Test di citotossicità — ISO 10993-5

Che cos'è Cytotoxicity?

Il test di citotossicità valuta in vitro se le sostanze rilasciate da un dispositivo medico o dal suo materiale mostrano un effetto tossico su una coltura cellulare. È il primo e più comune passo nella valutazione della biocompatibilità: essendo veloce, sensibile e privo di animali, viene utilizzato come test di screening.

Scopo di Cytotoxicity

Lo scopo è determinare se le sostanze che migrano dal materiale influenzano negativamente la vitalità, la proliferazione o la morfologia cellulare e decidere se procedere ad ulteriori test di biocompatibilità.

A quali prodotti si applica Cytotoxicity?

Strumenti chirurgici e impianti
Set di cateteri, cannule e tubi
Medicazioni e bende per ferite
Materiali dentali
Imballaggio e componenti a contatto con il dispositivo

In quali settori si utilizza Cytotoxicity?

Dispositivo medicoAssistenza sanitariaProdotti farmaceutici

Norme relative a Cytotoxicity

ISO 10993-5in vitro sitotoksisite test
ISO 10993-1
ISO 10993-12
USP<87>
ISO 11607imballaggio barriera sterile del prodotto finale test

Condizioni di Cytotoxicity

Linea cellulare: La linea cellulare di fibroblasti di topo L929 è comunemente utilizzata
Metodo: Test di estrazione, contatto diretto o diffusione su agar; scelto in base al dispositivo
Estrazione: Secondo ISO 10993-12; le condizioni comuni sono 24 ore a 37 °C o 72 ore a 50 °C
Valutazione: Percentuale di vitalità cellulare o grado di reattività (0–4)

Apparecchiatura per Cytotoxicity

Incubatore a CO₂
Gabinetto di biosicurezza
Microscopio a contrasto di fase invertito
Lettore di micropiastre (per il metodo MTT/XTT)
Materiali di consumo per colture cellulari

Requisiti del campione per Cytotoxicity

Il campione deve rappresentare il prodotto finale sterilizzato
Non materia prima: viene presentato il prodotto che ha attraversato tutti i processi di produzione e sterilizzazione
La quantità di campione viene determinata in base al rapporto superficie/estrazione prescritto dalla norma
È necessario dichiarare il tipo di dispositivo e la durata del contatto corporeo
Il metodo di sterilizzazione e, se applicabile, le informazioni sui residui devono essere condivisi

Durata di Cytotoxicity

Solitamente completato entro 1-2 settimane, compresa l'estrazione e l'incubazione della coltura cellulare.

Procedura di Cytotoxicity

1Il campione viene estratto secondo il rapporto superficie/volume prescritto dalla norma.
2La coltura cellulare viene preparata e si lascia formare un monostrato.
3L'estratto (o, per il contatto diretto, il campione) viene applicato alle cellule.
4I controlli positivi e negativi vengono eseguiti nelle stesse condizioni.
5Le cellule vengono esaminate al microscopio al termine del periodo di incubazione specificato.
6Se viene applicato un metodo quantitativo, viene misurata la vitalità cellulare.
7La reattività viene classificata e riportata.

Criteri di accettazione di Cytotoxicity

Il criterio di accettazione comune ai sensi della norma ISO 10993-5 è che la vitalità cellulare non scenda al di sotto del 70% del controllo. Nei metodi qualitativi il grado di reattività non deve superare il limite indicato nella norma (comunemente grado 2).

Valutazione dei risultati

Il risultato viene interpretato insieme ai controlli; se i controlli non mostrano il comportamento atteso, il test non è valido. Un riscontro citotossico da solo non significa che il dispositivo non è conforme — è necessario indagarne la fonte (solvente residuo, residuo di sterilizzazione, additivo).

