Τι είναι η Endotoxin;
Το τεστ ενδοτοξίνης μετρά την ποσότητα του λιποπολυσακχαρίτη (ενδοτοξίνη) που προέρχεται από το κυτταρικό τοίχωμα των Gram-αρνητικών βακτηρίων. Η ενδοτοξίνη είναι ανθεκτική στη θερμότητα: η αποστείρωση σκοτώνει το βακτήριο αλλά δεν καταστρέφει την ενδοτοξίνη. Επομένως, ένα αποστειρωμένο προϊόν μπορεί να είναι πυρετογόνο και πρέπει να ελέγχεται χωριστά.
Σκοπός της Endotoxin
Ο σκοπός είναι να δείξει ότι το επίπεδο ενδοτοξίνης σε συσκευές που έρχονται σε επαφή με το σώμα μέσω της κυκλοφορίας του αίματος, του εγκεφαλονωτιαίου υγρού ή της εμφύτευσης είναι κάτω από το επιτρεπόμενο όριο.
Σε ποια προϊόντα εφαρμόζεται η Endotoxin;
- Ενδοφλέβιοι καθετήρες και σετ έγχυσης
- Εμφυτεύματα
- Σετ αιμοκάθαρσης
- Χειρουργικά εργαλεία και σετ
- Συσκευές σε επαφή με εγκεφαλονωτιαίο υγρό
Σε ποιους τομείς χρησιμοποιείται η Endotoxin;
Πρότυπα σχετικά με τη Endotoxin
- ΕΡ 2.6.14
- USP <85>
- ANSI/AAMI ST72
- ISO 11737-3
Συνθήκες της Endotoxin
- Μέθοδος
- Μέθοδοι τζελ-θρόμβου, θολερότητας ή χρωμογόνου LAL
- Εξαγωγή
- Οι επιφάνειες του προϊόντος που έρχονται σε επαφή με το σώμα εκχυλίζονται με νερό χωρίς ενδοτοξίνες
- Έλεγχος παρεμβολών
- Πρέπει να επαληθευτεί ότι το προϊόν δεν αναστέλλει ή δεν ενισχύει τη δοκιμή
Εξοπλισμός για τη Endotoxin
- Κιτ δοκιμών και αντιδραστήρια LAL
- Γυάλινα σκεύη χωρίς ενδοτοξίνες
- Αναγνώστης μικροπλάκας (για κινητικές μεθόδους)
- Φούρνος ξηρής θέρμανσης (για αποπυρογόνωση)
- Θερμοκοιτίδα ελεγχόμενης θερμοκρασίας
Απαιτήσεις δείγματος για τη Endotoxin
- Το τελικό, αποστειρωμένο προϊόν
- Η επιφάνεια που έρχεται σε επαφή με το σώμα πρέπει να είναι γνωστή
- Ο αριθμός των δειγμάτων καθορίζεται σύμφωνα με τη φαρμακοποιία και τις πληροφορίες παρτίδας
- Το δείγμα πρέπει να προετοιμαστεί και να μεταφερθεί σε δοχεία χωρίς ενδοτοξίνες
Διάρκεια της Endotoxin
Η αρχική δοκιμή, συμπεριλαμβανομένης της μελέτης παρεμβολής (αναστολής/ενίσχυσης), διαρκεί αρκετές ημέρες. οι συνήθεις εξετάσεις είναι πιο σύντομες.
Διαδικασία της Endotoxin
- 1Υπολογίζεται το όριο ενδοτοξίνης για το προϊόν.
- 2Εκτελείται μελέτη παρεμβολής ή γίνεται αναφορά σε υπάρχουσα μελέτη.
- 3Το προϊόν εκχυλίζεται με νερό χωρίς ενδοτοξίνες.
- 4Το εκχύλισμα αναμιγνύεται με το αντιδραστήριο LAL.
- 5Επωάζεται στην καθορισμένη θερμοκρασία.
- 6Μετράται ο σχηματισμός θρόμβου, η θολότητα ή η ανάπτυξη χρώματος, ανάλογα με τη μέθοδο.
- 7Η ποσότητα ενδοτοξίνης υπολογίζεται από την τυπική καμπύλη.
