E. coli چیست؟
تجزیه و تحلیل E. coli به دو سوال جداگانه پاسخ می دهد. COUNT (ISO 16649) شمارش کلی E. coli را به عنوان شاخصی از آلودگی ناشی از مدفوع نشان می دهد. STEC DETECTION (ISO 13136) وجود سروگروپ های بیماری زا را که سم شیگا تولید می کنند با روش مبتنی بر PCR بررسی می کند. این یک تحلیل امنیتی است و نباید با سرشماری اشتباه گرفته شود.
هدف E. coli
هدف شناسایی آلودگی مدفوع و بررسی وجود سویه های بیماریزا E. coli است. از آنجایی که STEC حتی در تعداد کمی می تواند باعث بیماری جدی شود، به عنوان یک سوال حضور/غیاب تلقی می شود، نه سرشماری.
E. coli بر چه محصولاتی اعمال می‌شود؟
- فرآورده های گوشتی خام و نیم پز
- شیر خام و پنیرهای تولید شده از شیر خام
- میوه ها، سبزیجات و جوانه های تازه
- آب آشامیدنی و خانگی
- محصولات غذایی آماده
E. coli در چه صنایعی کاربرد دارد؟
استانداردهای مرتبط با E. coli
- TS ISO 16649-1/-2/-3 (تعداد بتا گلوکورونیداز مثبت E. coli)
- TS EN ISO 9308-1 (E. coli و کلیفرم در آب — فیلتراسیون غشایی)
- TS EN ISO 13136 (تشخیص STEC — Real-time PCR)
- سری TS EN ISO 6887 (تهیه نمونه)
شرایط E. coli
- سرشماری
- در محیط انتخابی، در دما و زمان تعریف شده در استاندارد
- STEC
- غربالگری ژن های stx و eae توسط PCR پس از غنی سازی
- تأیید
- جداسازی فرهنگی در نمونه های PCR مثبت
تجهیزات E. coli
- کابینت و دستگاه جوجه کشی استریل
- سیستم Real-time PCR
- دستگاه جداسازی ایمونومغناطیسی
- Membran filtrasyon sistemi
- شمارنده کلنی
الزامات نمونه برای E. coli
- نمونه باید باز نشده و در بسته بندی اصلی خود با حفظ زنجیره سرد ارسال شود. اینکه آیا روش نمونه گیری نماینده دسته است یا خیر، اعتبار نتیجه را تعیین می کند. نتیجه یک واحد برای تصمیم گیری در مورد حزب کافی نیست.
- در تجزیه و تحلیل STEC، مقدار نمونه باید در سطح تعریف شده در استاندارد باشد.
- نمونه های آب باید در ظرف استریل و در مدت زمان معین تحویل داده شوند.
- طرح نمونه برداری باید بر اساس دسته بندی محصول تعیین شود
مدت E. coli
شمارش به اندازه دوره کمون طول می کشد. مراحل غنی سازی و PCR در تجزیه و تحلیل STEC وجود دارد. در نمونه های PCR مثبت، تایید فرهنگی زمان را به طور قابل توجهی طولانی می کند.
روش اجرای E. coli
- 1نمونه به صورت آسپتیک تهیه می شود.
- 2برای شمارش، آنها را در محیط های انتخابی کاشته و جوجه کشی می کنند.
- 3کلنی های معمولی شمارش و در صورت لزوم تایید می شوند.
- 4برای STEC، نمونه غنی شده است.
- 5استخراج DNA و PCR در زمان واقعی اعمال می شود.
- 6در صورت مثبت شدن نتایج، جداسازی و سروتیپ انجام می شود.
معیارهای پذیرش E. coli
برای STEC (EC) 2073/2005 معیارهای ایمنی مواد غذایی را در دسته های غذایی خاص تعریف می کند و این یک معیار حضور/غیاب است. تعداد E. coli به عنوان یک معیار بهداشتی فرآیند در نظر گرفته می شود. معیارهای پذیرش معیارهای میکروبیولوژیکی هستند که بر اساس دسته بندی مواد غذایی در (EU) 2073/2005 تعریف شده اند. این مقررات دو نوع معیار را متمایز می کند: معیار ایمنی مواد غذایی (آیا محصول را می توان در بازار عرضه کرد) و معیار بهداشت فرآیند (فرایند تولید تحت کنترل است). اینکه کدام یک اعمال می شود بستگی به دسته بندی محصول دارد و توسط متن مقررات قابل اجرا تأیید می شود.
ارزیابی نتایج
تعداد کم E. coli به این معنی نیست که STEC وجود ندارد: سویه های بیماری زا می توانند در تعداد بسیار کم باعث بیماری شوند و ممکن است در شمارش کلی ظاهر نشوند. این دو تحلیل به سوالات مختلفی پاسخ می دهند و قابل تعویض نیستند.
