروفایل ناخالصی و حلال‌های باقیمانده ترکیبات ناخواسته حاصل از فرآیند تولید را بررسی می‌کند. ناخالصی‌های عنصری به فلزات ناشی از کاتالیزورها و تجهیزات می‌پردازد. رفتار انحلال و پراکندگی مهم‌ترین شاخص برون‌تنی مرتبط با رفتار رهاسازی دارو در بدن است.
آزمون انحلال یکی از حیاتی‌ترین اندازه‌گیری‌های این حوزه است. کافی نیست یک قرص مقدار صحیح ماده مؤثره را داشته باشد؛ آن ماده باید با سرعت مناسب نیز حل شود. پروفایل انحلال برای ارزیابی تأثیر تغییرات فرمولاسیون بر زیست‌فراهمی استفاده می‌شود و در مجوز داروهای ژنریک جایگاه محوری دارد.
اعتبارسنجی روش گامی الزامی در این خانواده است. اگر از روش فارماکوپه استفاده شود، تأیید می‌شود که روش تحت شرایط آن آزمایشگاه به‌درستی کار می‌کند. اگر روش اختصاصی توسعه یافته باشد، با پارامترهایی مانند خطی‌بودن، دقت، صحت، گزینش‌پذیری، حد تشخیص و تعیین، و استحکام اعتبارسنجی می‌شود. نتایج حاصل از روشی که اعتبارسنجی نشده نمی‌تواند در پرونده مجوز استفاده شود.
مطالعات پایداری عمر قفسه را تعیین می‌کنند و طولانی‌ترین فرآیند این حوزه‌اند. محصول تحت شرایط دما و رطوبت تعریف‌شده نگهداری می‌شود، در فواصل معین تحلیل می‌شود و نتایج مبنای ادعاهای عمر قفسه و شرایط نگهداری قرار می‌گیرند. شرایط تسریع‌شده اطلاعات مقدماتی می‌دهند اما داده‌های زمان واقعی اساسی هستند.
بخش میکروبیولوژیک بخشی مستقل است: شمارش بار میکروبی، جست‌وجوی میکروارگانیسم‌های خاص، آزمون استریلیتی برای محصولات استریل و آزمون اندوتوکسین باکتریایی. برای محصولات استریل، بررسی یکپارچگی بسته‌بندی و اعتبارسنجی استریل‌سازی نیز مطرح می‌شود.
یکپارچگی داده (data integrity) در سال‌های اخیر به مرکز بازرسی‌ها تبدیل شده است. درست بودن نتیجه کافی نیست؛ داده خام باید ردیابی‌پذیر، غیرقابل‌تغییر و قابل ممیزی باشد. بنابراین اعتبارسنجی سیستم‌های ثبت الکترونیکی به بخش جدایی‌ناپذیر تحلیل تبدیل شده است.
گروه‌های روش در این حوزه
هویت و سنجش
HPLC، UPLC، اسپکتروفتومتری UV-Vis، تیتراسیون، تأیید هویت با FTIR.
ناخالصی و باقیمانده
ناخالصی‌های مرتبط، فرآورده‌های تجزیه، حلال‌های باقیمانده (GC-headspace)، غربالگری نیتروزامین.
ناخالصی‌های عنصری
تعیین ناخالصی‌های عنصری با ICP-MS و ICP-OES و ارزیابی ریسک مرتبط.
فیزیکوشیمیایی
انحلال و تفکیک، سختی، پودرشوندگی، یکنواختی واحد دوز، محتوای آب (کارل فیشر)، اندازه ذرات.
میکروبیولوژیک
شمارش میکروبی، میکروارگانیسم‌های مشخص‌شده، استریلیتی، اندوتوکسین باکتریایی، اثربخشی نگهدارنده.
پایداری
مطالعات پایداری زمان‌واقعی و تسریع‌شده؛ نورپایداری و پایداری حین استفاده.
موارد رایج اشتباه‌گرفته‌شده در این حوزه
- روش دستور دارویی الزام‌آور است؛ روش جایگزین تنها با اثبات هم‌ارزی آن قابل استفاده است.
- نتیجه تولیدشده بدون اعتبارسنجی روش را نمی‌توان در پرونده مجوز استفاده کرد.
- پایداری تسریع‌شده جایگزین داده زمان‌واقعی نمی‌شود؛ عمر قفسه با نتایج زمان‌واقعی پشتیبانی می‌شود.
- نمایه انحلال به نوع دستگاه، سرعت همزدن و محیط حساس است؛ شرایط باید در گزارش کامل باشد.
- کاستی در یکپارچگی داده حتی اگر نتیجه درست باشد در بازرسی عدم انطباق ایجاد می‌کند.
- تغییر فرمولاسیون یا تأمین‌کننده نیازمند مقایسه تحلیلی و در صورت لزوم مطالعه پایداری جدید است.
این نتایج از کدام تصمیم پشتیبانی می‌کنند
- پرونده مجوز و ترخیص محموله
- تعیین عمر قفسه و شرایط نگهداری
- انتقال روش و اعتبارسنجی روش
- کنترل پذیرش مواد اولیه ورودی از تأمین‌کنندگان
- ارزیابی اثر تغییر فرمولاسیون بر بیواکی‌والانس
تست های مرتبط
پرسش‌های متداول درباره Endotoxin
محصول من استریل است - چرا آزمایش اندوتوکسین لازم است؟
اندوتوکسین در برابر حرارت مقاوم است. اگرچه عقیم سازی باکتری را از بین می برد، اما اندوتوکسین را که باقیمانده دیواره سلولی است، تجزیه نمی کند. بنابراین یک محصول استریل هنوز هم می تواند باعث واکنش تب زایی شود و اندوتوکسین باید جداگانه اندازه گیری شود.
حد اندوتوکسین چگونه تعیین می شود؟
با استفاده از فرمول تعریف شده در فارماکوپه، بر اساس مسیر تماس دستگاه و دوز مجاز محاسبه می شود. برای دستگاه هایی که با مایع مغزی نخاعی در تماس هستند، این حد بسیار کمتر است. محاسبه باید در گزارش نشان داده شود.