ما هو Endotoxin؟
يقيس اختبار الذيفان الداخلي كمية عديد السكاريد الدهني (الذيفان الداخلي) الناشئ من جدار الخلية للبكتيريا سالبة الجرام. الذيفان الداخلي مقاوم للحرارة: التعقيم يقتل البكتيريا لكنه لا يدمر الذيفان الداخلي. ومن ثم، يمكن للمنتج المعقم أن يظل مسببًا للحمى ويجب اختباره بشكل منفصل.
الغرض من Endotoxin
والغرض من ذلك هو إظهار أن مستوى السموم الداخلية في الأجهزة التي تتصل بالجسم عن طريق مجرى الدم أو السائل النخاعي أو الزرع أقل من الحد المسموح به.
على أي منتجات يُطبَّق Endotoxin؟
- القسطرة الوريدية وأجهزة التسريب
- يزرع
- مجموعات غسيل الكلى
- الأدوات والمجموعات الجراحية
- الأجهزة التي تتلامس مع السائل النخاعي
في أي قطاعات يُستخدم Endotoxin؟
المواصفات المتعلقة بـ Endotoxin
- الجيش الشعبي 2.6.14
- جامعة جنوب المحيط الهادئ <85>
- أنسي/آمي ST72
- ISO 11737-3
شروط Endotoxin
- طريقة
- طرق الجلطة الهلامية أو قياس التعكر أو LAL
- اِستِخلاص
- يتم استخلاص الأسطح الملامسة لجسم المنتج بمياه خالية من السموم الداخلية
- السيطرة على التدخل
- يجب التحقق من أن المنتج لا يمنع أو يعزز الاختبار
جهاز Endotoxin
- مجموعات اختبار LAL والكواشف
- الأواني الزجاجية الخالية من السموم الداخلية
- قارئ صفيحة ميكروية (للطرق الحركية)
- فرن الحرارة الجافة (لإزالة البيروجين)
- حاضنة يمكن التحكم بدرجة حرارتها
متطلبات العينة لـ Endotoxin
- المنتج النهائي المعقم
- يجب أن تكون مساحة السطح الملامسة للجسم معروفة
- يتم تحديد عدد العينات وفقًا لدستور الأدوية ومعلومات الدفعة
- يجب تحضير العينة ونقلها في حاويات خالية من السموم الداخلية
مدة Endotoxin
يستغرق الاختبار الأولي، بما في ذلك دراسة التداخل (التثبيط/التعزيز)، عدة أيام؛ الاختبارات الروتينية أقصر.
إجراء Endotoxin
- 1يتم حساب حد السموم الداخلية للمنتج.
- 2يتم إجراء دراسة التداخل، أو الإشارة إلى دراسة موجودة.
- 3يتم استخراج المنتج بمياه خالية من السموم الداخلية.
- 4يتم خلط المستخلص مع كاشف LAL.
- 5ويتم تحضينه عند درجة حرارة محددة.
- 6يتم قياس تكوين الجلطة، أو التعكر، أو تطور اللون، اعتمادًا على الطريقة.
- 7يتم حساب كمية الذيفان الداخلي من المنحنى القياسي.
معايير قبول Endotoxin
معيار القبول هو حد السموم الداخلية المحسوب للمنتج. يتم حساب هذا الحد باستخدام الصيغة المحددة في دستور الأدوية، استنادًا إلى مسار اتصال الجهاز ووزن المريض؛ ويكون الحد أقل بشكل ملحوظ بالنسبة للأجهزة التي تتلامس مع السائل النخاعي.
تقييم النتائج
تتم مقارنة النتيجة مع الحد المحسوب. وإذا كانت دراسة التداخل غير صالحة، فلا يمكن تفسير النتيجة؛ حيث يقوم المنتج بقمع رد فعل LAL، يجب تحديد عامل التخفيف.