گزارش E. coli
- شناسایی نمونه و اطلاعات دسته
- استاندارد و روش اعمال شده
- شمارش نتیجه و عدم قطعیت اندازه گیری
- نتایج PCR و ژن های هدف برای STEC
- اطلاعات جداسازی و سروتیپ در موارد مثبت
اعتباربخشی
EUROLAB دارای اعتبار شناخته شده بین المللی است که از نهادهای اعتباربخشی طرف قراردادهای شناسایی چندجانبه IAF و ILAC، تحت ISO/IEC 17025 برای تست های آزمایشگاهی، ISO/IEC 17020 برای بازرسی و نظارت، و ISO/IEC 17021-1 و سیستم گواهی محصول ISO/IEC. این زنجیره تضمین می کند که گزارش ها و گواهی های صادر شده در سراسر جهان پذیرفته می شوند.
اینکه آیا این آزمون می تواند در محدوده معتبر ارائه شود به محصول شما و استاندارد اعمال شده بستگی دارد. از آنجایی که اعتبارسنجی مبتنی بر روش است، دامنه به صورت کتبی در مرحله نقل قول تأیید می شود.
محدوده و مجوزهامقررات مرتبط
- (EC) 2073/2005 مقررات ضوابط میکروبیولوژیکی
- (EU) 2020/2184 دستورالعمل آب آشامیدنی
آزمون مواد غذایی — این حوزه آزمون چه چیزی را پوشش می‌دهد؟
بخش زیر حوزه‌ای را توصیف می‌کند که آزمون E. coli به آن تعلق دارد؛ شرایط و معیارهای پذیرش این آزمون خاص در بخش‌های بالا آمده است. دامنه ویژه محصول شما در مرحله پیشنهاد قیمت به‌صورت مکتوب مشخص می‌شود.
آزمون‌های غذایی نشان می‌دهند که یک محصول برای مصرف ایمن است و همان چیزی را دارد که روی برچسبش نوشته شده. این خانواده در سه محور کار می‌کند: ایمنی میکروبیولوژیک، ایمنی شیمیایی و ترکیب تغذیه‌ای. هر سه به زیرساخت آزمایشگاهی متفاوت، مجموعه روش متفاوت و زمان تصمیم‌گیری متفاوتی نیاز دارند.
بارزترین ویژگی این حوزه فشار زمانی است. یک نمونه فولادی می‌تواند روی قفسه منتظر بماند؛ اما نمونه شیر خام یا گوشت تازه نمی‌تواند. زمان نمونه‌برداری، دمای حمل‌ونقل و مدت رسیدن به آزمایشگاه مستقیماً اعتبار نتیجه را تعیین می‌کنند. به همین دلیل، در میکروبیولوژی غذایی ثبت زنجیره سرد بخشی جدایی‌ناپذیر از گزارش آزمون است.
در سمت میکروبیولوژیک دو پرسش متفاوت وجود دارد که نباید با هم اشتباه گرفته شوند. شناسایی یک پاتوژن پرسشی کیفی است: آیا سالمونلا در نمونه وجود دارد یا نه؟ شمارش میکروارگانیسم‌های شاخص پرسشی کمی و شاخصی از بهداشت تولید است. نبود پاتوژن در یک محصول نشان‌دهنده خوب بودن بهداشت نیست؛ اگر شمارش کل هوازی‌های مزوفیل بالا باشد، در فرآیند مشکلی وجود دارد.
در سمت شیمیایی، باقیمانده آفت‌کش‌ها، مایکوتوکسین‌ها، فلزات سنگین، افزودنی‌ها، باقیمانده داروهای دامپزشکی و آلاینده‌های فرآیندی (اکریل‌آمید، فوران، PAH) اندازه‌گیری می‌شوند. روش‌های چندباقیمانده در این حوزه (LC-MS/MS و GC-MS/MS مبتنی بر QuEChERS) می‌توانند صدها ماده فعال را در یک تحلیل غربالگری کنند؛ حدود برای هر جفت محصول-ماده جداگانه تعریف می‌شوند.
در سمت ترکیب، پروتئین، چربی، رطوبت، خاکستر، فیبر، نمایه قند، ترکیب اسید چرب و محتوای ویتامین و مواد معدنی تعیین می‌شود. این مقادیر مبنای بیانیه تغذیه‌ای روی برچسب هستند و بازه‌های تلورانس در مقررات تعریف شده‌اند - تفاوت بین مقدار اعلام‌شده و مقدار اندازه‌گیری‌شده باید در این تلورانس باقی بماند.
هیچ نشان CEای برای مواد غذایی وجود ندارد و همین امر نحوه کار این حوزه را شکل می‌دهد. انطباق از طریق اجرای یک سیستم ایمنی غذایی مبتنی بر HACCP، رعایت قوانین برچسب‌گذاری و عدم تجاوز از حدود آلاینده، باقیمانده و میکروبیولوژیک نشان داده می‌شود. نتیجه آزمون مدرکی برای یک گواهی نیست بلکه مدرکی برای یک سیستم کارآمد است.
