Assay چیست؟
سنجش میزان ماده فعال در محصول را اندازه گیری می کند. HPLC رایج ترین روش است. روش های تیتریمتری یا اسپکتروفتومتری نیز ممکن است در تک نگاری استفاده شود. نتیجه به صورت درصدی از محتوای اعلام شده بیان می شود.
هدف Assay
هدف بررسی این است که محصول حاوی دوز اعلام شده است. انحراف دوز خطر مستقیمی برای اثربخشی و ایمنی ایجاد می کند.
Assay بر چه محصولاتی اعمال می‌شود؟
- قرص، کپسول و دراژه
- شربت، سوسپانسیون و قطره
- محلول های تزریقی
- کرم، ژل و پماد
- مواد فعال دارویی
Assay در چه صنایعی کاربرد دارد؟
استانداردهای مرتبط با Assay
- Ph. Eur. 2.2.29 (کروماتوگرافی مایع)
- Ph. Eur. 2.2.46 (تکنیک های جداسازی کروماتوگرافی)
- USP <621> (کروماتوگرافی)
- ICH Q2(R2) (اعتبارسنجی رویه های تحلیلی)
- تک نگاری های محصول مربوطه
شرایط Assay
- مناسب بودن سیستم
- معیارهای مناسب بودن سیستم در مونوگراف باید در هر اجرا رعایت شود
- استاندارد مرجع
- فارماکوپه یا یک استاندارد کاری واجد شرایط
- آماده سازی نمونه
- استخراج و رقیق سازی در تک نگاری تعریف شده است
تجهیزات Assay
- HPLC / UPLC (با آشکارساز DAD یا UV)
- تیتراتور خودکار
- اسپکتروفتومتر UV/Vis
- تراز تحلیلی (0.00001 گرم)
- حمام اولتراسونیک و سانتریفیوژ
الزامات نمونه برای Assay
- تعداد واحدهای مشخص شده در مونوگراف (قرص، کپسول و غیره)
- شماره دسته و دوز اعلام شده باید ارائه شود
- نمونه باید در بسته بندی اصلی خود ارسال شود
- اطلاعات استاندارد مرجع باید ارائه شود
مدت Assay
سنجش کروماتوگرافی، همراه با آماده سازی نمونه و اجرای مناسب سیستم، چندین روز کاری طول می کشد.
روش اجرای Assay
- 1روش و شرایط در مونوگراف تنظیم شده است.
- 2محلول استاندارد مرجع تهیه می شود.
- 3اجرای مناسب بودن سیستم انجام می شود و معیارها تأیید می شوند.
- 4نمونه بر اساس مونوگراف تهیه شده است.
- 5اندازه گیری کروماتوگرافی یا تیتریمتری انجام می شود.
- 6محتوای ماده فعال به عنوان درصدی از مقدار اعلام شده محاسبه می شود.
معیارهای پذیرش Assay
معیار پذیرش در این صفحه ذکر نشده است: برای هر ماده فعال و هر محصول، حد مجاز از تک نگاری داروسازی مربوطه یا مشخصات تأیید شده در پرونده مجوز بازاریابی است. فصل کلی فارماکوپه روش را تعریف می کند. مونوگراف حد را تعیین می کند.
ارزیابی نتایج
نتیجه به دست آمده بدون رعایت معیارهای مناسب بودن سیستم معتبر نیست. این معیارها ثابت می کند که روش در آن روز به درستی کار کرده است. نتیجه سنجش به تنهایی نیز کافی نیست: یکنواختی محتوا و آزمایش انحلال نشان می دهد که هر واحد از محصول دوز صحیح را ارائه می دهد.
گزارش Assay
- شناسایی نمونه، دسته و دوز اعلام شده
- مونوگراف و شرایط روش اعمال شده
- نتایج تناسب سیستم
- نتیجه سنجش (% از اعلام شده)
- کروماتوگرام و محاسبات
اعتباربخشی
EUROLAB دارای اعتبار شناخته شده بین المللی است که از نهادهای اعتباربخشی طرف قراردادهای شناسایی چندجانبه IAF و ILAC، تحت ISO/IEC 17025 برای تست های آزمایشگاهی، ISO/IEC 17020 برای بازرسی و نظارت، و ISO/IEC 17021-1 و سیستم گواهی محصول ISO/IEC. این زنجیره تضمین می کند که گزارش ها و گواهی های صادر شده در سراسر جهان پذیرفته می شوند.