تقرير Endotoxin
- دستور الأدوية التطبيقي والطريقة
- وصف العينة والدفعة ومساحة السطح
- الحد من السموم الداخلية المحسوبة
- نتائج دراسة التداخل وعامل التخفيف
- قيمة الذيفان الداخلي المقاسة (الاتحاد الأوروبي/الجهاز أو الاتحاد الأوروبي/مل)
- مقارنة مع الحد
الاعتماد
حصلت EUROLAB على اعتماد معترف به دوليًا تم الحصول عليه من هيئات الاعتماد الأطراف في ترتيبات الاعتراف المتعددة الأطراف IAF وILAC، بموجب ISO/IEC 17025 للاختبارات المعملية، وISO/IEC 17020 للتفتيش والمراقبة، وISO/IEC 17021-1 وISO/IEC 17065 لشهادة النظام والمنتجات. تضمن هذه السلسلة قبول التقارير والشهادات الصادرة في جميع أنحاء العالم.
تعتمد إمكانية تقديم هذا الاختبار ضمن النطاق المعتمد على منتجك والمعيار المطبق؛ وبما أن الاعتماد يعتمد على الطريقة، يتم تأكيد النطاق كتابيًا في مرحلة عرض الأسعار.
النطاق والتفويضاتاللوائح ذات الصلة
- MDR (الاتحاد الأوروبي) 2017/745
- متطلبات دستور الأدوية
التحليل الصيدلاني — ما الذي يغطيه مجال الاختبار هذا؟
يصف القسم أدناه المجال الذي ينتمي إليه اختبار Endotoxin؛ أما شروط ومعايير قبول هذا الاختبار تحديدًا فترد في الأقسام أعلاه. يتم تأكيد النطاق الخاص بمنتجكم كتابيًا في مرحلة العرض السعري.
يحدد التحليل الصيدلاني هوية المادة الفعالة الدوائية والمنتج النهائي ونقاءه وكميته وسلوكه. وما يميز هذا المجال عن غيره هو أن الطرق مُحددة إلى حد كبير في دساتير الأدوية: حيث يوفر كل من دستور الأدوية الأوروبي (Ph. Eur.) ودستور الأدوية للولايات المتحدة (USP) الطريقة وإطار القبول معًا.
تحدد الطبيعة الملزمة لطريقة دستور الأدوية طريقة العمل في هذا المجال. ففي حين يمكن للمختبر في القطاعات الأخرى اختيار طريقة مناسبة، فإن الطريقة الموصوفة في الدراسة المرجعية هنا هي الأساس؛ وإذا تم استخدام طريقة بديلة، فيجب إثبات تكافؤها. وهذا يضمن قابلية مقارنة النتائج على مستوى العالم.
تُجرى التحليلات في عدة مجموعات. يُظهر تحديد الهوية والتحديد الكمي (HPLC، الأشعة فوق البنفسجية، المعايرة) ماهية المنتج وكمية المادة الفعالة التي يحتوي عليها. يبحث ملف الشوائب والمذيبات المتبقية عن المركبات غير المرغوب فيها الناتجة عن عملية الإنتاج. تتناول شوائب العناصر المعادن الناتجة عن المحفزات والمعدات. يُعد سلوك الذوبان والتوزيع أهم مؤشر مختبري يتعلق بسلوك إفراز الدواء في الجسم.
يُعد اختبار الذوبان أحد أهم القياسات الحاسمة في هذا المجال. فلا يكفي أن يحتوي القرص على الكمية الصحيحة من المادة الفعالة؛ بل يجب أن تذوب تلك المادة بالسرعة المناسبة. يُستخدم ملف تعريف الذوبان في تقييم تأثير التغييرات في التركيبة على الاستفادة الحيوية، ويحتل مكانة مركزية في ترخيص الأدوية الجنيسة.
يُعد «التحقق من صحة الطريقة» خطوة إلزامية في هذه المجموعة. في حال استخدام طريقة دستور الأدوية، يتم التحقق من أن الطريقة تعمل بشكل مناسب في ظروف ذلك المختبر. أما في حالة تطوير طريقة خاصة، فيتم التحقق من صلاحيتها من خلال معايير مثل الخطية والدقة والصحة والانتقائية وحدود الكشف والتحديد والمتانة. ولا يمكن استخدام النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام طريقة لم يتم التحقق من صلاحيتها في ملف الترخيص.
تحدد اختبارات الاستقرار مدة الصلاحية، وهي أطول عملية في هذا المجال. حيث يتم تخزين المنتج في ظروف درجة الحرارة والرطوبة المحددة له، ويتم تحليله على فترات زمنية محددة، وتشكل النتائج أساسًا لادعاءات مدة الصلاحية وظروف التخزين. وتوفر الظروف المسرَّعة معلومات أولية، لكن البيانات في الوقت الفعلي هي الأساسية.