Rapporto di Cytotoxicity

Norma applicata e revisione
Descrizione del campione, numero di lotto e metodo di sterilizzazione
Condizioni di estrazione (solvente, temperatura, durata, rapporto)
Risultati dei controlli positivi e negativi
Risultati dei test e valutazione
Valutazione e conclusione

Accreditamento

EUROLAB detiene un accreditamento riconosciuto a livello internazionale ottenuto da organismi di accreditamento parte degli accordi di riconoscimento multilaterale IAF e ILAC, secondo ISO / IEC 17025 per prove di laboratorio, ISO / IEC 17020 per ispezione e sorveglianza e ISO / IEC 17021-1 e ISO / IEC 17065 per certificazione di sistema e prodotto. Questa catena garantisce che i rapporti e i certificati emessi siano accettati in tutto il mondo.

Se questo test può essere offerto nell'ambito accreditato dipende dal prodotto e dallo standard applicato; poiché l'accreditamento è basato sul metodo, l'ambito viene confermato per iscritto in fase di offerta.

Ambito e autorizzazioni

Regolamenti correlati

MDR (UE) 2017/745
Piano di valutazione biologica ISO 10993-1

Medikal Cihaz Testleri — Cosa copre questo ambito di prova?

La sezione seguente descrive l'ambito a cui appartiene la prova Cytotoxicity; le condizioni e i criteri di accettazione di questa prova specifica sono riportati nelle sezioni precedenti. L'ambito specifico del vostro prodotto viene confermato per iscritto in fase di offerta.

Le prove sui dispositivi medici dimostrano che un dispositivo è sicuro per il paziente e per l'utilizzatore e che mantiene le prestazioni previste. In questo ambito la sicurezza non significa solo evitare danni; anche il mancato svolgimento della funzione prevista del dispositivo è trattato come un rischio. Un monitor che non emette un allarme o una pompa che eroga la dose sbagliata costituiscono direttamente un evento di sicurezza del paziente.

Al centro dell'ambito vi è la GESTIONE DEL RISCHIO, ed è questo che distingue il settore medicale dagli altri. Il processo di gestione del rischio condotto secondo la ISO 14971 determina anche quali prove sono richieste. L'elenco delle prove non viene copiato da una tabella di norme; è derivato e giustificato in base alla destinazione d'uso del dispositivo, alla natura e durata del contatto con il paziente, all'ambiente d'uso e all'uso scorretto ragionevolmente prevedibile.

La valutazione consiste in diversi ambiti di lavoro separati, ciascuno con il proprio set di norme. La biocompatibilità segue la serie ISO 10993, la sicurezza elettrica del dispositivo la serie IEC 60601, la sterilizzazione la ISO 11135/11137/17665, l'imballaggio la ISO 11607, il software la IEC 62304 e l'usabilità la IEC 62366. Il sistema di qualità (ISO 13485) è il quadro che li unisce.

Le prove richieste sono determinate dalla CLASSE del dispositivo e dalla sua MODALITÀ DI CONTATTO CON IL CORPO. Un prodotto a breve contatto con la pelle e un impianto che entra nel flusso sanguigno non seguono lo stesso insieme di prove; l'ambito è stabilito da un piano di valutazione biologica preparato secondo la ISO 10993-1. Tale piano giustifica per iscritto quali endpoint sono richiesti e perché gli altri non lo sono.

In questo ambito l'imballaggio e la sterilizzazione sono considerati importanti quanto il dispositivo stesso. Per un dispositivo sterile, l'imballaggio non è un contenitore di trasporto ma la barriera che mantiene la sterilità; se la barriera viene violata, il dispositivo non è più sterile. I processi di imballaggio sono quindi convalidati e la durata di conservazione è supportata da dati di invecchiamento in tempo reale.

Per i dispositivi contenenti software, la valutazione si sposta dalle prove all'assicurazione di PROCESSO. La IEC 62304 definisce quali fasi di sviluppo e verifica devono essere seguite in base alla classe di sicurezza del software; la prova è la tracciabilità del processo di sviluppo. Non è il collaudo del software a renderlo sicuro, ma la documentazione del processo.