اینکه آیا این آزمون می تواند در محدوده معتبر ارائه شود به محصول شما و استاندارد اعمال شده بستگی دارد. از آنجایی که اعتبارسنجی مبتنی بر روش است، دامنه به صورت کتبی در مرحله نقل قول تأیید می شود.
محدوده و مجوزهامقررات مرتبط
- دستورالعمل 2001/83/EC در مورد محصولات دارویی برای استفاده انسانی
- راهنمای GMP (EudraLex جلد 4)
آنالیز دارویی — این حوزه آزمون چه چیزی را پوشش می‌دهد؟
بخش زیر حوزه‌ای را توصیف می‌کند که آزمون Assay به آن تعلق دارد؛ شرایط و معیارهای پذیرش این آزمون خاص در بخش‌های بالا آمده است. دامنه ویژه محصول شما در مرحله پیشنهاد قیمت به‌صورت مکتوب مشخص می‌شود.
تحلیل دارویی هویت، خلوص، مقدار و رفتار ماده مؤثره دارو و محصول نهایی را تعیین می‌کند. آنچه این حوزه را از سایرین متمایز می‌کند این است که روش‌ها عمدتاً در داروخانه‌ها تعریف شده‌اند: هم فارماکوپه اروپا (Ph. Eur.) و هم فارماکوپه ایالات متحده (USP) هم روش و هم چارچوب پذیرش را ارائه می‌دهند.
ماهیت الزام‌آور روش فارماکوپه شیوه کار این حوزه را تعیین می‌کند. در حالی که در بخش‌های دیگر آزمایشگاه می‌تواند روش مناسبی را انتخاب کند، در اینجا روش ذکرشده در مونوگراف ملاک است؛ اگر قرار باشد روش جایگزینی استفاده شود، باید معادل‌بودن آن اثبات شود. این امر تضمین می‌کند که نتایج در سراسر جهان قابل مقایسه باشند.
تحلیل‌ها در چند گروه انجام می‌شود. شناسایی و تعیین مقدار (HPLC، UV، تیتراسیون) نشان می‌دهد محصول چیست و چه مقدار ماده مؤثره دارد. پروفایل ناخالصی و حلال‌های باقیمانده ترکیبات ناخواسته حاصل از فرآیند تولید را بررسی می‌کند. ناخالصی‌های عنصری به فلزات ناشی از کاتالیزورها و تجهیزات می‌پردازد. رفتار انحلال و پراکندگی مهم‌ترین شاخص برون‌تنی مرتبط با رفتار رهاسازی دارو در بدن است.
آزمون انحلال یکی از حیاتی‌ترین اندازه‌گیری‌های این حوزه است. کافی نیست یک قرص مقدار صحیح ماده مؤثره را داشته باشد؛ آن ماده باید با سرعت مناسب نیز حل شود. پروفایل انحلال برای ارزیابی تأثیر تغییرات فرمولاسیون بر زیست‌فراهمی استفاده می‌شود و در مجوز داروهای ژنریک جایگاه محوری دارد.
اعتبارسنجی روش گامی الزامی در این خانواده است. اگر از روش فارماکوپه استفاده شود، تأیید می‌شود که روش تحت شرایط آن آزمایشگاه به‌درستی کار می‌کند. اگر روش اختصاصی توسعه یافته باشد، با پارامترهایی مانند خطی‌بودن، دقت، صحت، گزینش‌پذیری، حد تشخیص و تعیین، و استحکام اعتبارسنجی می‌شود. نتایج حاصل از روشی که اعتبارسنجی نشده نمی‌تواند در پرونده مجوز استفاده شود.
