Che cos'è Endotoxin?
Il test delle endotossine misura la quantità di lipopolisaccaride (endotossina) proveniente dalla parete cellulare dei batteri Gram-negativi. L'endotossina è resistente al calore: la sterilizzazione uccide il batterio ma non distrugge l'endotossina. Un prodotto sterile può quindi essere ancora pirogeno e deve essere testato separatamente.
Scopo di Endotoxin
Lo scopo è dimostrare che il livello di endotossina nei dispositivi che entrano in contatto con il corpo attraverso il flusso sanguigno, il liquido cerebrospinale o l'impianto è inferiore al limite consentito.
A quali prodotti si applica Endotoxin?
- Cateteri endovenosi e set di infusione
- Impianti
- Set per dialisi
- Strumenti e set chirurgici
- Dispositivi a contatto con il liquido cerebrospinale
In quali settori si utilizza Endotoxin?
Norme relative a Endotoxin
- EP 2.6.14
- USP <85>
- ANSI/AAMI ST72
- ISO 11737-3
- ISO 11607imballaggio barriera sterile del prodotto finale test
Condizioni di Endotoxin
- Metodo
- Metodi LAL gel-coagulo, turbidimetrico o cromogenico
- Estrazione
- Le superfici a contatto con il corpo del prodotto vengono estratte con acqua priva di endotossine
- Controllo delle interferenze
- È necessario verificare che il prodotto non inibisca o migliori il test
Apparecchiatura per Endotoxin
- Kit e reagenti per test LAL
- Vetreria priva di endotossine
- Lettore di micropiastre (per metodi cinetici)
- Forno a calore secco (per depirogenazione)
- Incubatrice a temperatura controllata
Requisiti del campione per Endotoxin
- Il prodotto finale sterilizzato
- La superficie di contatto con il corpo deve essere nota
- Il numero di campioni viene determinato in base alla farmacopea e alle informazioni sul lotto
- Il campione deve essere preparato e trasportato in contenitori privi di endotossine
Durata di Endotoxin
Il test iniziale, compreso lo studio sull'interferenza (inibizione/potenziamento), richiede diversi giorni; i test di routine sono più brevi.
Procedura di Endotoxin
- 1Viene calcolato il limite di endotossine per il prodotto.
- 2Viene eseguito uno studio di interferenza o viene fatto riferimento a uno studio esistente.
- 3Il prodotto viene estratto con acqua priva di endotossine.
- 4L'estratto viene miscelato con il reagente LAL.
- 5Viene incubato alla temperatura definita.
- 6A seconda del metodo vengono misurati la formazione di coaguli, la torbidità o lo sviluppo del colore.
- 7La quantità di endotossina viene calcolata dalla curva standard.
Criteri di accettazione di Endotoxin
Il criterio di accettazione è il limite di endotossine calcolato per il prodotto. Tale limite viene calcolato utilizzando la formula definita nella farmacopea, in base alla via di contatto del dispositivo e al peso del paziente; il limite è nettamente inferiore per i dispositivi a contatto con il liquido cerebrospinale.
Valutazione dei risultati
Il risultato viene confrontato con il limite calcolato. Se lo studio dell'interferenza non è valido, il risultato non può essere interpretato; laddove il prodotto sopprime la reazione LAL, è necessario determinare un fattore di diluizione.
Rapporto di Endotoxin
- Farmacopea applicata e metodo
- Descrizione del campione, lotto e superficie
- Limite di endotossine calcolato
- Risultato dello studio sull'interferenza e fattore di diluizione
- Valore di endotossina misurato (EU/dispositivo o EU/mL)
- Confronto con il limite
Accreditamento
EUROLAB detiene un accreditamento riconosciuto a livello internazionale ottenuto da organismi di accreditamento parte degli accordi di riconoscimento multilaterale IAF e ILAC, secondo ISO / IEC 17025 per prove di laboratorio, ISO / IEC 17020 per ispezione e sorveglianza e ISO / IEC 17021-1 e ISO / IEC 17065 per certificazione di sistema e prodotto. Questa catena garantisce che i rapporti e i certificati emessi siano accettati in tutto il mondo.
Se questo test può essere offerto nell'ambito accreditato dipende dal prodotto e dallo standard applicato; poiché l'accreditamento è basato sul metodo, l'ambito viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Ambito e autorizzazioniRegolamenti correlati
- MDR (UE) 2017/745
- Requisiti della farmacopea
Medikal Cihaz Testleri — Cosa copre questo ambito di prova?
La sezione seguente descrive l'ambito a cui appartiene la prova Endotoxin; le condizioni e i criteri di accettazione di questa prova specifica sono riportati nelle sezioni precedenti. L'ambito specifico del vostro prodotto viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Le prove sui dispositivi medici dimostrano che un dispositivo è sicuro per il paziente e per l'utilizzatore e che mantiene le prestazioni previste. In questo ambito la sicurezza non significa solo evitare danni; anche il mancato svolgimento della funzione prevista del dispositivo è trattato come un rischio. Un monitor che non emette un allarme o una pompa che eroga la dose sbagliata costituiscono direttamente un evento di sicurezza del paziente.
Al centro dell'ambito vi è la GESTIONE DEL RISCHIO, ed è questo che distingue il settore medicale dagli altri. Il processo di gestione del rischio condotto secondo la ISO 14971 determina anche quali prove sono richieste. L'elenco delle prove non viene copiato da una tabella di norme; è derivato e giustificato in base alla destinazione d'uso del dispositivo, alla natura e durata del contatto con il paziente, all'ambiente d'uso e all'uso scorretto ragionevolmente prevedibile.
