Qu'est-ce que Assay ?
Le test mesure la quantité de substance active dans le produit. La HPLC est la méthode la plus courante ; des méthodes titrimétriques ou spectrophotométriques peuvent également être utilisées conformément à la monographie. Le résultat est exprimé en pourcentage du contenu déclaré.
Objectif de Assay
Le but est de vérifier que le produit contient la dose déclarée. L’écart de dose crée un risque direct pour l’efficacité et la sécurité.
À quels produits Assay s'applique-t-il ?
- Comprimés, gélules et dragées
- Sirops, suspensions et gouttes
- Solutions injectables
- Crèmes, gels et pommades
- Ingrédients pharmaceutiques actifs
Dans quels secteurs Assay est-il utilisé ?
Normes relatives à Assay
- Ph.Eur. 2.2.29 (chromatographie liquide)
- Ph.Eur. 2.2.46 (techniques de séparation chromatographique)
- USP <621> (chromatographie)
- ICH Q2(R2) (validation des procédures analytiques)
- Monographies de produits pertinentes
Conditions de Assay
- Adéquation du système
- Les critères d'adéquation du système énoncés dans la monographie doivent être respectés à chaque analyse.
- Norme de référence
- Pharmacopée ou norme de travail qualifiée
- Préparation des échantillons
- Extraction et dilution définies dans la monographie
Équipement pour Assay
- HPLC / UPLC (avec détecteur DAD ou UV)
- Titreur automatique
- Spectrophotomètre UV/Vis
- Balance analytique (0,00001 g)
- Bain à ultrasons et centrifugeuse
Exigences d'échantillon pour Assay
- Le nombre d'unités précisé dans la monographie (comprimé, capsule, etc.)
- Le numéro de lot et la dose déclarée doivent être fournis
- Le spécimen doit être envoyé dans son emballage d'origine
- Les informations sur les normes de référence doivent être fournies
Durée de Assay
L'analyse chromatographique, ainsi que la préparation des échantillons et l'évaluation de l'adéquation du système, prennent plusieurs jours ouvrables.
Procédure de Assay
- 1La méthode et les conditions de la monographie sont définies.
- 2La solution étalon de référence est préparée.
- 3Un test d'adéquation du système est effectué et les critères sont vérifiés.
- 4Le spécimen est préparé conformément à la monographie.
- 5Une mesure chromatographique ou titrimétrique est effectuée.
- 6La teneur en substance active est calculée en pourcentage de la valeur déclarée.
Critères d'acceptation de Assay
Le critère d'acceptation n'est pas indiqué sur cette page : pour chaque substance active et chaque produit, la limite provient de la monographie de la pharmacopée concernée ou de la spécification approuvée dans le dossier d'autorisation de mise sur le marché. Le chapitre général de la pharmacopée définit la méthode ; la monographie fixe la limite.
Évaluation des résultats
Un résultat obtenu sans répondre aux critères d’adéquation du système n’est pas valide ; ces critères prouvent que la méthode a fonctionné correctement ce jour-là. Le résultat du test à lui seul n'est pas non plus suffisant : les tests d'uniformité du contenu et de dissolution montrent que chaque unité du produit délivre la dose correcte.
Rapport de Assay
- Identification des échantillons, du lot et de la dose déclarée
- Monographie et conditions de méthode appliquées
- Résultats d’adéquation du système
- Résultat du test (% de déclaré)
- Chromatogrammes et calculs
Accréditation
EUROLAB détient une accréditation internationalement reconnue obtenue auprès des organismes d'accréditation parties aux accords de reconnaissance multilatérale de l'IAF et de l'ILAC, selon ISO/IEC 17025 pour les tests en laboratoire, ISO/IEC 17020 pour l'inspection et la surveillance, et ISO/IEC 17021-1 et ISO/IEC 17065 pour la certification des systèmes et des produits. Cette chaîne garantit que les rapports et certificats délivrés sont acceptés dans le monde entier.
La possibilité de proposer ce test dans le cadre d'une accréditation dépend de votre produit et de la norme appliquée ; l'accréditation étant méthodologique, le périmètre est confirmé par écrit au stade du devis.
Portée et autorisationsRèglements connexes
- Directive 2001/83/CE relative aux médicaments à usage humain
- Guide BPF (EudraLex Volume 4)
Analyse pharmaceutique — Que couvre ce domaine d'essai ?
La section ci-dessous décrit le domaine auquel appartient l'essai Assay ; les conditions et critères d'acceptation de cet essai figurent dans les sections ci-dessus. Le périmètre propre à votre produit est confirmé par écrit au stade du devis.
L'analyse pharmaceutique permet de déterminer l'identité, la pureté, la quantité et le comportement du principe actif d'un médicament et du produit fini. Ce qui distingue cette discipline des autres, c'est que les méthodes sont en grande partie définies dans les pharmacopées : la Pharmacopée européenne (Ph. Eur.) et la Pharmacopée des États-Unis (USP) fournissent à la fois la méthode et le cadre de référence.
