Тест на цитотоксичность — ISO 10993-5

Что такое Cytotoxicity?

Тест на цитотоксичность оценивает in vitro, оказывают ли вещества, выделяемые из медицинского изделия или его материала, токсическое воздействие на культуру клеток. Это первый и наиболее распространенный этап оценки биосовместимости: поскольку он быстрый, чувствительный и не требует использования животных, он используется в качестве скринингового теста.

Cytotoxicity: цель

Цель состоит в том, чтобы определить, оказывают ли вещества, мигрирующие из материала, отрицательное влияние на жизнеспособность, пролиферацию или морфологию клеток, и решить, следует ли приступать к дальнейшим тестам на биосовместимость.

К каким изделиям применяется Cytotoxicity?

Хирургические инструменты и имплантаты
Наборы катетеров, канюль и трубок
Раневые повязки и бинты
Стоматологические материалы
Упаковка и компоненты, контактирующие с устройством

В каких отраслях применяется Cytotoxicity?

Медицинское оборудованиеЗдравоохранениеФармацевтика

Стандарты, связанные с Cytotoxicity

ISO 10993-5in vitro sitotoksisite тест
ISO 10993-1
ISO 10993-12
Фармакопея США <87>
ISO 11607стерильная барьерная упаковка конечного продукта тест

Cytotoxicity: условия

Клеточная линия: Обычно используется клеточная линия мышиных фибробластов L929.
Метод: Тест на экстракт, прямой контакт или диффузию в агар; выбирается в зависимости от устройства
Добыча: Согласно ISO 10993-12; обычные условия: 24 часа при 37 °C или 72 часа при 50 °C.
Оценка: Процент жизнеспособности клеток или степень реактивности (0–4)

Оборудование для Cytotoxicity

CO₂-инкубатор
Шкаф биобезопасности
Инвертированный фазово-контрастный микроскоп
Ридер микропланшетов (для метода MTT/XTT)
Расходные материалы для клеточных культур

Требования к образцам для Cytotoxicity

Образец должен представлять собой конечный стерилизованный продукт.
Не сырье — подается продукт, прошедший все процессы изготовления и стерилизации.
Количество образцов определяется в соответствии с соотношением площадь поверхности/экстракция, предусмотренным стандартом.
Должны быть указаны тип устройства и продолжительность контакта с телом.
Необходимо сообщить метод стерилизации и, если применимо, информацию об остатках.

Cytotoxicity: продолжительность

Обычно завершается в течение 1–2 недель, включая экстракцию и инкубацию клеточной культуры.

Cytotoxicity: порядок проведения

1Образец извлекается при соотношении площади поверхности к объему, предписанном стандартом.
2Подготавливают клеточную культуру и дают возможность сформироваться монослою.
3Экстракт (или, при прямом контакте, образец) наносят на клетки.
4Положительный и отрицательный контроль проводят в одинаковых условиях.
5Клетки исследуют микроскопически в конце указанного инкубационного периода.
6Если применяется количественный метод, измеряют жизнеспособность клеток.
7Реактивность оценивается и сообщается.

Cytotoxicity: критерии приёмки

Общим критерием приемлемости согласно ISO 10993-5 является то, что жизнеспособность клеток не падает ниже 70% от контроля. В качественных методах степень реактивности не должна превышать предел, указанный в стандарте (обычно степень 2).

Оценка результатов

Результат интерпретируется вместе с элементами управления; если элементы управления не демонстрируют ожидаемого поведения, тест недействителен. Обнаружение цитотоксичности само по себе не означает, что устройство не соответствует требованиям — необходимо исследовать источник (остаточный растворитель, остаток стерилизации, добавка).

Cytotoxicity: протокол

Применяемый стандарт и редакция
Описание образца, номер партии и метод стерилизации.
Условия экстракции (растворитель, температура, продолжительность, соотношение)
Положительные и отрицательные результаты контроля
Результаты тестов и оценки
Оценка и заключение

Аккредитация

EUROLAB имеет международно признанную аккредитацию, полученную от органов по аккредитации, являющихся участниками многосторонних соглашений о признании IAF и ILAC, в соответствии с ISO/IEC 17025 для лабораторных испытаний, ISO/IEC 17020 для инспекций и надзора, а также ISO/IEC 17021-1 и ISO/IEC 17065 для сертификации систем и продукции. Эта цепочка гарантирует, что выданные отчеты и сертификаты принимаются по всему миру.

Возможность проведения этого теста в рамках аккредитованной области зависит от вашего продукта и применяемого стандарта; поскольку аккредитация основана на методе, объем работ подтверждается в письменной форме на этапе предложения.

Область применения и разрешения

Соответствующие правила

МЛУ (ЕС) 2017/745
План биологической оценки ISO 10993-1

Medikal Cihaz Testleri — Что охватывает эта область испытаний?

В разделе ниже описывается область, к которой относится испытание Cytotoxicity; условия и критерии приемки именно этого испытания приведены в разделах выше. Объём, специфичный для вашего продукта, подтверждается письменно на этапе коммерческого предложения.

Испытания медицинских изделий показывают, что изделие безопасно для пациента и пользователя и сохраняет свою предполагаемую эффективность. В этой области безопасность — это не только отсутствие вреда; неспособность устройства выполнять ожидаемую функцию также рассматривается как риск. Пропуск тревоги монитором или неверная доза, введённая насосом, — это непосредственно событие безопасности пациента.

