Microbial Limits چیست؟
تست های حد میکروبی کیفیت میکروبیولوژیکی محصولاتی را که نیازی به استریل بودن ندارند، ارزیابی می کند. آنها از دو بخش تشکیل شده‌اند: تعداد کل میکروبی هوازی همراه با تعداد کل مخمر و کپک (Ph. Eur. 2.6.12)، و آزمایش برای میکروارگانیسم‌های مشخص که بر اساس دسته محصول تعیین می‌شود (Ph. Eur. 2.6.13).
هدف Microbial Limits
هدف این است که نشان دهیم محصول دارای معیارهای کیفیت میکروبیولوژیکی است و عاری از عوامل بیماری زا مشخص شده است. معیارها بسته به مسیر مصرف محصول متفاوت است.
Microbial Limits بر چه محصولاتی اعمال می‌شود؟
- به شکل جامد و مایع خوراکی
- کرم ها، ژل ها و پمادهای موضعی
- محصولات استنشاقی
- فرآورده های دارویی گیاهی
- مواد کمکی
Microbial Limits در چه صنایعی کاربرد دارد؟
استانداردهای مرتبط با Microbial Limits
- Ph. Eur. 2.6.12 (تست های شمارش میکروبی)
- Ph. Eur. 2.6.13 (آزمایش برای میکروارگانیسم های مشخص)
- Ph. Eur. 5.1.4 (کیفیت میکروبیولوژیکی محصولات غیر استریل)
- USP <61>، <62> و <1111>
شرایط Microbial Limits
- مناسب بودن روش
- باید بررسی شود که اثر ضد میکروبی محصول خنثی شده است
- جوجه کشی
- محیط، دما و مدت زمان تعریف شده در فارماکوپه
- میکروارگانیسم های مشخص شده
- لیستی که باید برای آزمایش بر اساس مسیر تجویز متفاوت باشد
تجهیزات Microbial Limits
- کابینت و دستگاه جوجه کشی استریل
- راه اندازی فیلتراسیون غشایی
- اتوکلاو و سیستم آماده سازی رسانه
- شمارنده کلنی
الزامات نمونه برای Microbial Limits
- نمونه در بسته بندی اصلی و باز نشده
- نمونه اضافی برای مطالعه مناسب بودن روش مورد نیاز است
- مسیر مصرف محصول باید ارائه شود — تعیین می کند که برای کدام میکروارگانیسم ها آزمایش می شود
- اطلاعات فرمولاسیون و سیستم نگهدارنده باید ارائه شود
مدت Microbial Limits
شمارش و آزمایش برای میکروارگانیسم های مشخص شده به اندازه دوره های نهفتگی تعریف شده در فارمکوپه طول می کشد. اگر مطالعه مناسب بودن روش برای اولین بار انجام شود، به مدت زمان اضافه می شود.
روش اجرای Microbial Limits
- 1مناسب بودن روش تایید شده است. اثر ضد میکروبی محصول خنثی می شود.
- 2نمونه به صورت آسپتیک تهیه می شود.
- 3آبکاری برای تعداد کل میکروبی هوازی انجام می شود.
- 4آبکاری جداگانه برای شمارش مخمر و قالب انجام می شود.
- 5میکروارگانیسم های مشخص شده با توجه به مسیر مصرف آزمایش می شوند.
- 6نتایج با معیارهای فارمکوپه مقایسه می شوند.
معیارهای پذیرش Microbial Limits
Ph. Eur. 5.1.4 محدودیت های میکروبی قابل قبول و میکروارگانیسم های مشخص شده برای آزمایش را از طریق روش تجویز تعریف می کند. معیارها برای محصولات خوراکی، موضعی و استنشاقی متفاوت است. معیار پذیرش در این صفحه ذکر نشده است: برای هر ماده فعال و هر محصول، حد مجاز از تک نگاری داروسازی مربوطه یا مشخصات تأیید شده در پرونده مجوز بازاریابی است. فصل کلی فارماکوپه روش را تعریف می کند. مونوگراف حد را تعیین می کند.
ارزیابی نتایج
مطالعه مناسب بودن روش را نمی توان نادیده گرفت: اگر سیستم نگهدارنده محصول خنثی نشود، میکروارگانیسم ها نمی توانند روی محیط رشد کنند و نتیجه بهتر از آنچه هست به نظر می رسد. این رایج ترین خطا در آزمایش حد میکروبی است.