Il lato clinico è una colonna separata del fascicolo tecnico. I rapporti di prova mostrano che il dispositivo è tecnicamente sicuro; la valutazione clinica stabilisce che il dispositivo apporta il beneficio clinico previsto e che il rapporto beneficio-rischio è accettabile. Nessuno dei due sostituisce l'altro.

Gruppi di metodi in questo ambito

Biocompatibilità
Citotossicità, irritazione, sensibilizzazione cutanea, tossicità sistemica, emocompatibilità, genotossicità ed effetti locali dopo l'impianto. Gli endpoint richiesti sono stabiliti dal piano ISO 10993-1.
Sicurezza dei dispositivi elettrici
IEC 60601-1 sicurezza di base e prestazioni essenziali; requisiti EMC, allarme, usabilità e ambientali tramite le norme collaterali.
Convalida della sterilizzazione
Convalida dei processi di sterilizzazione con ossido di etilene, radiazioni o calore umido; studi di bioburden e livello di garanzia di sterilità.
Confezione
Integrità del sistema barriera sterile, resistenza della saldatura, simulazione della distribuzione e studi di shelf-life.
Prove microbiologiche
Determinazione del bioburden, prova di sterilità, endotossina batterica e, se richiesto, studi di convalida del supporto.
Software e usabilità
Evidenze del ciclo di vita IEC 62304 e valutazione incentrata sull'errore d'uso secondo IEC 62366.

Confusioni frequenti in questo ambito

La sola citotossicità non è prova di biocompatibilità; l'insieme richiesto di endpoint è determinato e giustificato secondo la norma ISO 10993-1.
Un certificato ISO 13485 non conferisce la marcatura CE; la classificazione secondo l'MDR, il fascicolo tecnico e il processo dell'organismo notificato procedono separatamente.
L’invecchiamento accelerato non sostituisce l’invecchiamento in tempo reale; una dichiarazione sulla durata di conservazione è supportata da dati in tempo reale.
Un cambio di materiale (fornitore, pigmento, metodo di sterilizzazione) può richiedere la ripetizione della valutazione biologica; non è un cambiamento silenzioso.
Una valutazione effettuata senza le norme collaterali e particolari della IEC 60601-1 è incompleta; quali norme -1-x e -2-x sono state applicate deve comparire nel rapporto.
I dispositivi diagnostici in vitro rientrano nell'IVDR e non nell'MDR, e le apparecchiature da laboratorio rientrano spesso nell'ambito IEC 61010-1.

Quali decisioni supportano questi risultati

Fascicolo tecnico MDR/IVDR e valutazione dell'organismo notificato
Completamento del piano di valutazione biologica
Convalida di sterilizzazione e imballaggio
Determinazione della shelf-life e delle condizioni di conservazione
Determinazione dell'ambito della rivalutazione dopo una modifica di progettazione

Test correlati

Domande frequenti su Cytotoxicity

È sufficiente superare il test di citotossicità?

No. La norma ISO 10993-1 richiede che il set di prova venga determinato in base al tipo di dispositivo e alla durata del contatto con il corpo. La citotossicità è un test di screening; all'aumentare della durata del contatto e dell'invasività entrano in gioco la sensibilizzazione, l'irritazione, la tossicità sistemica e ulteriori test.

Posso inviare un campione della materia prima?

Non dovrebbe essere così. La valutazione viene eseguita sul prodotto finale sterilizzato; coadiuvanti tecnologici, agenti distaccanti e residui di sterilizzazione influiscono direttamente sul risultato e non sono presenti nella materia prima.

Il risultato è risultato citotossico: cosa dovrei fare?

È necessario indagare innanzitutto sulla fonte: solventi residui, prodotti chimici detergenti, residui di sterilizzazione (ad esempio ossido di etilene) o un additivo specifico sono cause comuni. Ripetere il test senza rimuovere la fonte solitamente dà lo stesso risultato.