В центре этой области находится УПРАВЛЕНИЕ РИСКАМИ, и именно это отличает медицину от других секторов. Процесс управления рисками, проводимый по ISO 14971, также определяет, какие испытания требуются. Перечень испытаний не копируется из таблицы стандартов; он выводится и обосновывается исходя из назначения устройства, характера и продолжительности контакта с пациентом, среды использования и предвидимого неправильного применения.

Оценка состоит из нескольких отдельных областей работы, каждая со своим набором стандартов. Биосовместимость определяется серией ISO 10993, электробезопасность устройства — серией IEC 60601, стерилизация — ISO 11135/11137/17665, упаковка — ISO 11607, программное обеспечение — IEC 62304, а удобство использования — IEC 62366. Система менеджмента качества (ISO 13485) объединяет всё это.

Какие испытания требуются, определяется КЛАССОМ устройства и ХАРАКТЕРОМ КОНТАКТА С ТЕЛОМ. Изделие с кратковременным контактом с кожей и имплантат, попадающий в кровоток, не проходят один и тот же набор испытаний; область применения устанавливается планом биологической оценки, составленным по ISO 10993-1. Этот план письменно обосновывает, какие конечные точки требуются и почему остальные — нет.

Упаковка и стерилизация в этой области воспринимаются так же серьёзно, как и само устройство. Для стерильного устройства упаковка — это не транспортная тара, а барьер, поддерживающий стерильность; при нарушении барьера устройство перестаёт быть стерильным. Поэтому процессы упаковки валидируются, а срок годности подтверждается данными реального старения.

Для устройств, содержащих программное обеспечение, оценка смещается от испытаний к обеспечению ПРОЦЕССА. IEC 62304 определяет, какие этапы разработки и верификации должны соблюдаться в зависимости от класса безопасности ПО; доказательством служит прослеживаемость процесса разработки. Не тестирование делает ПО безопасным, а запись процесса.

Клиническая сторона — отдельная колонка технического файла. Протоколы испытаний показывают техническую безопасность устройства; клиническая оценка устанавливает, что устройство обеспечивает предполагаемую клиническую пользу и что соотношение польза-риск приемлемо. Ни одно не заменяет другое.

Группы методов в этой области

Биосовместимость
Цитотоксичность, раздражение, кожная сенсибилизация, системная токсичность, гемосовместимость, генотоксичность и местные эффекты после имплантации. Требуемые конечные точки определяются планом ISO 10993-1.
Электробезопасность устройств
IEC 60601-1 основная безопасность и основные рабочие характеристики; требования по ЭМС, тревоге, эргономике и окружающей среде через сопутствующие стандарты.
Валидация стерилизации
Валидация процессов стерилизации оксидом этилена, излучением или влажным теплом; исследования биологической нагрузки и уровня гарантии стерильности.
Упаковка
Целостность стерильной барьерной системы, прочность шва, симуляция дистрибуции и исследования сроков годности.
Микробиологические испытания
Определение биологической нагрузки, испытание на стерильность, бактериальный эндотоксин и, при необходимости, исследования валидации носителя.
Программное обеспечение и эргономика
Доказательства жизненного цикла по IEC 62304 и оценка, ориентированная на ошибки использования, по IEC 62366.

Часто путаемое в этой области

Цитотоксичность сама по себе не является свидетельством биосовместимости; необходимый набор конечных точек определяется и обосновывается согласно ISO 10993-1.
Сертификат ISO 13485 не даёт права на маркировку CE; классификация по MDR, техническое досье и процесс нотифицированного органа выполняются отдельно.
Ускоренное старение не заменяет старение в реальном времени; Заявление о сроке годности подтверждается данными в реальном времени.
Изменение материала (поставщик, пигмент, метод стерилизации) может потребовать повторения биологической оценки; это не тихое изменение.
Оценка, проведённая без сопутствующих и частных стандартов IEC 60601-1, является неполной; какие стандарты -1-x и -2-x были применены, должно быть указано в отчёте.
Диагностические изделия in vitro регулируются IVDR, а не MDR, а лабораторное оборудование часто относится к сфере IEC 61010-1.

Какие решения подкрепляют эти результаты

Техническое досье MDR/IVDR и оценка нотифицированным органом
Завершение плана биологической оценки
Валидация стерилизации и упаковки
Определение срока годности и условий хранения
Определение объёма повторной оценки после изменения конструкции

Связанные тесты

Cytotoxicity: частые вопросы

Достаточно ли прохождения теста на цитотоксичность?

№ ISO 10993-1 требует, чтобы испытательный комплект был определен в соответствии с типом устройства и продолжительностью контакта с телом. Цитотоксичность – это скрининговый тест; по мере увеличения продолжительности контакта и инвазивности в игру вступают сенсибилизация, раздражение, системная токсичность и дополнительные тесты.

Могу ли я отправить образец сырья?

Этого не должно быть. Оценка проводится на конечном, стерилизованном продукте; технологические добавки, средства для смазки форм и остатки стерилизации напрямую влияют на результат и не присутствуют в сырье.

Результат оказался цитотоксическим — что делать?

Сначала необходимо выяснить источник: частыми причинами являются остатки растворителя, чистящего химиката, остатков стерилизации (например, оксида этилена) или конкретной добавки. Повторное тестирование без удаления источника обычно дает тот же результат.