Le caractère contraignant de la méthode de la pharmacopée détermine le mode de fonctionnement du secteur. Alors que dans d'autres secteurs, un laboratoire peut choisir une méthode appropriée, ici, c'est la méthode décrite dans la monographie qui fait autorité ; si une méthode alternative doit être utilisée, il faut en démontrer l'équivalence. Cela garantit la comparabilité des résultats à l'échelle mondiale.
Les analyses sont réalisées selon plusieurs groupes. L'identification et la quantification (HPLC, UV, titrage) permettent de déterminer la nature du produit et sa teneur en principe actif. Le profil d'impuretés et les résidus de solvants permettent de détecter les composés indésirables issus du processus de fabrication. Les impuretés élémentaires concernent les métaux provenant des catalyseurs et des équipements. Le comportement de dissolution et de dispersion constitue le principal indicateur in vitro du comportement de libération du médicament dans l'organisme.
L'ESSAI DE DISSOLUTION est l'une des mesures les plus critiques dans ce domaine. Il ne suffit pas qu'un comprimé contienne la quantité adéquate de principe actif ; celui-ci doit également se dissoudre à une vitesse appropriée. Le profil de dissolution sert à évaluer l'impact des modifications de la formulation sur la biodisponibilité et occupe une place centrale dans l'autorisation de mise sur le marché des médicaments génériques.
La VALIDATION DE LA MÉTHODE est une étape obligatoire dans cette famille. Si la méthode de la pharmacopée est utilisée, on vérifie qu'elle fonctionne correctement dans les conditions propres à ce laboratoire. Si une méthode propre a été mise au point, elle est validée à l'aide de paramètres tels que la linéarité, la précision, l'exactitude, la sélectivité, les limites de détection et de quantification, ainsi que la robustesse. Les résultats obtenus à l'aide d'une méthode non validée ne peuvent pas être utilisés dans le dossier d'autorisation de mise sur le marché.
Les essais de stabilité déterminent la durée de conservation et constituent le processus le plus long dans ce domaine. Le produit est conservé dans des conditions de température et d'humidité définies, puis analysé à intervalles réguliers ; les résultats servent de base à l'établissement de la durée de conservation et des conditions de stockage. Les essais en conditions accélérées fournissent des informations préliminaires, mais les données en temps réel sont essentielles.
Le volet microbiologique constitue un domaine à part entière : comptage de la charge microbienne, recherche de micro-organismes ciblés, test de stérilité des produits stériles et test de détection des endotoxines bactériennes. Pour les produits stériles, l'intégrité de l'emballage et la validation de la stérilisation entrent également en ligne de compte.
L'intégrité des données est devenue ces dernières années le point central des inspections. Il ne suffit pas que le résultat soit correct ; les données brutes doivent être traçables, inaltérables et auditables. La validation des systèmes d'enregistrement électronique est ainsi devenue une part indissociable de l'analyse.
Groupes de méthodes dans ce domaine
Identité et dosage
HPLC, UPLC, spectrophotométrie UV-Vis, titrage, confirmation d'identité par FTIR.
Impuretés et résidus
Impuretés apparentées, produits de dégradation, solvants résiduels (GC-headspace), criblage des nitrosamines.
Impuretés élémentaires
Détermination des impuretés élémentaires par ICP-MS et ICP-OES et évaluation du risque associée.
Physico-chimique
Dissolution et désagrégation, dureté, friabilité, uniformité des unités de dose, teneur en eau (Karl Fischer), taille des particules.
Microbiologique
Dénombrement microbien, micro-organismes spécifiés, stérilité, endotoxine bactérienne, efficacité du conservateur.
Stabilité
Études de stabilité en temps réel et accélérée ; photostabilité et stabilité en cours d'utilisation.
Confusions fréquentes dans ce domaine
- La méthode pharmacopéique est contraignante ; une méthode alternative ne peut être utilisée qu'en démontrant son équivalence.
- Un résultat produit sans validation de méthode ne peut être utilisé dans un dossier d'autorisation.
- La stabilité accélérée ne remplace pas les données en temps réel ; la durée de conservation est étayée par des résultats en temps réel.
- Le profil de dissolution est sensible au type d'appareil, à la vitesse d'agitation et au milieu ; les conditions doivent être complètes dans le rapport.
- Une lacune dans l'intégrité des données produit une non-conformité lors d'une inspection, même si le résultat est correct.
- Un changement de formulation ou de fournisseur nécessite une comparaison analytique et, si besoin, une nouvelle étude de stabilité.
Quelles décisions ces résultats étayent
- Le dossier d'autorisation et la libération des lots
- Détermination de la durée de conservation et des conditions de stockage
- Transfert de méthode et validation de méthode
- Contrôle d'acceptation des matières premières entrantes des fournisseurs
- Évaluation de l'effet d'un changement de formulation sur la bioéquivalence
Tests associés
Questions fréquentes sur Assay
Le résultat du test est réussi : le produit est-il conforme ?
Pas tout seul. L'analyse donne la teneur moyenne ; l'uniformité du contenu est nécessaire séparément pour la distribution d'unité à unité et les tests de dissolution pour prédire la biodisponibilité.