Κριτήρια αποδοχής της Endotoxin
Το κριτήριο αποδοχής είναι το όριο ενδοτοξίνης που υπολογίζεται για το προϊόν. Αυτό το όριο υπολογίζεται χρησιμοποιώντας τον τύπο που ορίζεται στη φαρμακοποιία, με βάση την οδό επαφής της συσκευής και το βάρος του ασθενούς. το όριο είναι σημαντικά χαμηλότερο για συσκευές σε επαφή με εγκεφαλονωτιαίο υγρό.
Αξιολόγηση Αποτελεσμάτων
Το αποτέλεσμα συγκρίνεται με το υπολογιζόμενο όριο. Εάν η μελέτη παρεμβολών δεν είναι έγκυρη, το αποτέλεσμα δεν μπορεί να ερμηνευτεί. όταν το προϊόν καταστέλλει την αντίδραση LAL, πρέπει να προσδιοριστεί ένας συντελεστής αραίωσης.
Έκθεση της Endotoxin
- Εφαρμοσμένη φαρμακοποιία και μέθοδος
- Περιγραφή δείγματος, παρτίδα και επιφάνεια
- Υπολογισμένο όριο ενδοτοξίνης
- Αποτέλεσμα μελέτης παρεμβολής και συντελεστής αραίωσης
- Μετρημένη τιμή ενδοτοξίνης (EU/συσκευή ή EU/mL)
- Σύγκριση με το όριο
Διαπίστευση
Η EUROLAB κατέχει διεθνώς αναγνωρισμένη διαπίστευση που λαμβάνεται από φορείς διαπίστευσης που συμμετείχαν στις συμφωνίες πολυμερούς αναγνώρισης IAF και ILAC, σύμφωνα με το ISO/IEC 17025 για εργαστηριακές δοκιμές, το ISO/IEC 17020 για την επιθεώρηση και την επιτήρηση και το ISO/IEC 17021-1 και το σύστημα πιστοποίησης προϊόντων ISO/IEC. Αυτή η αλυσίδα διασφαλίζει ότι οι εκθέσεις και τα πιστοποιητικά που εκδίδονται γίνονται αποδεκτά παγκοσμίως.
Το εάν αυτή η δοκιμή μπορεί να προσφερθεί εντός αναγνωρισμένου πεδίου εξαρτάται από το προϊόν σας και το πρότυπο που εφαρμόζεται. Δεδομένου ότι η διαπίστευση βασίζεται στη μέθοδο, το πεδίο εφαρμογής επιβεβαιώνεται γραπτώς στο στάδιο της προσφοράς.
Πεδίο εφαρμογής και εξουσιοδοτήσειςΣχετικοί Κανονισμοί
- MDR (ΕΕ) 2017/745
- Απαιτήσεις Φαρμακοποιίας
Φαρμακευτική Ανάλυση — Τι καλύπτει αυτός ο τομέας δοκιμών;
Η παρακάτω ενότητα περιγράφει τον τομέα στον οποίο ανήκει η δοκιμή Endotoxin· οι συνθήκες και τα κριτήρια αποδοχής αυτής της συγκεκριμένης δοκιμής δίνονται στις παραπάνω ενότητες. Το πεδίο εφαρμογής που αφορά το προϊόν σας επιβεβαιώνεται εγγράφως στο στάδιο της προσφοράς.
Η φαρμακευτική ανάλυση προσδιορίζει την ταυτότητα, την καθαρότητα, την ποσότητα και τη συμπεριφορά της δραστικής ουσίας του φαρμάκου και του τελικού προϊόντος. Αυτό που διακρίνει αυτόν τον τομέα από τους άλλους είναι ότι οι μέθοδοι ορίζονται σε μεγάλο βαθμό στις ΦΑΡΜΑΚΟΠΟΙΙΕΣ: τόσο η Ευρωπαϊκή Φαρμακοποιία (Ph. Eur.) όσο και η Φαρμακοποιία των Ηνωμένων Πολιτειών (USP) παρέχουν τόσο τη μέθοδο όσο και το πλαίσιο αποδοχής.
Ο δεσμευτικός χαρακτήρας της μεθόδου της φαρμακοποιίας καθορίζει τον τρόπο λειτουργίας του τομέα. Ενώ σε άλλους κλάδους το εργαστήριο μπορεί να επιλέξει κατάλληλη μέθοδο, εδώ ισχύει η μέθοδος που ορίζεται στη μονογραφία· αν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί εναλλακτική μέθοδος, πρέπει να αποδειχθεί η ισοδυναμία της. Αυτό εξασφαλίζει ότι τα αποτελέσματα είναι συγκρίσιμα παγκοσμίως.