يُشكل الجانب الميكروبيولوجي جزءًا منفصلاً: حساب الحمل الميكروبي، والبحث عن الكائنات الحية الدقيقة المحددة، واختبار التعقيم للمنتجات المعقمة، واختبار الذيفان الداخلي البكتيري. كما تدخل في المنتجات المعقمة عملية التحقق من سلامة العبوة والتحقق من صحة عملية التعقيم.
أصبحت سلامة البيانات في السنوات الأخيرة محور عمليات التفتيش. فلا يكفي أن تكون النتيجة صحيحة؛ بل يجب أن تكون البيانات الخام قابلة للتتبع وغير قابلة للتعديل وقابلة للتدقيق. لذلك أصبح التحقق من صحة أنظمة السجلات الإلكترونية جزءًا لا يتجزأ من التحليل.
مجموعات الطرق في هذا المجال
الهوية والمقايسة
HPLC وUPLC والتحليل الطيفي فوق البنفسجي والمرئي والمعايرة، وتأكيد الهوية بواسطة FTIR.
الشوائب والمخلفات
الشوائب ذات الصلة، ومنتجات التحلل، والمذيبات المتبقية (GC-headspace)، وفحص النيتروزامين.
الشوائب العنصرية
تحديد الشوائب العنصرية بواسطة ICP-MS وICP-OES وتقييم المخاطر المرتبط بها.
فيزيوكيميائي
الانحلال والتفتت، والصلادة، والتفتت الهش، وتجانس وحدات الجرعة، ومحتوى الماء (كارل فيشر)، وحجم الجسيمات.
ميكروبيولوجي
العد الميكروبي، والكائنات الدقيقة المحددة، والتعقيم، والذيفان الداخلي البكتيري، وفعالية الحافظة.
الثبات
دراسات الثبات الفعلي والمسرَّع؛ والثبات الضوئي والثبات أثناء الاستخدام.
أمور يشيع الخلط بينها في هذا المجال
- طريقة دستور الأدوية ملزمة؛ ولا يمكن استخدام طريقة بديلة إلا بإثبات تكافؤها.
- لا يمكن استخدام نتيجة أُنتجت دون التحقق من صحة الطريقة في ملف الترخيص.
- لا يحل الثبات المسرَّع محل البيانات الفعلية الزمن؛ إذ تُدعَم مدة الصلاحية بنتائج فعلية الزمن.
- يكون ملف الانحلال حساسًا لنوع الجهاز وسرعة التحريك والوسط؛ ويجب أن تكون الظروف كاملة في التقرير.
- يُنتج القصور في سلامة البيانات عدم مطابقة في التفتيش حتى لو كانت النتيجة صحيحة.
- يتطلب تغيير التركيبة أو المورّد مقارنة تحليلية، وعند الحاجة، دراسة ثبات جديدة.
ما القرارات التي تدعمها هذه النتائج
- ملف الترخيص والإفراج عن الدفعة
- تحديد مدة الصلاحية وشروط التخزين
- نقل الطريقة والتحقق من صحتها
- مراقبة قبول المواد الخام الواردة من الموردين
- تقييم أثر تغيير التركيبة على التكافؤ الحيوي
الاختبارات ذات الصلة
الأسئلة الشائعة حول Endotoxin
منتجي معقم — لماذا أحتاج إلى اختبار السموم الداخلية؟
الذيفان الداخلي مقاوم للحرارة. على الرغم من أن التعقيم يقتل البكتيريا، إلا أنه لا يكسر الذيفان الداخلي، وهو بقايا جدار الخلية. وبالتالي، لا يزال من الممكن أن يتسبب المنتج المعقم في حدوث تفاعل بيروجيني، ويجب قياس الذيفان الداخلي بشكل منفصل.
كيف يتم تحديد حد الذيفان الداخلي؟
ويتم حسابه باستخدام الصيغة المحددة في دستور الأدوية، بناءً على طريق الاتصال بالجهاز والجرعة المسموح بها. بالنسبة للأجهزة التي تتلامس مع السائل النخاعي، يكون الحد أقل بكثير؛ يجب أن يظهر الحساب في التقرير.