Qu'est-ce que LC-MS/MS — analyse ?
LC-MS/MS est un système dans lequel un spectromètre de masse triple quadripôle est couplé après chromatographie liquide. Le premier analyseur sélectionne l'ion précurseur, la cellule de collision le fragmente et le troisième analyseur surveille les ions produits. La paire précurseur-produit surveillée est appelée une transition (MRM).
Objectif de LC-MS/MS — analyse
L’objectif est de mesurer de manière fiable de très faibles concentrations dans des échantillons soumis à une interférence matricielle intense. L'analyse des traces d'échantillons de sang, de plasma, d'aliments et d'environnement est réalisée avec cette technique.
À quels produits LC-MS/MS — analyse s'applique-t-il ?
- Niveaux de médicaments et de métabolites dans les échantillons biologiques
- Résidus de mycotoxines et de médicaments vétérinaires dans les aliments
- Impuretés de nitrosamine dans les produits pharmaceutiques
- Polluants polaires dans l'eau
- Dépistage de l'adultération dans les produits complémentaires
Dans quels secteurs LC-MS/MS — analyse est-il utilisé ?
Normes relatives à LC-MS/MS — analyse
- ICH M10 (validation des méthodes bioanalytiques)
- UE 2021/808 (critères de performance pour les méthodes de résidus)
- EN 15662 (QUECHERS)
- Directives ICH M7 / EMA sur les nitrosamines
Conditions de LC-MS/MS — analyse
- Surveillance
- Au moins deux passes MRM pour chaque analyte
- Teyit
- Compatibilité du rapport ionique inter-transition avec la référence
- étalon interne
- Si possible, un analogue marqué par un isotope est utilisé
- Étalonnage
- Étalonnage adapté à la matrice si un effet de matrice est présent
Équipement pour LC-MS/MS — analyse
- Système UPLC/HPLC
- Spectromètre de masse triple quadripôle
- Source d'ions par électrospray
- SPE et unités automatisées de préparation d’échantillons
- Générateur d'azote et système de vide
Exigences d'échantillon pour LC-MS/MS — analyse
- La précipitation des protéines, l'extraction liquide-liquide ou la SPE sont nécessaires pour les échantillons biologiques
- L'homogénéisation et l'extraction de type QuEChERS sont appliquées à l'alimentation
- L'échantillon doit être envoyé sous chaîne du froid et dans des tubes adaptés
- La liste des analytes recherchés doit être définie dès le départ
Durée de LC-MS/MS — analyse
La durée d'exécution est généralement inférieure à 15 minutes ; la préparation des échantillons et la validation de la méthode déterminent la durée principale.
Procédure de LC-MS/MS — analyse
- 1L'échantillon est homogénéisé et un étalon interne ajouté.
- 2L'extraction et le nettoyage sont appliqués.
- 3L'extrait est injecté sur la colonne LC.
- 4Les transitions MRM sont surveillées pour les analytes cibles.
- 5Les rapports ioniques sont comparés à la référence.
- 6La quantité est calculée via la courbe d'étalonnage.
- 7Les résultats de récupération, de blanc et de contrôle qualité sont évalués.
Critères d'acceptation de LC-MS/MS — analyse
L'acceptabilité du résultat est évaluée par rapport aux limites de la réglementation applicable en matière de résidus, de contaminants ou d'impuretés. La méthode ne définit pas de limite.
Évaluation des résultats
Le résultat est significatif dans la plage de travail validée de la méthode. Les valeurs inférieures à la plage sont signalées comme « inférieures à la limite de quantification » plutôt que d'être forcées à une valeur numérique.
Rapport de LC-MS/MS — analyse
- Description de l'échantillon, date de réception et numéro de laboratoire
- Méthode appliquée et étalon de référence, le cas échéant
- Conditions d’instrument et de mesure
- Étapes de préparation des échantillons
- Résultats et unités de mesure
- Incertitude de mesure (si demandé)
- Une déclaration selon laquelle les résultats concernent uniquement l'échantillon soumis pour test
Accréditation
EUROLAB détient une accréditation internationalement reconnue obtenue auprès des organismes d'accréditation parties aux accords de reconnaissance multilatérale de l'IAF et de l'ILAC, selon ISO/IEC 17025 pour les tests en laboratoire, ISO/IEC 17020 pour l'inspection et la surveillance, et ISO/IEC 17021-1 et ISO/IEC 17065 pour la certification des systèmes et des produits. Cette chaîne garantit que les rapports et certificats délivrés sont acceptés dans le monde entier.
La possibilité de proposer ce test dans le cadre d'une accréditation dépend de votre produit et de la norme appliquée ; l'accréditation étant méthodologique, le périmètre est confirmé par écrit au stade du devis.
Portée et autorisationsRèglements connexes
- UE 2023/915 (contaminants dans les aliments)
- UE 37/2010 (résidus de médicaments vétérinaires)
- Évaluations des nitrosamines EMA/CHMP
Pages où cette méthode est utilisée
Méthodes d'analyse — Que fait ce groupe de méthodes ?
La section ci-dessous décrit le domaine auquel appartient l'essai LC-MS/MS — analyse ; les conditions et critères d'acceptation de cet essai figurent dans les sections ci-dessus. Le périmètre propre à votre produit est confirmé par écrit au stade du devis.