مطالعات پایداری عمر قفسه را تعیین می‌کنند و طولانی‌ترین فرآیند این حوزه‌اند. محصول تحت شرایط دما و رطوبت تعریف‌شده نگهداری می‌شود، در فواصل معین تحلیل می‌شود و نتایج مبنای ادعاهای عمر قفسه و شرایط نگهداری قرار می‌گیرند. شرایط تسریع‌شده اطلاعات مقدماتی می‌دهند اما داده‌های زمان واقعی اساسی هستند.
بخش میکروبیولوژیک بخشی مستقل است: شمارش بار میکروبی، جست‌وجوی میکروارگانیسم‌های خاص، آزمون استریلیتی برای محصولات استریل و آزمون اندوتوکسین باکتریایی. برای محصولات استریل، بررسی یکپارچگی بسته‌بندی و اعتبارسنجی استریل‌سازی نیز مطرح می‌شود.
یکپارچگی داده (data integrity) در سال‌های اخیر به مرکز بازرسی‌ها تبدیل شده است. درست بودن نتیجه کافی نیست؛ داده خام باید ردیابی‌پذیر، غیرقابل‌تغییر و قابل ممیزی باشد. بنابراین اعتبارسنجی سیستم‌های ثبت الکترونیکی به بخش جدایی‌ناپذیر تحلیل تبدیل شده است.
گروه‌های روش در این حوزه
هویت و سنجش
HPLC، UPLC، اسپکتروفتومتری UV-Vis، تیتراسیون، تأیید هویت با FTIR.
ناخالصی و باقیمانده
ناخالصی‌های مرتبط، فرآورده‌های تجزیه، حلال‌های باقیمانده (GC-headspace)، غربالگری نیتروزامین.
ناخالصی‌های عنصری
تعیین ناخالصی‌های عنصری با ICP-MS و ICP-OES و ارزیابی ریسک مرتبط.
فیزیکوشیمیایی
انحلال و تفکیک، سختی، پودرشوندگی، یکنواختی واحد دوز، محتوای آب (کارل فیشر)، اندازه ذرات.
میکروبیولوژیک
شمارش میکروبی، میکروارگانیسم‌های مشخص‌شده، استریلیتی، اندوتوکسین باکتریایی، اثربخشی نگهدارنده.
پایداری
مطالعات پایداری زمان‌واقعی و تسریع‌شده؛ نورپایداری و پایداری حین استفاده.
موارد رایج اشتباه‌گرفته‌شده در این حوزه
- روش دستور دارویی الزام‌آور است؛ روش جایگزین تنها با اثبات هم‌ارزی آن قابل استفاده است.
- نتیجه تولیدشده بدون اعتبارسنجی روش را نمی‌توان در پرونده مجوز استفاده کرد.
- پایداری تسریع‌شده جایگزین داده زمان‌واقعی نمی‌شود؛ عمر قفسه با نتایج زمان‌واقعی پشتیبانی می‌شود.
- نمایه انحلال به نوع دستگاه، سرعت همزدن و محیط حساس است؛ شرایط باید در گزارش کامل باشد.
- کاستی در یکپارچگی داده حتی اگر نتیجه درست باشد در بازرسی عدم انطباق ایجاد می‌کند.
- تغییر فرمولاسیون یا تأمین‌کننده نیازمند مقایسه تحلیلی و در صورت لزوم مطالعه پایداری جدید است.
این نتایج از کدام تصمیم پشتیبانی می‌کنند
- پرونده مجوز و ترخیص محموله
- تعیین عمر قفسه و شرایط نگهداری
- انتقال روش و اعتبارسنجی روش
- کنترل پذیرش مواد اولیه ورودی از تأمین‌کنندگان
- ارزیابی اثر تغییر فرمولاسیون بر بیواکی‌والانس
تست های مرتبط
پرسش‌های متداول درباره Assay
نتیجه سنجش تصویب شد - آیا محصول مطابقت دارد؟
نه به تنهایی. سنجش محتوای متوسط را نشان می دهد. یکنواختی محتوا به طور جداگانه برای توزیع واحد به واحد و آزمایش انحلال برای پیش‌بینی فراهمی زیستی مورد نیاز است.