گزارش Microbial Limits
- شناسایی محصول، دسته و مسیر مصرف
- نتایج مطالعه مناسب بودن روش
- تعداد کل هوازی و تعداد مخمر/کپک
- میکروارگانیسم های مشخصی که برای آنها آزمایش شده و نتایج آنها
- معیارهای فارمکوپه در مقایسه با
اعتباربخشی
EUROLAB دارای اعتبار شناخته شده بین المللی است که از نهادهای اعتباربخشی طرف قراردادهای شناسایی چندجانبه IAF و ILAC، تحت ISO/IEC 17025 برای تست های آزمایشگاهی، ISO/IEC 17020 برای بازرسی و نظارت، و ISO/IEC 17021-1 و سیستم گواهی محصول ISO/IEC. این زنجیره تضمین می کند که گزارش ها و گواهی های صادر شده در سراسر جهان پذیرفته می شوند.
اینکه آیا این آزمون می تواند در محدوده معتبر ارائه شود به محصول شما و استاندارد اعمال شده بستگی دارد. از آنجایی که اعتبارسنجی مبتنی بر روش است، دامنه به صورت کتبی در مرحله نقل قول تأیید می شود.
محدوده و مجوزهامقررات مرتبط
- دستورالعمل 2001/83/EC در مورد محصولات دارویی برای استفاده انسانی
- راهنمای GMP (EudraLex جلد 4)
آنالیز دارویی — این حوزه آزمون چه چیزی را پوشش می‌دهد؟
بخش زیر حوزه‌ای را توصیف می‌کند که آزمون Microbial Limits به آن تعلق دارد؛ شرایط و معیارهای پذیرش این آزمون خاص در بخش‌های بالا آمده است. دامنه ویژه محصول شما در مرحله پیشنهاد قیمت به‌صورت مکتوب مشخص می‌شود.
تحلیل دارویی هویت، خلوص، مقدار و رفتار ماده مؤثره دارو و محصول نهایی را تعیین می‌کند. آنچه این حوزه را از سایرین متمایز می‌کند این است که روش‌ها عمدتاً در داروخانه‌ها تعریف شده‌اند: هم فارماکوپه اروپا (Ph. Eur.) و هم فارماکوپه ایالات متحده (USP) هم روش و هم چارچوب پذیرش را ارائه می‌دهند.
ماهیت الزام‌آور روش فارماکوپه شیوه کار این حوزه را تعیین می‌کند. در حالی که در بخش‌های دیگر آزمایشگاه می‌تواند روش مناسبی را انتخاب کند، در اینجا روش ذکرشده در مونوگراف ملاک است؛ اگر قرار باشد روش جایگزینی استفاده شود، باید معادل‌بودن آن اثبات شود. این امر تضمین می‌کند که نتایج در سراسر جهان قابل مقایسه باشند.
تحلیل‌ها در چند گروه انجام می‌شود. شناسایی و تعیین مقدار (HPLC، UV، تیتراسیون) نشان می‌دهد محصول چیست و چه مقدار ماده مؤثره دارد. پروفایل ناخالصی و حلال‌های باقیمانده ترکیبات ناخواسته حاصل از فرآیند تولید را بررسی می‌کند. ناخالصی‌های عنصری به فلزات ناشی از کاتالیزورها و تجهیزات می‌پردازد. رفتار انحلال و پراکندگی مهم‌ترین شاخص برون‌تنی مرتبط با رفتار رهاسازی دارو در بدن است.
آزمون انحلال یکی از حیاتی‌ترین اندازه‌گیری‌های این حوزه است. کافی نیست یک قرص مقدار صحیح ماده مؤثره را داشته باشد؛ آن ماده باید با سرعت مناسب نیز حل شود. پروفایل انحلال برای ارزیابی تأثیر تغییرات فرمولاسیون بر زیست‌فراهمی استفاده می‌شود و در مجوز داروهای ژنریک جایگاه محوری دارد.
اعتبارسنجی روش گامی الزامی در این خانواده است. اگر از روش فارماکوپه استفاده شود، تأیید می‌شود که روش تحت شرایط آن آزمایشگاه به‌درستی کار می‌کند. اگر روش اختصاصی توسعه یافته باشد، با پارامترهایی مانند خطی‌بودن، دقت، صحت، گزینش‌پذیری، حد تشخیص و تعیین، و استحکام اعتبارسنجی می‌شود. نتایج حاصل از روشی که اعتبارسنجی نشده نمی‌تواند در پرونده مجوز استفاده شود.