La valutazione consiste in diversi ambiti di lavoro separati, ciascuno con il proprio set di norme. La biocompatibilità segue la serie ISO 10993, la sicurezza elettrica del dispositivo la serie IEC 60601, la sterilizzazione la ISO 11135/11137/17665, l'imballaggio la ISO 11607, il software la IEC 62304 e l'usabilità la IEC 62366. Il sistema di qualità (ISO 13485) è il quadro che li unisce.
Le prove richieste sono determinate dalla CLASSE del dispositivo e dalla sua MODALITÀ DI CONTATTO CON IL CORPO. Un prodotto a breve contatto con la pelle e un impianto che entra nel flusso sanguigno non seguono lo stesso insieme di prove; l'ambito è stabilito da un piano di valutazione biologica preparato secondo la ISO 10993-1. Tale piano giustifica per iscritto quali endpoint sono richiesti e perché gli altri non lo sono.
In questo ambito l'imballaggio e la sterilizzazione sono considerati importanti quanto il dispositivo stesso. Per un dispositivo sterile, l'imballaggio non è un contenitore di trasporto ma la barriera che mantiene la sterilità; se la barriera viene violata, il dispositivo non è più sterile. I processi di imballaggio sono quindi convalidati e la durata di conservazione è supportata da dati di invecchiamento in tempo reale.
Per i dispositivi contenenti software, la valutazione si sposta dalle prove all'assicurazione di PROCESSO. La IEC 62304 definisce quali fasi di sviluppo e verifica devono essere seguite in base alla classe di sicurezza del software; la prova è la tracciabilità del processo di sviluppo. Non è il collaudo del software a renderlo sicuro, ma la documentazione del processo.
Il lato clinico è una colonna separata del fascicolo tecnico. I rapporti di prova mostrano che il dispositivo è tecnicamente sicuro; la valutazione clinica stabilisce che il dispositivo apporta il beneficio clinico previsto e che il rapporto beneficio-rischio è accettabile. Nessuno dei due sostituisce l'altro.
Gruppi di metodi in questo ambito
Biocompatibilità
Citotossicità, irritazione, sensibilizzazione cutanea, tossicità sistemica, emocompatibilità, genotossicità ed effetti locali dopo l'impianto. Gli endpoint richiesti sono stabiliti dal piano ISO 10993-1.
Sicurezza dei dispositivi elettrici
IEC 60601-1 sicurezza di base e prestazioni essenziali; requisiti EMC, allarme, usabilità e ambientali tramite le norme collaterali.
Convalida della sterilizzazione
Convalida dei processi di sterilizzazione con ossido di etilene, radiazioni o calore umido; studi di bioburden e livello di garanzia di sterilità.
Confezione
Integrità del sistema barriera sterile, resistenza della saldatura, simulazione della distribuzione e studi di shelf-life.
Prove microbiologiche
Determinazione del bioburden, prova di sterilità, endotossina batterica e, se richiesto, studi di convalida del supporto.
Software e usabilità
Evidenze del ciclo di vita IEC 62304 e valutazione incentrata sull'errore d'uso secondo IEC 62366.
Confusioni frequenti in questo ambito
- La sola citotossicità non è prova di biocompatibilità; l'insieme richiesto di endpoint è determinato e giustificato secondo la norma ISO 10993-1.
- Un certificato ISO 13485 non conferisce la marcatura CE; la classificazione secondo l'MDR, il fascicolo tecnico e il processo dell'organismo notificato procedono separatamente.
- L’invecchiamento accelerato non sostituisce l’invecchiamento in tempo reale; una dichiarazione sulla durata di conservazione è supportata da dati in tempo reale.
- Un cambio di materiale (fornitore, pigmento, metodo di sterilizzazione) può richiedere la ripetizione della valutazione biologica; non è un cambiamento silenzioso.
- Una valutazione effettuata senza le norme collaterali e particolari della IEC 60601-1 è incompleta; quali norme -1-x e -2-x sono state applicate deve comparire nel rapporto.
- I dispositivi diagnostici in vitro rientrano nell'IVDR e non nell'MDR, e le apparecchiature da laboratorio rientrano spesso nell'ambito IEC 61010-1.
Quali decisioni supportano questi risultati
- Fascicolo tecnico MDR/IVDR e valutazione dell'organismo notificato
- Completamento del piano di valutazione biologica
- Convalida di sterilizzazione e imballaggio
- Determinazione della shelf-life e delle condizioni di conservazione
- Determinazione dell'ambito della rivalutazione dopo una modifica di progettazione
Test correlati
Domande frequenti su Endotoxin
Il mio prodotto è sterile: perché è necessario un test delle endotossine?
L'endotossina è resistente al calore; sebbene la sterilizzazione uccida il batterio, non distrugge l'endotossina, che è un residuo della parete cellulare. Un prodotto sterile può quindi comunque provocare una reazione pirogenica e l'endotossina deve essere misurata separatamente.
Come viene determinato il limite delle endotossine?
Si calcola utilizzando la formula definita nella farmacopea, in base alla via di contatto del dispositivo e alla dose consentita. Per i dispositivi a contatto con il liquido cerebrospinale il limite è molto più basso; il calcolo deve essere riportato nel verbale.