Οι αναλύσεις διεξάγονται σε διάφορες ομάδες. Ο προσδιορισμός ταυτότητας και ποσότητας (HPLC, UV, τιτλοδότηση) δείχνει τι είναι το προϊόν και πόση δραστική ουσία περιέχει. Το προφίλ ακαθαρσιών και τα υπολείμματα διαλυτών εντοπίζουν ανεπιθύμητες ενώσεις που προέρχονται από τη διαδικασία παραγωγής. Οι στοιχειακές ακαθαρσίες αφορούν μέταλλα που προέρχονται από καταλύτες και εξοπλισμό. Η συμπεριφορά διάλυσης και διασποράς αποτελεί τον σημαντικότερο δείκτη in vitro σχετικά με τη συμπεριφορά αποδέσμευσης του φαρμάκου στον οργανισμό.
Η ΔΟΚΙΜΗ ΔΙΑΛΥΣΗΣ αποτελεί μία από τις πιο κρίσιμες μετρήσεις στον τομέα αυτό. Δεν αρκεί ένα δισκίο να περιέχει τη σωστή ποσότητα δραστικής ουσίας· η ουσία αυτή πρέπει να διαλύεται με τον κατάλληλο ρυθμό. Το προφίλ διάλυσης χρησιμοποιείται για την αξιολόγηση της επίδρασης αλλαγών στη σύνθεση επί της βιοδιαθεσιμότητας και κατέχει κεντρική θέση στην έγκριση κυκλοφορίας γενοσήμων φαρμάκων.
Η ΕΠΙΚΥΡΩΣΗ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ αποτελεί υποχρεωτικό βήμα σε αυτήν την κατηγορία. Εάν χρησιμοποιείται μέθοδος της φαρμακοποιίας, επιβεβαιώνεται ότι η μέθοδος λειτουργεί κατάλληλα υπό τις συνθήκες του συγκεκριμένου εργαστηρίου. Εάν έχει αναπτυχθεί δική της μέθοδος, επικυρώνεται με βάση παραμέτρους όπως η γραμμικότητα, η ακρίβεια, η ορθότητα, η επιλεκτικότητα, τα όρια ανίχνευσης και προσδιορισμού, καθώς και η σταθερότητα. Τα αποτελέσματα που προκύπτουν από μια μέθοδο που δεν έχει επικυρωθεί δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν στον φάκελο αδειοδότησης.
Οι δοκιμές σταθερότητας καθορίζουν τη διάρκεια ζωής του προϊόντος και αποτελούν τη μακρότερη διαδικασία στον τομέα αυτό. Το προϊόν διατηρείται υπό καθορισμένες συνθήκες θερμοκρασίας και υγρασίας, αναλύεται σε τακτά χρονικά διαστήματα και τα αποτελέσματα αποτελούν τη βάση για δηλώσεις διάρκειας ζωής και συνθηκών αποθήκευσης. Οι επιταχυνόμενες συνθήκες παρέχουν προκαταρκτικές πληροφορίες, αλλά τα δεδομένα σε πραγματικό χρόνο είναι τα βασικά.
Ο μικροβιολογικός τομέας αποτελεί ξεχωριστό κλάδο: καταμέτρηση μικροβιακού φορτίου, αναζήτηση καθορισμένων μικροοργανισμών, δοκιμή αποστείρωσης σε αποστειρωμένα προϊόντα και δοκιμή βακτηριακών ενδοτοξινών. Στα αποστειρωμένα προϊόντα περιλαμβάνονται επίσης ο έλεγχος ακεραιότητας της συσκευασίας και η επικύρωση αποστείρωσης.
Η ακεραιότητα δεδομένων έχει μετακινηθεί στο επίκεντρο των επιθεωρήσεων τα τελευταία χρόνια. Δεν αρκεί το αποτέλεσμα να είναι σωστό· τα ακατέργαστα δεδομένα πρέπει να είναι ιχνηλάσιμα, αμετάβλητα και ελέγξιμα. Η επικύρωση ηλεκτρονικών συστημάτων καταγραφής έχει επομένως γίνει αναπόσπαστο μέρος της ανάλυσης.