مطالعات پایداری عمر قفسه را تعیین می‌کنند و طولانی‌ترین فرآیند این حوزه‌اند. محصول تحت شرایط دما و رطوبت تعریف‌شده نگهداری می‌شود، در فواصل معین تحلیل می‌شود و نتایج مبنای ادعاهای عمر قفسه و شرایط نگهداری قرار می‌گیرند. شرایط تسریع‌شده اطلاعات مقدماتی می‌دهند اما داده‌های زمان واقعی اساسی هستند.
بخش میکروبیولوژیک بخشی مستقل است: شمارش بار میکروبی، جست‌وجوی میکروارگانیسم‌های خاص، آزمون استریلیتی برای محصولات استریل و آزمون اندوتوکسین باکتریایی. برای محصولات استریل، بررسی یکپارچگی بسته‌بندی و اعتبارسنجی استریل‌سازی نیز مطرح می‌شود.
یکپارچگی داده (data integrity) در سال‌های اخیر به مرکز بازرسی‌ها تبدیل شده است. درست بودن نتیجه کافی نیست؛ داده خام باید ردیابی‌پذیر، غیرقابل‌تغییر و قابل ممیزی باشد. بنابراین اعتبارسنجی سیستم‌های ثبت الکترونیکی به بخش جدایی‌ناپذیر تحلیل تبدیل شده است.
گروه‌های روش در این حوزه
هویت و سنجش
HPLC، UPLC، اسپکتروفتومتری UV-Vis، تیتراسیون، تأیید هویت با FTIR.
ناخالصی و باقیمانده
ناخالصی‌های مرتبط، فرآورده‌های تجزیه، حلال‌های باقیمانده (GC-headspace)، غربالگری نیتروزامین.
ناخالصی‌های عنصری
تعیین ناخالصی‌های عنصری با ICP-MS و ICP-OES و ارزیابی ریسک مرتبط.
فیزیکوشیمیایی
انحلال و تفکیک، سختی، پودرشوندگی، یکنواختی واحد دوز، محتوای آب (کارل فیشر)، اندازه ذرات.
میکروبیولوژیک
شمارش میکروبی، میکروارگانیسم‌های مشخص‌شده، استریلیتی، اندوتوکسین باکتریایی، اثربخشی نگهدارنده.
پایداری
مطالعات پایداری زمان‌واقعی و تسریع‌شده؛ نورپایداری و پایداری حین استفاده.
موارد رایج اشتباه‌گرفته‌شده در این حوزه
- روش دستور دارویی الزام‌آور است؛ روش جایگزین تنها با اثبات هم‌ارزی آن قابل استفاده است.
- نتیجه تولیدشده بدون اعتبارسنجی روش را نمی‌توان در پرونده مجوز استفاده کرد.
- پایداری تسریع‌شده جایگزین داده زمان‌واقعی نمی‌شود؛ عمر قفسه با نتایج زمان‌واقعی پشتیبانی می‌شود.
- نمایه انحلال به نوع دستگاه، سرعت همزدن و محیط حساس است؛ شرایط باید در گزارش کامل باشد.
- کاستی در یکپارچگی داده حتی اگر نتیجه درست باشد در بازرسی عدم انطباق ایجاد می‌کند.
- تغییر فرمولاسیون یا تأمین‌کننده نیازمند مقایسه تحلیلی و در صورت لزوم مطالعه پایداری جدید است.
این نتایج از کدام تصمیم پشتیبانی می‌کنند
- پرونده مجوز و ترخیص محموله
- تعیین عمر قفسه و شرایط نگهداری
- انتقال روش و اعتبارسنجی روش
- کنترل پذیرش مواد اولیه ورودی از تأمین‌کنندگان
- ارزیابی اثر تغییر فرمولاسیون بر بیواکی‌والانس
تست های مرتبط
پرسش‌های متداول درباره Microbial Limits
آیا مناسب بودن روش باید برای هر دسته تکرار شود؟
خیر، یک بار در هر محصول انجام می شود و معتبر می ماند مگر اینکه فرمول یا روش تغییر کند. با این حال، اگر فرمولاسیون، سیستم نگهدارنده یا روش تغییر کند، باید دوباره انجام شود.