Les pages sur les méthodes analytiques sont des pages consacrées à une TECHNIQUE DE MESURE plutôt qu'à un essai. Cette différence compte : « l'essai au brouillard salin » est un essai et répond à une question ; « ICP-MS » est une technique et s'utilise dans des dizaines d'essais différents. Parfois, l'utilisateur ne recherche pas l'essai mais la technique — car c'est le nom de la méthode qui figure dans son cahier des charges.
Cette distinction devient déterminante dans le choix d'un laboratoire. Lorsqu'un client demande une « analyse des métaux lourds », la vraie question est de savoir par quelle technique elle sera réalisée : la XRF est rapide et non destructive mais ne distingue pas les composés ; l'AAS est économique pour un seul élément ; l'ICP-OES analyse plusieurs éléments ; l'ICP-MS détecte des niveaux de trace. Le même échantillon donne des résultats avec des limites de détection et des incertitudes différentes selon les quatre techniques.
Le choix de la méthode se fait selon trois critères. LIMITE DE DÉTECTION : la concentration recherchée est-elle dans la plage que la méthode peut détecter ? COMPATIBILITÉ DE MATRICE : la matrice de l'échantillon (plastique, aliment, sol, métal) est-elle une que la méthode peut traiter, et un prétraitement est-il nécessaire ? LIEN AVEC LE CAHIER DES CHARGES : la norme produit ou la législation impose-t-elle une méthode particulière ? Le troisième critère l'emporte souvent sur les deux premiers — le cahier des charges impose la méthode.
Les pages de méthodes construisent une CHAÎNE. Une technique est liée aux pages de test sur lesquelles elle est utilisée, aux normes sur lesquelles reposent ces tests, à la législation à laquelle ces normes sont liées et, en fin de compte, aux régimes d'accès au marché. La chaîne d'exemples dans le document source fonctionne comme ceci : XRF → analyse des métaux → conformité RoHS → restriction sur les métaux lourds → pages de revêtement. Quel que soit le lien à partir duquel l’utilisateur entre, il atteint les autres.
La préparation des échantillons est la moitié invisible du résultat dans cette famille et constitue une source d’erreur plus importante que la technique elle-même. La méthode de digestion, le degré de broyage, le solvant d'extraction et le taux de dilution modifient considérablement le résultat. Le même échantillon sur le même instrument donne un résultat différent avec une préparation différente ; la définition de la méthode couvre donc également la préparation.
L'étalonnage et la vérification sont le troisième élément déterminant. Un instrument est calibré avec un matériau de référence certifié, la courbe d'étalonnage est vérifiée périodiquement et un échantillon de contrôle est analysé dans chaque lot. Sans ces étapes, un numéro produit n'est pas traçable même si l'instrument fonctionne correctement.
Groupes de méthodes dans ce domaine
Analyse élémentaire
ICP-OES, ICP-MS, AAS et XRF. Ils diffèrent par la limite de détection, la tolérance matricielle et la capacité multi-éléments.
Chromatographie
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS et chromatographie ionique. Il sépare un mélange en ses composants et mesure chacun séparément.
Spectroscopie
FTIR, Raman, UV-Vis et émission optique. Pour l’identité des matériaux, l’identification des groupes fonctionnels et la composition de l’alliage.
Analyse thermique
DSC, TGA, DMA et dilatométrie. Températures de transition, composition, décomposition et comportement dimensionnel.
Microscopie et imagerie
Microscopie optique, SEM-EDS, radiographie et tomographie. Structure, défauts et distribution élémentaire.
Chimie classique (par voie humide)
Titrage, gravimétrie et colorimétrie. Utilisé comme méthode de référence et pour confirmer les résultats instrumentaux.
Confusions fréquentes dans ce domaine
- XRF est un outil de dépistage ; il voit les éléments et ne distingue pas les composés. Une décision concernant un composé restreint nécessite une confirmation par chimie humide.
- L'expression « non détecté » n'est pas une preuve d'absence ; elle se lit avec la limite de détection de la méthode.
- La spécification lie la méthode. Une méthode techniquement meilleure n’est pas acceptée si la spécification en appelle une autre.
- La préparation des échantillons fait partie du résultat ; un rapport qui ne mentionne pas la préparation n'est pas reproductible.
- Les résultats obtenus par différentes techniques ne peuvent pas être comparés directement ; leurs limites de détection et leurs incertitudes diffèrent.
- Une page de méthode n’est pas une page de test ; quelle méthode s'applique à quel test provient de la norme de produit.
Quelles décisions ces résultats étayent
- Faire correspondre la méthode du cahier des charges au périmètre du laboratoire
- Choix de la méthode selon la limite de détection et la compatibilité matricielle
- Confirmation d'un résultat instrumental par une méthode de référence
- Élimination des écarts liés à la préparation des échantillons
Tests associés
Questions fréquentes sur LC-MS/MS — analyse
Pourquoi un étalon interne marqué par un isotope est-il important ?
Parce qu’il présente le même comportement chimique que l’analyte, il suit l’effet de matrice et la perte par extraction un à un. Cela améliore considérablement la précision du résultat.
Que signifie un résultat inférieur à la limite de quantification ?
Cela ne signifie pas que l'analyte est absent, mais qu'il se situe en dessous du niveau que la méthode peut mesurer de manière fiable. Le rapport l’indique dans une déclaration distincte.