Ομάδες μεθόδων σε αυτόν τον τομέα
Ταυτότητα και προσδιορισμός
HPLC, UPLC, φασματοφωτομετρία UV-Vis, τιτλοδότηση, επιβεβαίωση ταυτότητας με FTIR.
Προσμείξεις και υπολείμματα
Σχετικές προσμείξεις, προϊόντα αποδόμησης, υπολειμματικοί διαλύτες (GC-headspace), έλεγχος νιτροζαμινών.
Στοιχειακές προσμείξεις
Προσδιορισμός στοιχειακών προσμείξεων με ICP-MS και ICP-OES και σχετική αξιολόγηση κινδύνου.
Φυσικοχημικό
Διάλυση και αποσάθρωση, σκληρότητα, τριπτότητα, ομοιομορφία δοσολογικών μονάδων, περιεκτικότητα νερού (Karl Fischer), μέγεθος σωματιδίων.
Μικροβιολογικό
Μικροβιακή καταμέτρηση, καθορισμένοι μικροοργανισμοί, αποστείρωση, βακτηριακή ενδοτοξίνη, αποτελεσματικότητα συντηρητικού.
Σταθερότητα
Μελέτες σταθερότητας πραγματικού χρόνου και επιταχυνόμενης· φωτοσταθερότητα και σταθερότητα κατά τη χρήση.
Συχνές συγχύσεις σε αυτόν τον τομέα
- Η φαρμακοποιική μέθοδος είναι δεσμευτική· μια εναλλακτική μέθοδος μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο αποδεικνύοντας την ισοδυναμία της.
- Ένα αποτέλεσμα που παράγεται χωρίς επικύρωση μεθόδου δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε φάκελο άδειας κυκλοφορίας.
- Η επιταχυνόμενη σταθερότητα δεν αντικαθιστά τα δεδομένα πραγματικού χρόνου· η διάρκεια ζωής υποστηρίζεται από αποτελέσματα πραγματικού χρόνου.
- Το προφίλ διάλυσης είναι ευαίσθητο στον τύπο συσκευής, τον ρυθμό ανάδευσης και το μέσο· οι συνθήκες πρέπει να είναι πλήρεις στην έκθεση.
- Μια ανεπάρκεια στην ακεραιότητα δεδομένων παράγει μη συμμόρφωση σε επιθεώρηση ακόμη κι αν το αποτέλεσμα είναι σωστό.
- Μια αλλαγή σύνθεσης ή προμηθευτή απαιτεί αναλυτική σύγκριση και, όπου χρειάζεται, νέα μελέτη σταθερότητας.
Ποιες αποφάσεις υποστηρίζουν αυτά τα αποτελέσματα
- Ο φάκελος άδειας κυκλοφορίας και η απελευθέρωση παρτίδας
- Καθορισμός διάρκειας ζωής και συνθηκών αποθήκευσης
- Μεταφορά μεθόδου και επικύρωση μεθόδου
- Έλεγχος αποδοχής εισερχόμενων πρώτων υλών από προμηθευτές
- Αξιολόγηση της επίδρασης αλλαγής σύνθεσης στη βιοϊσοδυναμία
Σχετικά τεστ
Συχνές ερωτήσεις για τη Endotoxin
Το προϊόν μου είναι αποστειρωμένο — γιατί απαιτείται εξέταση ενδοτοξίνης;
Η ενδοτοξίνη είναι ανθεκτική στη θερμότητα. αν και η αποστείρωση σκοτώνει το βακτήριο, δεν διασπά την ενδοτοξίνη, η οποία είναι ένα υπόλειμμα του κυτταρικού τοιχώματος. Επομένως, ένα στείρο προϊόν μπορεί να προκαλέσει πυρετογόνο αντίδραση και η ενδοτοξίνη πρέπει να μετρηθεί χωριστά.
Πώς προσδιορίζεται το όριο ενδοτοξίνης;
Υπολογίζεται χρησιμοποιώντας τον τύπο που ορίζεται στη φαρμακοποιία, με βάση την οδό επαφής της συσκευής και την επιτρεπόμενη δόση. Για συσκευές που έρχονται σε επαφή με εγκεφαλονωτιαίο υγρό, το όριο είναι πολύ χαμηλότερο. ο υπολογισμός πρέπει να εμφανίζεται στην έκθεση.