مدیریت آلرژن اهمیت ویژه‌ای دارد. وجود آلرژن اعلام‌نشده در یک محصول یکی از شایع‌ترین دلایل فراخوان مواد غذایی است. تحلیل در اینجا همراه با اعتبارسنجی تمیزکاری انجام می‌شود: نشان داده می‌شود که خط تولید پس از یک دوره تولید حاوی آلرژن به‌اندازه کافی تمیز شده و خطر آلودگی متقاطع تحت کنترل است.
طرح‌های داوطلبانه در این حوزه عملاً اجباری شده‌اند. زنجیره‌های خرده‌فروشی از تأمین‌کنندگان خود می‌خواهند گواهی تحت یک طرح تأییدشده توسط GFSI (مانند BRCGS، IFS، FSSC 22000) داشته باشند؛ بدون آن، رسیدن به قفسه عملاً غیرممکن است.
گروه‌های روش در این حوزه
شناسایی پاتوژن
شناسایی سالمونلا، لیستریا مونوسیتوژنز، کمپیلوباکتر، کرونوباکتر و ای‌کولای تولیدکننده توکسین شیگا؛ به روش‌های کشت و مولکولی.
شمارش شاخص‌ها
شمارش کل هوازی‌های مزوفیل، انتروباکتریاسه، کلیفرم و ای‌کولای، استافیلوکوک کواگولاز مثبت، مخمر و کپک، باکتری اسید لاکتیک، کلستریدیای احیاکننده سولفیت.
باقیمانده آفت‌کش و دامپزشکی
غربالگری چندباقیمانده با LC-MS/MS و GC-MS/MS همراه با استخراج QuEChERS.
مایکوتوکسین و آلاینده‌ها
آفلاتوکسین‌ها، اوکراتوکسین A، دی‌اکسی‌نیوالنول، پاتولین؛ فلزات سنگین (ICP-MS)، اکریل‌آمید و ترکیبات PAH.
ترکیب تغذیه‌ای
پروتئین کجلدال، نمایه چربی و اسید چرب، رطوبت، خاکستر، فیبر غذایی، نمایه قند، تحلیل ویتامین و مواد معدنی.
آلرژن و اصالت
تحلیل آلرژن گلوتن، شیر، تخم‌مرغ، آجیل و سویا؛ روش‌های مولکولی برای شناسایی گونه و کشف تقلب.
موارد رایج اشتباه‌گرفته‌شده در این حوزه
- نمونه‌برداری نیمی از نتیجه است. نمونه‌ای که در دمای نادرست حمل شده یا تأخیر داشته حتی اگر در آزمایشگاه به‌درستی تحلیل شود نتیجه نامعتبر می‌دهد.
- نبود پاتوژن نشان‌دهنده خوب بودن بهداشت نیست؛ شمارش شاخص‌ها اطلاعات جداگانه‌ای می‌دهد و این دو با هم خوانده می‌شوند.
- نتیجه نمونه‌ای که از یک محموله گرفته شده تنها در صورتی قابل تعمیم به کل محموله است که طرح نمونه‌برداری به‌صورت آماری تنظیم شده باشد.
- حدود در مقررات جداگانه بر اساس گروه محصول تعریف می‌شوند و به‌طور منظم به‌روزرسانی می‌شوند؛ تصمیم انطباق مبتنی بر جدول حدود قدیمی ممکن است نادرست باشد.
- در صادرات، حدود کشور مقصد ممکن است با حدود اتحادیه اروپا متفاوت باشد؛ یک محصول واحد ممکن است در یک بازار منطبق و در بازار دیگر نامنطبق باشد.
این نتایج از کدام تصمیم پشتیبانی می‌کنند
- راستی‌آزمایی طرح HACCP و پایش فرآیند
- مبنای بیانیه تغذیه‌ای و اطلاعات آلرژن روی برچسب
- گواهی بهداشتی پیش از صادرات و انطباق با حدود بازار مقصد
- کنترل پذیرش بر اساس تأمین‌کننده و محموله
- مطالعات عمر قفسه و تعیین شرایط نگهداری
- تولید مستندات برای ممیزی‌های طرح‌های تأییدشده GFSI
تست های مرتبط
پرسش‌های متداول درباره E. coli
PCR مثبت شد، آیا محصول قطعاً آلوده است؟
PCR حضور ژن هدف را نشان می دهد. این به تنهایی وجود باکتری های زنده را ثابت نمی کند. بنابراین، استاندارد نیاز به تأیید با جداسازی فرهنگی نتایج مثبت دارد. نتیجه تأیید به عنوان مبنایی برای تصمیم نهایی در نظر گرفته می شود.